β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法：UPLC-MS-4216：50T/24S试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2支2-8℃保存试剂二液体42mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂一：临用前取1支加1.6mL蒸馏水溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；2.标准品：10mg无水葡萄糖。

临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存2周。

β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。

在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。

β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。

Fucoidanβ-1,3-GA Reducing SugarReducing Sugar+3,5-Dinitrosalicylic Acid3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

1.1包装规格：12人份/盒1.2主要组成成分：校准曲线：二维码。

质控范围批特异，详见标签。

2.1外观试剂盒完整无破损，试剂盒内各组分齐全、无破损、渗透；盒上印刷的标识以及瓶签、盒签上的字迹清晰完整，易识别。

2.2装量试剂盒的液体试剂净含量应不低于标示量。

2.3溯源性根据GB/T21415规定了校准曲线的溯源过程，溯源至企业工作校准品。

2.4准确度回收率应在80%～120%的范围内。

2.5检出限检出限应不高于40pg/mL。

2.6线性试剂盒在浓度为[50,50000]pg/mL的线性范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。

2.7重复性测定高、低两个浓度水平的样本，测定结果的变异系数CV（％）值应不大于10%。

2.8特异性与浓度分别为50ng/mL的曲霉菌半乳甘露聚糖、念珠菌甘露聚糖、革兰阴性菌脂多糖均无交叉反应，检测结果均应不超过检出限。

2.9批间差用3个不同批号的试剂盒分别检测两个浓度水平的样本，3个批次试剂盒之间的批间变异系数CV（％）应不大于15％。

2.10质控品赋值有效性重复测定试剂盒内质控品各3次，每次测定结果均应在质控品测定值允许的范围内。

2.11质控品批内瓶间差取同一批号10支质控冻干品进行检测，所有瓶内重复性检测结果的变异系数CV（%）值应不大于10%。

2.12稳定性2.12.1效期稳定性试剂盒按要求在2℃～8℃放置，有效期12个月，取效期末的试剂盒进行检测，各项指标仍符合2.4～2.8的要求。

2.12.2质控品复溶稳定性质控品溶解后置2℃～8℃保存14天后，取质控品进行检测，结果应符合2.10、2.11的要求。

声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。

本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。

为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。

如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。

售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。

2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。

3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。

（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。

5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。

5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。

6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。

7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。

常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。

附1真菌（1-3)—β—D葡聚糖检测标准操作规程1.目的规范真菌(1—3）-β-D葡聚糖检测的操作规程,保证结果准确性。

2.原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1—3)—β—D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。

利用(1—3)—β—D葡聚糖标准品建立β-D—葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的（1—3）- β-D葡聚糖含量.3.试剂真菌（1-3）—β-D葡聚糖检测试剂盒,湛江安度斯生物有限公司。

试剂盒包装规格:20人份/盒。

复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。

若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用.不能反复冻融试剂溶液.4.检测设备: LKM动态试管检测仪。

5.实验用具：250 μl无热原吸头、20—200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂）.6.标本采集及送检要求6.1标本采集要求6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。

6.2标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。

若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。

7.实验操作7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热,一段时间后发出哔的一声,试管仪温度达到37℃，待用;7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1~2 ml，以400 g离心10分钟；7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃试管恒温仪中加热10分钟；7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出,使其降至室温即可，即为1：10稀释的样品供试溶液；7.5取β—G试剂1支,开启；7.6取β-G试剂复溶液1支,开启后用移液器取0。

微生物检验实验室G试验标准操作规程1．目的规范G试验标准操作规程。

1.操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。

2.用途：4．原理真菌（1，3）-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝固酶原等，发生凝固蛋白原转变的级联反应从而引起吸光度的变化，根据检测气吸光度的变化从而对真菌（1，3）-β-D葡聚糖浓度进行定量，试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素机表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性脂多糖有特异性屏蔽作用。

