ACE的作用机理
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ACE 的作用机理：
在人的生理过程中，血压的调节主要受到肾素—血管紧张素系统和激肽—激肽生成酶系统相互作用控制的。
肾素进入血液，将血浆中的血管紧张素原水解为血管紧张素Ⅰ，然后再血管紧张素转化酶（ACE ）的作用下，将末端二太切下来，转换成血管紧张素Ⅱ可加强心肌的收缩，造成血压的升高。
另一方面，激肽—激肽生成酶系统也受到ACE 控制，它可使具有血管舒张作用的舒缓激肽转化为没有活力的缓释肽，两个系统在ACE 的协同作用下造成了人体内血压的升高。
目前大量研究表明，如果可以抑制ACE 的活性作用，就能起到降血压作用。
ACE 酶→ACE Ⅰ→ACE Ⅱ（能使促使血管平滑肌收缩，导致血压升高）
我们需要分离出酸奶上清液中ACE 抑制剂。
首先:发酵乳清的制备
10%的脱脂乳分装在试管中，在90℃下灭菌15min 。
杀菌后冷却到37℃，无菌条件下，以4%的量接种乳酸菌菌种，37℃恒温培养24h 。
如此在10%的脱脂乳上将乳酸菌菌种活化3代。
活化后的乳酸菌以4%接种量接种到10%的脱脂乳中，37℃恒温发酵培养。
分别取发酵5h ，7h ，9h ，11h ，13h ，15h 后样品2mL,8000r/min,4℃，离心15min 。
收集上清液，再用5mol/L 的NaOH 溶液将pH 值调节到8.3，8000r/min,4℃，离心15min 。
收集上清液，测定ACE 抑制率。
发酵乳中ACE 抑制率的测定：
ACE 抑制率的测定是利用Cushman 和Cheung 的方法。
根据实验要求，实验方法稍作改动。
具体方法如下：
10mL 试管中加入250μL 的5mmolHHL （ 用0.3mol/L NaOH 的0.1mol/L 硼酸盐缓冲液pH8.3，将HHL 固体配成5mmol 马尿酸溶液）和80μL 的发酵乳上清液，在37℃下放置5min 。
再加入20μL 的ACE 溶液（0.1U/mL ），在37℃反应30min 。
之后加入250μL 的1mol/L 的HCl 溶液终止反应。
再加入1.7mL 的乙酸乙酯，15s 充分振荡混匀，静置10min 。
用移液管吸取1mL 的乙酸乙酯，在真空干燥箱中90-100℃干燥30min 左右。
加入一定量的蒸馏水，混匀。
用紫外分光光度计在228nm 处测其吸光度（实验重复3次）。
ACE 抑制率的计算：ACE 抑制率（%）=C B A
B --×100%
A ：含发酵乳乳清和ACE 溶液的吸光度
B ：不含发酵乳乳清样品，但含有ACE 溶液的吸光度
C ：蒸馏水，不含ACE 溶液的吸光度(空白对照)
用膜粗分不同肽段：
ACEI 的分离纯化：高效液相色谱法
以超纯水和乙腈为洗脱液(各含0.1% 三氟乙酸)，进样量0.5ml，洗脱流速1.0ml/min，检测波长215nm，乙腈浓度梯度变化：0 ～60min，乙腈：0%～80%；60～8 0 m i n，乙腈：8 0 %～0 % 。
对洗脱所得各峰分别收集浓缩，测定活性。
改变洗脱条件，对活性最高的组分再次分离纯化，收集活性最高的组分。
如此反复，直至得到经反相-高效液相色谱分析柱分析为单一成分的高活性A C E I 。
反相高效液相色谱：
进样5μl，洗脱流速0.5ml/min，检测波长215nm，乙腈浓度梯度变化：
0～60min，乙腈 0%～80%；60～80min，乙腈 80%～0 % 。
