粗多糖的提取与纯化之脱色

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多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。

首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。

其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。

水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。

稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。

稀碱法适合于提取碱溶性糖。

然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。

第四步是沉淀多糖。

大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。

常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。

最后是除去蛋白质。

除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。

得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。

多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。

纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。

此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。

(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。

纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。

因此，测得的分子量一般为平均分子量。

过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。

目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。

1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。

海带硫酸化多糖的提取及纯化
海带硫酸化多糖的提取及纯化
对海带硫酸化多糖的水提法与酶解法进行比较,发现酶提法效果较好,粗提得率较水提法提高了85.9%,纯化后得率提高了43.6%.纯化过程中,通过正交实验得出CTAB沉淀LPS的最佳最佳优化条件为1%粗糖液:5%CTAB(V/V)为3:2,沉淀时间6 h,离心时间12 min.经单因素实验确定了树脂D315的脱色条件为:1%多糖液与树脂的体积质量比为为100:1(V/W),脱色时间6 h,pH值5.0,温度40℃.
作者：程斌宋加金赵云峰CHENG Bin SONG Jia-jin ZHAO Yun-feng 作者单位：程斌,赵云峰,CHENG Bin,ZHAO Yun-feng(曲阜师范大学生命科学学院,山东,曲阜,273165)
宋加金,SONG Jia-jin(曲阜师范大学科研处,山东,曲阜,273165)
刊名：聊城大学学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF LIAOCHENG UNIVERSITY 年，卷(期)：2009 22(2) 分类号：Q946.3 关键词：海带硫酸多糖提取纯化。

多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。

原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。

温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。

得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。

也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。

然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。

然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。

将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。

干燥后可得粉末状的粗多糖。

微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。

由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。

而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。

聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。

超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。

精品整理
桑黄粗多糖分离纯化的工艺
多糖，又称多聚糖，是一类由相同或不同的单糖及糖醛酸通过糖苷键连接缩合而成的重要生物大分子。

由相同的单糖组成的多糖称为均多糖，如淀粉、纤维素等；由不同的单糖组成的多糖称为杂多糖，如阿拉伯胶等。

目前已发现的天然多糖有数百种，广泛存在于动物、植物、菌物和微生物中。

桑黄粗多糖脱蛋白和除色素是目前分离纯化多糖的重点和难点之一。

桑黄粗多糖脱蛋白常用的是Sevage法、醇析法、酶法、三氟二氯乙烷法以及三氯乙酸法(TCA)等，桑黄粗多糖除色素常用纤维素、等层析柱的方式。

目前，为得到高纯度桑黄多糖，主要的分离技术有分级醇沉(初步分离)、超滤法、大孔树脂吸附纯化凝胶柱层析、离子交换层析、凝胶过滤、高速逆流色谱法及各种色谱法，但色谱价格昂贵，制备量少，目前限于实验室，不能大规模工业生产。

真菌多糖将会成为生物界的新研究领域，可能带来医学、工业和农业上的迅速发展和应用。

桑黄多糖生物活性好，没有细胞毒性，已成为新药发展的方向之一。

桑黄多糖的生物活性通常是其结构(化学结构和空间立体结构)决定的，是目前桑黄多糖研究的焦点和难点，学者普遍认为桑黄多糖的高级结构对其活性的影响比一级结构大，这和提取方法、分离纯化方法密切相关，而不同的提取、分离纯化方法对桑黄多糖的结构和生物活性的影响等相关问题还在进一步的研究中。

多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。

多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。

因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。

一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。

热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。

酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。

微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。

2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。

酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。

酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。

3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。

生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。

二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。

1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。

通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。

2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。

多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。

3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。

例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。

三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。

1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。

2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。

一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。

提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。

1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。

前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。

Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。

冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。

2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。

常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。

D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。

H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。

对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。

吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。

3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。

分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。

(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。

作者简介：朱晓霞（１９８２－），女（汉），硕士研究生，从事天然生物大分子研究。

糖类物质是地球上数量最多的一类有机化合物，是生命物质的组成成分之一。

糖类物质广泛地存在于生物界，特别是植物界。

糖类物质按干重计占植物的８３％～９０％，占细菌的１０％～３０％，动物的小于２％。

大量药理及临床研究证实：多糖有调节免疫、抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂等生理功能，可广泛应用于医药、保健品及功能食品，作为绿色生物医药产品具有广阔的市场前景。

目前多糖产品开发相当热门，也卓有成效。

多糖的生理功能与其纯度和化学结构有着重要的关系，多糖的提取纯化是其研究的基础。

因此科学高效地从动植物及微生物中提取、纯化其中的多糖成分是目前的核心问题。

本文对多糖制备常用提取与纯化方法，特别是一些新技术的应用进展进行了综述。

１多糖的提取纯化１．１常规方法提取１．１．１原料预处理提取前，必须破坏或抑制共存的水解酶，可采用丙酮、乙醚、乙醇等低极性溶剂，以破坏水解酶并分离脂溶性杂质。

１．１．２浸提一般采用不同温度的水或稀碱溶液提取。

浸提参数中，温度是影响多糖提取的主要因素，另外浸提固液比、浸提时间均影响提取率，可根据需要选取最佳工艺参数。

１．１．３过滤或离心分离提取液有的可以直接过滤，有的因提取液较黏稠不易过滤，往往用离心法除去不溶物。

１．１．４有机溶剂沉淀提取所得的滤液或上清液浓缩，加２～５倍量的有机溶剂，得粗多糖沉淀。

常用有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇及丙酮。

现有很多植物多糖的提取研究都是采取的常规水提法：大麦［１］中活性多糖提取、大枣［２］多糖提取、老头草［３］中多糖的含量测定、乌龙茶［４］多糖提取等。

朱晓霞，罗学刚（西南科技大学材料科学与工程学院，四川绵阳６２１０１０）多糖提取与纯化技术应用进展摘要：多糖由于它们独特的功能和低毒性，在保健食品和药品发展方面具有广阔的应用前景。

提取和纯化是制备多糖的关键。

目前用的提取方法有：常规水提法、超声波、微波辅助提取、超临界流体萃取；分离纯化技术有：色谱、膜分离。

多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。

有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。

与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。

3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。

此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。

（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。

超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。

（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。

二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。