病毒保存液中EDTA和tris的作用

北京雷根生物技术有限公司
Tris-EDTA 缓冲液(10×TE,pH7.4)
简介：
Tris-EDTA 缓冲液简称TE, 即Tris-EDTA buffer(10mM Tris ，1mM EDTA pH7.4)，用于溶解DNA 、保存DNA 等，是常用分子生物学试剂。

其主要原理是溶液中的金属离子容易破坏DNA ，而EDTA 可以螯合金属离子以达到保护DNA 的目的。

该试剂为浓缩液，经高压灭菌处理。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用去离子水稀释后使用。

注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。

2、 注意无菌操作。

3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。

相关：
编号 名称 R00193 Storage Tris-EDTA buffer(10×TE ,pH7.4) 500ml RT 使用说明书 1份 编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CC0023 D-Hanks 平衡盐溶液(1×,无酚红) DH0006
苏木素伊红(HE)染色液 R00017
EDTA 溶液(0.5mol/L,pH8.0) R00067
MES buffer(0.1mol/L,pH5.5) PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。

在293细胞中大量扩增腺病毒一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。

本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。

由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012病毒颗粒。

如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化，则必须至少3×108的细胞，这样才能正确分辨出病毒带。

对于蛋白表达，则根据需要可在任何一步扩增步骤中停止，离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提(根据蛋白类型的不同抽提上清或细胞沉淀)。

为优化时间进程，每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。

如果由于各种原因不能同步，则必须将病毒冻存，直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。

注意每次扩增都将会剩下一些病毒，这些病毒先不必丢弃，以便下一步扩增失败时备用。

每次扩增最好都用最低代的病毒颗粒，这样产生突变型病毒的可能性会大大降低。

操作步骤：1 在100mm 培养皿或75cm2培养瓶中加入10mlDMEM5%培养5×106293 细胞。

2 取0.5ul 首次扩增的病毒保存液，加入DMEM5%至1ml，混匀，这样稀释得到的MOI 值约为5。

3 移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单层，十字形慢慢晃动3 次，37℃ CO2 孵箱中培养90 分钟。

4 加入9ml DMEM5%。

5 再培养72 小时，这时在10ml 溶液中大约有5×109～5×1010个病毒颗粒，进行MOI 测定以估计病毒颗粒。

注：如果此时得到的病毒量已足够，可立即进行病毒滴度测定。

收集细胞，600×g 离心5 分钟沉淀细胞，去上清后加入最小体积(一般为原始体积的1/10 即1ml)病毒保存溶液重悬细胞。

-200C /370C 冻融3 次，台式离心机上以最大速率离心去除细胞碎片，收集上清，然后进行病毒滴定。

1、核酸抽提原理简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。

裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

经典的裂解液几乎都含有去污剂（如SDS、Triton X—100、NP-40、Tween 20 等）和盐（如Tris、EDTA、NaCl 等)。

盐的作用,除了提供一个合适的裂解环境（如Tris）,还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如EDTA）、维持核酸结构的稳定（如NaCl）等。

去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。

裂解体系中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。

也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂（如GIT、GuHCl 等) 裂解的，该方法已经成为了RNA 抽提的主流,却不是基因组DNA 抽提的主流。

最常用的纯化方法，一是PC 抽提+ 醇沉淀,二是介质纯化.第一种方法是利用PC 对裂解体系进行反复抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分离；再用醇将核酸沉淀下来，实现核酸与盐的分离.第二种方法则是利用某些固项介质,在某些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。

高盐沉淀去除蛋白质是第一种纯化方法的一个变体,省略了PC 操作的麻烦。

当然,也有不纯化的抽提方法，但是用途多局限于简单的PCR。

其它杂质–如多糖、多酚等- 的去除，基本上都是在这两种方法的基础上，通过增加一些特别的试剂，或者增加一些额外的步骤来实现的。

2、了解你的实验样品如果你研究某个实验样品，并且要抽提它的核酸，以下的信息一定要先行收集：该样品的核酸含量、酶含量、特殊杂质含量。

如果你对样品的特点一无所知，当样品稍微有一点复杂时，抽提核酸的实验就会碰到许多问题。

以血液为例，如果你不知道鸟的血液中有核细胞的含量是人血的千倍左右,而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组DNA,怎么可能成功？失败了又怎么知道原因所在？同时，只有对实验样品有所了解，才能正确选择裂解方法。

病毒保存液和细胞保存液的区别一、病毒保存液病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作，是采样管内浸末采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。

