图 (1) 发光细菌的发光反应模式。E1: 细菌荧光素酶，由α、β 2个亚基组 成，α为40000~42000D，β为37000~39000D。单独α、β亚基均无发光活性， 只有α、β共存时才有活性。E2: NADH：FMN氧化还原酶，分子量为 3000D，对FMN有高度特异性。E3: 脂肪酸还原酶。
发光细菌的培养：
(1)培养液：酵母浸出汁5.0g，胰蛋白胨5.0g，NaCl 30.0g， NaHPO4 5.0g，KH2PO4 1.0g，甘油3.0g，加蒸馏水至 1000ml,pH调至7±0.5，趁热分装于150ml三角瓶中，每瓶约
50ml，塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经115℃、20-30min高
实验目的与内容
一、实验目的
1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；
2. 根据发光细菌发光强度的变化判断
受试化合物的毒性；
3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
二、实验内容
1. 发光细菌的复苏；
2. 发光细菌发光强度的测定；
3. 受试化合物毒性的计算。
实验目的与内容
发光细菌是一种非致病性的普通细菌，具有发光能力，在正 常条件下经培养后能发出肉眼可见的兰绿色光，这种发光过程 是细菌体内一种新陈代谢反应，是氧化呼吸链上的一个侧支。 发光细菌的发光反应模式图(1)所示。发光细菌发光反应途径可 简单概述为： FMNH2＋O2＋RCHO→荧光＋FMN＋H2O+RCOOH （1） 这个发光现象是呼吸代谢耦合，作为光能被散发。当细菌体 内合成萤光酶、萤光素、长链脂肪醛时，在氧的参与下发生生 化反应，反应的结果便产生光。
实验原理
发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发 光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物 等) 接触后, 其发光强度即有所改变。变化的大小与受试物的浓 度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。通常认为外来 受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光 反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如 细胞呼吸等)。 毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线 性负相关关系。因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大 小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。