5．样本要求5.1血清的制备：用一次性无热源真空采血管采静脉血4ml，进行3000rpm/min离心10-15min分得血清2小时内检测。

5.2血清保存：标本需冷藏于2-8℃下不超过24小时避免反复冻融。

产品如果需要运输，则应该冷藏运输。

5.3标本前处理：取上述血清0.1ml，加入0.9ml样品处理液中，混匀后70℃孵育10min，取出后立刻放入冷却槽中冷去5min，即为待测血清样品。

6．操作步骤：取待测血清0.2ml直接加入酶反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9*65mm标准无热源平底试管中，然后再加入0.1ml反应主剂溶液，混匀后，插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后检测系统自动计算出待测血清中真菌（1，3）-β-D葡聚糖含量。

注：每批试剂盒由厂家提供参考标准曲线。

定标使用真菌（1，3）-β-D 葡聚糖纯品，纯度>98%。

7.结果判断结果解释：参考值：正常血清真菌（1，3）-β-D葡聚糖值<60pg/ml。

60pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）：60-100pg/ml之间，为观察期，应连续检测。

100pg/ml以上，怀疑为深部真菌将感染，建议临床结症状治疗。

8.注意事项8.1、只能检测（1，3）-β-D葡聚糖含量，不能区分真菌种属，不能检测接合菌和隐球菌。

8.2、实验操作应在无菌无热源的环境下，避免微生物细菌污染8.3、无菌无热源的采血管（建议采用BD血清管），保证试验数据的准确。

葡聚糖内-1,3-β-葡糖酶葡聚糖是一种多糖，由许多β-葡萄糖分子组合而成。

这种多糖在自然界广泛分布，包括植物、真菌、细菌和动物中。

葡聚糖在这些生物中具有多种重要功能，如提供结构支持、膜层保护、细胞间信号传递和免疫应答等。

葡聚糖内-1,3-β-葡糖酶（PG）是一种能够降解葡聚糖的酶类。

它可以催化葡聚糖的水解反应，将其分解成低聚糖和单糖。

目前，许多真菌中的PG已被分离和鉴定，其中以酵母菌的PG最为广泛研究。

PG对于细胞生长和分化、细胞壁合成和重组、藻类和真菌的招募、植物抵御病原菌的作用等有重要影响。

PG的生物学功能也被广泛研究和应用于医药和农业领域。

近年来，PG的研究是一个非常热门的课题。

研究人员通过分子生物学和基因工程技术得到了大量的PG基因序列。

同时，PG的表达也受到广泛关注，特别是在微生物发酵、细胞壁结构和医药领域。

在微生物发酵中，PG可以通过控制其基因表达来产生大量低聚糖和单糖。

这些产物对某些工业生产和食品添加剂有广泛的应用，比如说肉制品和面包。

在真菌和植物内，PG对于细胞壁合成和重组起着重要作用。

在细胞壁合成中，PG可以加速和协调细胞壁的合成。

在细胞壁重组中，PG的表达可以加快细胞壁的降解和合成，使细胞获得更好的结构和保护。

在医药领域，PG被广泛研究，用于治疗某些疾病。

例如，PG可以作为免疫调节剂，增强宿主对病原菌的抵御能力。

它也可以用作抗肿瘤药物，破坏肿瘤细胞壁，促进细胞凋亡。

总之，PG在生物界中是起着重要作用的酶类。

它拥有丰富的生物学功能和广泛的应用价值。

我们期待在未来的研究中能够更深入地了解PG的作用机制，扩大它的应用范围，并进一步应用于医药和农业领域。

β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖（也称为1,3-β-D-葡聚糖或胞外多糖）是一种可溶性聚糖，常用于农业、食品和医药工业。

测定β-1,3-葡聚糖的含量可以通过以下方法之一实现：
1. 紫外可见光谱测定：将葡聚糖溶液经稀酸或酶处理后，通过
测定其在特定波长下的吸收光强度来确定其浓度。

这种方法对于测定
高浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为简便。

2. 蒸发法：将葡聚糖溶液加热至葡聚糖变为糊状物，并将其继
续加热蒸发至干燥。

然后称量得到的干燥物的质量，通过质量差来计
算葡聚糖的含量。

这种方法对于测定低浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为适用。

3. 原子吸收光谱法：通过将葡聚糖溶解后，在特定条件下使用
原子吸收光谱仪测定其特定金属离子沉淀物的质量，从而计算出含量。

这种方法对于含有特定金属离子的葡聚糖样品测定较为准确。