通常分为两种，一种是非灭活型，能够保护病毒的蛋白和核酸，另一种是灭活型，通常含有灭活病毒的裂解盐，裂解蛋白而保护核酸。

1、灭活型：添加有裂解盐的病毒保存液就是灭活型的病毒保存液，里面含有的Tris、裂解盐、EDTA等主要目的是裂解核酸而释放出核酸，从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测，以此判断样本是否含有病毒特征核酸，即是否感染病毒。

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类，是生命的最基本物质之一。

病毒结构单一，就只含有一种核酸和蛋白质，因此检测出特征核酸就检测除了病毒。

病毒属于寄生生物，采样后体外无法存活，如果不能及时检测，就需要放入病毒保存液中。

为了保护病毒检测环境的安全性，就需要加入裂解盐来灭活病毒，释放出可以被检测的核酸即可。

2、非灭活型：除了灭活型的病毒保存液，此外还有非灭活型病毒保存液，不含裂解盐，但是保存的病毒完整性更好，检出率更高，除了核酸检测外还可以用于其他研究。

灭活型病毒保存液则使用上更安全，操作环境要求也不用那么严格，各有各的优势，目前研究的非灭活病毒保存液的成分主要为Hank's液基础，在Hank's液基础之上，还添加了诸如庆大霉素、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五组分）、生物缓冲剂HEPES、氨基酸、冷冻保护剂、甘油等多种组分：3、病毒样本采集方法：a .鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。

取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法釆集另一侧鼻孔。

上述两根拭子浸入同一含3成釆样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。

核酸采样管里的红色液体是什么？洒出来对人体有害吗？权威解释来了！
核酸采样管里的红色液体是什么？
采样管中的液体叫做“病毒样本保存液”，它的主要作用是灭活病毒、裂解新冠病毒的蛋白质外壳，以及保存我们的核酸。

液体中的成分有胍盐、EDTA、酚红、缓冲液等。

其中，最重要的成分胍盐，常用的是异硫氰酸胍和盐酸胍，它可以破坏病毒表面的蛋白外壳，释放出核酸，在下一步的核酸检测中确认是不是有被新冠病毒感染；同时它也可以使病毒失去活性和感染能力，避免在采样、转运和检测过程中扩散风险。

第二种是EDTA组分（叫乙二胺四乙酸），它的主要作用是抑制新冠病毒核酸的降解，提高核酸检测的质量，保证后续病毒扩增的准确性。

缓冲液是维持管子里的酸碱度（pH值）。

而液体之所以会变成红颜色，是因为里面含有一种叫做“酚红”的酸碱指示剂，指示剂在中性时是红色的，当溶液变成碱性时就变成紫色，酸性时还会变成黄色。

如果保存液变质了，或被细菌污染了，pH值发生改变，就会由红色变成黄色。

在核酸检测人员将样本加到无色样本孔里时，红颜色也可以让检测人员观察是不是加错了，或有没有漏加。

洒出来对人体有害吗？
液体中最重要的成分胍盐遇水会分解成氨和尿素，氨在肝脏的代谢下会转化成尿素，所以胍盐的毒性基本也可以等同于尿素。

而多余的尿素在我们身体里会通过肾脏随尿液排出。

如果洒出来，低剂量接触基
本没有风险，万一沾在皮肤上也不用太过担心，清水洗净即可。

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。

当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

EDTA：〔1〕螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用〔DNase作用时需要一定的金属离子作辅基〕;〔2〕EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反响要求有较低的离子强度的环境。

2．溶液II－NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。

但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。

在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

SDS：SDS是离子型外表活性剂。

它主要功能有：〔1〕溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。

〔2〕解聚细胞中的核蛋白。

〔3〕SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。

但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中〔用RNase去除RNA时〕受到干扰。

3. 溶液III--3mol／L NaAc〔pH4.8〕溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH 至4.8，必须参加大量的冰醋酸。

