急性毒性试验-LD50的测定

精品文档药物急性毒性试验LD 50的方法对全新结构的药物或中草药复方，先通过小批量动物的摸索，找出0%和100%估计致死量（即Dmin和Dmax），再求出i值。

（1）用10倍稀释的药物浓度系列，用少量动物（每组2~3只），找出大致死亡范围。

如:上述结果提示，大致死亡范围为：50~500 mg/kg。

（2）再用1、2、4、8……等2倍稀释的药物浓度系列，每组4只，找出Dmin和Dmax。

如：Dmax :当出现4/4死亡时，如其前一组为3/4死亡，则取4/4组的剂量为Dmax ;如前一组为1/4或2/4死亡，考虑到4/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于70%，为慎重起见，可将4/4组的剂量乘以2作为Dmax。

Dmax=400 X 70% X 2=560 mg/kgDmin :当出现0/4死亡时，如其后一组为1/4死亡，则取0/4组的剂量为Dmin ;如后一组大于1/4，考虑到0/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于70%，为慎重起见，可将0/4组的剂量除以2作为Dmin。

Dmin=50 十70% 十2~ 35 mg/kg（3）本法用较少的动物和药物，寻找出正式实验时最高死亡率不低于70%，最低死亡率不高于30%点剂量范围在确定了Dmax和Dmin以后，可求得组间距（i值）：lg Dmax-lgDmini= ------------------------------n-1（4）以Dmin的对数为起点，向上退出n组动物的各组剂量的对数值，求出反对数即可得出各组的剂量值。

注意：①LD50测定中剂量组数的设计，除符合统计学要求外，还应根据预试验所提供的药物的毒性情况而定。

②一般而言，在实际工作中，设4~5个剂量组，组距以0.65~0.85为宜。

③小鼠每组10只（雌雄各半），大鼠不应少于6~8只。

.药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。

(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。

2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。

2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。

口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。

水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。

给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。

大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。

3.测定LD:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。

给受试物后立即观察50动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。

详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD值及95%可信限。

504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。

死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。

若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。

(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。

LD 值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的50倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。

急性毒性试验-LD50的测定急性毒性试验是一种通过给实验动物注射、灌胃或其他途径给予高剂量试验物质来评估其致死或严重的毒性反应的试验。

LD50是一种常用的急性毒性指标，表示半数实验动物在接受单位剂量试验物质后死亡的剂量。

本文将介绍LD50的测定方法和其应用。

一、LD50的测定方法1. 实验动物的选择LD50实验通常使用小鼠、大鼠、兔子和狗等动物进行。

选用实验动物需要秉持道德原则，并考虑到动物的生物学特征、毒物代谢能力等方面的因素。

例如，小鼠和大鼠体型较小、代谢能力较低，适合于测定具有代谢性毒性的化合物的LD50；兔子和狗体型较大，代谢能力较强，适合于测定纯化、非代谢性毒性的化合物的LD50。

2. 给药途径和剂量选择通常使用口服、皮下注射、静脉注射等给药途径。

对于口服试验，需要注意试验物质的水溶性和毒性，对于毒性高的化合物，通常使用灌胃的方式。

实验的剂量需要考虑到实验动物体型、种类、代谢能力等因素，并进行逐步递增以确定LD50。

3. 实验计划设计实验计划设计需要考虑到试验物质的毒性、剂量效应关系和死亡率等因素。

一般采用正反两次递增的方法，进行急性毒性试验评估。

根据试验物质的毒性情况和实验者的安全考虑，同时采取风险预警措施。

4. 数据处理和计算完成实验后，需要统计每个剂量组的死亡率和死亡时间。

按照统计学原理，可以根据实验数据计算出LD50值。

LD50值表示使用单位剂量试验物质对半数实验动物致死的剂量。

该值越小，试验物质的毒性越高。

二、LD50的应用LD50值可以作为急性毒性评估的定量指标，用于比较不同化合物的毒性。

在化学品、药品等领域里进行LD50测定可以帮助人们更好地预测和评估一些原料与产品的安全性，以便于过程优化和产品开发，同时为相关政策制定提供科学依据。

LD50值的应用最为广泛的领域是毒性测试和安全性评估。

在毒理学和环境毒理学领域里，常用LD50为评估的标准；在某些国家的法律法规中，也要求企业对使用的化学品或产品进行毒性测试，以保证工人和消费者的安全。

中国药典ld50方法摘要：一、引言二、LD50方法的定义和作用三、中国药典LD50方法的具体步骤四、实验动物的选择与处理五、剂量设计与给药途径六、观察期与死亡率统计七、结果分析与LD50值的计算八、应用与局限性九、总结正文：一、引言在中国药物研究和开发过程中，安全性评价是至关重要的环节。

LD50（Lethal Dose 50）试验是毒性试验中最常用的一种方法，用于评估化学物质的急性毒性。

本文将详细介绍中国药典LD50方法的操作流程、注意事项及其在药物安全性评价中的应用。

二、LD50方法的定义和作用LD50方法是指通过一次性给予实验动物不同剂量的化学物质，观察其在一定时间内产生的毒性反应，以半数动物死亡剂量作为评价指标。

该方法有助于了解化学物质的急性毒性程度，为药物的研发和生产提供安全性依据。

三、中国药典LD50方法的具体步骤1.实验动物的选择：根据实验需求选择合适的动物种类和品系，一般选用小鼠、大鼠等常见实验动物。

2.动物处理：实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。

给动物适应环境，消除恐惧感。

3.剂量设计与给药途径：根据化学物质的性质，选择合适的剂量范围和给药途径。

通常采用口服、腹腔注射、皮下注射等途径。

4.观察期与死亡率统计：给药后观察动物的毒性反应，如行为异常、呼吸急促、腹泻等。

记录观察期内动物的死亡情况，计算死亡率。

5.结果分析与LD50值的计算：根据实验数据，绘制剂量-死亡率曲线，计算LD50值。

通常以剂量对数作为横坐标，死亡率作为纵坐标。

四、实验动物的选择与处理1.选择健康、年龄相近、体重均匀的动物。

2.实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。

3.给动物提供适宜的生活环境，保持清洁、安静、温暖、通风良好。

4.实验前对动物进行适应性饲养，使其适应实验环境。

5.实验当天，给动物称重，记录体重。

五、剂量设计与给药途径1.设计剂量时，应充分考虑化学物质的毒性、动物种属、给药途径等因素。

实验一、LD50的测定[目的] 通过测定药物LD50的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性试验的常规。

[材料] 小鼠50只(体重17－25g，雌雄各半) 注射器及针头1. 探索剂量范围取小鼠8-10只，以2只为一组分成4-5组，选择组距较大的一系列剂量，按腹腔注射哈顿佐剂，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0％及100％死亡率(至少应找出引起20％—80％死亡率)剂量的所在范围。

2. 进行正式试验在预初试验所获得的0％和100％致死量范围内，选用5个剂量按等比级数增减；尽可能使半数组的死亡率都在50％以上，另半数组的死亡率都在50%以下。

每组10只左右，动物的体重和性别要均匀分配。

完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。

最好先从中剂量组开始，以使能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。

LD50测定中应观察记录的项目：1、实验各要素：实验题目，实验日期，室温，检品的批号、规格、来源、理化性状、配制方法及所用浓度等；动物品系、来源、性别、体重、给药方式及剂量(药物的绝对量与溶液的容量)和给药时间等。

给药后各种反应；潜伏期(从给药到开始出现毒性反应的时间)；中毒现象及出现的先后顺序，开始出现死亡的时间；死亡集中时间；末只死亡时间；死前现象。

逐日记录各组死亡只数。

尸解及病理切片：从给药时开始记时，凡两小时以后死亡的动物，均及时尸解以观察内脏的病变，记录病交情况．若有肉限可见变化的则需进行病理检查．整个实验一般要观察7-14天，观察结束时，对全部存活动物称重，尸解，同样观察内脏病变并与中毒死亡鼠尸解情况相比较。

当发现有病变时，也同样作病理检查，以比较中毒后病理改变及恢复情况。

2、结果计算根据试验设计，采用相应的方法计算LD50，一般采用按Reed－Muench法计算或寇氏改进法karber法。

实验二、急性毒性试验试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官和观察指标的设计提供参考信息等。

实验一急性毒性试验（改进寇氏法）一、目的与要求1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。

2、观察马钱子的毒性反应。

二、实验原理急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。

药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。

致死量的测定也较准确。

在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。

致死量的测定常以半数致死量为标准。

半数致死量是指能够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。

由于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。

LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。

以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试验体重相差不得超过1 0克）健康大鼠作实验动物。

性别相同或雌雄各半。

（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床所采用的相同。

溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。

值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。

若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的LD50。

口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。

(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。

观察期间应逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。

（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。

正式试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4～5个剂量组，每组动物数为10～20只。