所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。

用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。

而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。

前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。

eb buffer成分
EB Buffer是一种缓冲液，常用于分子生物学实验中。

它的主要成分包括：
1. Tris-HCl：一种缓冲剂，用于维持溶液的酸碱度。

2. EDTA（乙二胺四乙酸）：一种螯合剂，用于络合金属离子，防止酶的活性受到金属离子的影响。

3. NaCl（氯化钠）：用于调节溶液的离子强度和渗透压。

4. Triton X-100：一种非离子表面活性剂，用于破坏细胞膜，促进细胞裂解和蛋白质的提取。

5. Glycerol（甘油）：用于增加溶液的黏稠度，稳定蛋白质，并提供能量。

6. 纯水：用于稀释其他成分和溶解固体试剂。

EB Buffer主要用于核酸电泳实验中，用于染色和可视化DNA或RNA分子。

核酸提取常见试剂地作用原理核酸提取是分子生物学研究中的基础步骤之一，常用于从细胞或组织中提取和纯化核酸。

核酸提取试剂包括细胞裂解缓冲液、蛋白酶、盐溶液、有机溶剂等。

核酸提取试剂的作用原理主要涉及以下几个方面：1.细胞裂解缓冲液：细胞裂解缓冲液是为了打破细胞膜和核膜，使细胞内的核酸暴露出来。

细胞裂解缓冲液一般含有一些离子和试剂，如EDTA、SDS等。

EDTA可以螯合离子，使核酸不被酶降解。

SDS则可以破坏细胞膜和核膜的完整性，使核酸释放出来。

2. 蛋白酶：蛋白酶的作用是降解核酸分子上的蛋白质，使核酸与蛋白质分离。

在核酸提取的过程中，蛋白酶可以去除核酸表面的蛋白质，从而提高核酸的纯度。

常用的蛋白酶有蛋白酶K和蛋白酶ase。

3.盐溶液：盐溶液的作用是使DNA在溶液中凝集并沉淀。

盐的高浓度可以中和DNA的负电荷，使DNA之间的静电斥力减弱，从而导致DNA分子的凝集和沉淀。

4.有机溶剂：有机溶剂在核酸提取中起到萃取作用，使DNA从细胞裂解液中分离出来。

有机溶剂常用的有酚类、氯仿和异丙醇。

酚类溶剂可以破坏细胞和核膜的完整性，同时与DNA形成无水醇相互作用，促使DNA分离出来。

氯仿可以和DNA结合，并与水进行分配，从而加速DNA的沉淀。

异丙醇则可改变溶液的表面张力，使DNA分子凝胶化和沉淀。

5.离心：离心是核酸提取中的一个重要步骤。

通过离心，可以将细胞碎片、蛋白质、碎屑等杂质与纯净的核酸分离开来。

离心的原理是通过旋转离心机，利用离心力将混合液中的成分分离开来，使沉淀物和上清液分离。

总的来说，核酸提取试剂是通过改变细胞的环境和物理化学性质来实现核酸的分离纯化。

通过使用细胞裂解缓冲液打破细胞膜和核膜，加入蛋白酶降解蛋白质，使用盐溶液凝集和沉淀DNA，加入有机溶剂进行DNA的萃取，最后通过离心分离杂质和DNA。

这些步骤综合起来，能够从复杂的样品中纯化出相对纯净的核酸。

两种病毒保存液的比较：灭活与非灭活简介：病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作，是采样管内浸末采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。

通常分为两种，一种是非灭活型，能够保护病毒的蛋白和核酸，另一种是灭活型，通常含有灭活病毒的裂解盐，裂解蛋白而保护核酸,两者有着各自不同的特点，有着不同的应用方向。

一、灭活型病毒保存液：核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类，是生命的最基本物质之一。

病毒结构单一，就只含有一种核酸和蛋白质，因此检测出特征核酸就检测除了病毒。

病毒属于寄生生物，采样后体外无法存活，如果不能及时检测，就需要放入病毒保存液中。

为了保护病毒检测环境的安全性，就需要加入裂解盐来灭活病毒，释放出可以被检测的核酸即可。

灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液，里面添加有高浓度的裂解盐，能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活，可以有效防止操作员二次感染，同时又含有Rnase酶抑制剂，能保护病毒核酸不被降解，里面含有的Tris、裂解盐、EDTA 等主要目的是裂解核酸而释放出核酸，从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测，以此判断样本是否含有病毒特征核酸，即是否感染病毒。

灭活型保存液能在常温下保存相对较长的时间，节省了病毒样品保存以及运输的成本。

灭活型病毒保存液产品的特点：1.操作使用简单，无需配液，体系内含有高效病毒裂解液，采样后即刻灭活病毒，有效防止二次感染风险，保障运输及检测人员安全；2.病毒DNA/RNA可在常温保存与运输1周不降解，按大多数商业化试剂盒进行提取后，获得的DNA/RNA质量好，得率高，可完成各种基因检测及分析实验，如PCR、qPCR等，同时节省运输成本；3.内含核酸RNA酶抑制剂，最大化程度保护病毒核酸稳定不被降解，大幅提高核酸提取效率。