稀释接种法测BOD5考核样品的一些注意点

BOD5测定时要注意些什么BOD5的测定通常采纳标准稀释接种法（HJ5052023）。

其操作为，经中和及除去毒性物质并经稀释后的水样（必要时加入适量含好氧微生物的接种液）置入培育瓶中，20℃避光培育5天，通过测定培育前后水样中溶解氧的含量，计算出5天内的耗氧量，再依据稀释倍数得到BOD5。

BOD5的测定是生物和化学作用的共同结果，必需严格依照操作规范进行。

更改任何一个条件都会影响测定结果的精准性和可比性。

影响BOD5测定的条件包括pH值、温度、微生物种类和数量、无机盐含量、溶解氧和稀释倍数等。

用于检测BOD5的水样必需装满并密封在取样瓶中，并储存在2至5°C的冰箱中直至分析。

一般应在取样后6小时内进行检验。

在任何情况下，水样的保存时间都不应超过24小时。

在测量工业废水的BOD5时，由于工业废水通常含有较少的溶解氧，且大部分成分是可生物降解的有机物质，为了保持培育瓶中的好氧状态，必需对水样进行稀释（或接种稀释），这个操作是标准稀释法的比较大的特点。

为保证测量结果的牢靠性，稀释水样培育5天后耗氧量必需大于2mg/L，残留溶解氧必需大于1mg/L。

放入接种液的目的是保证肯定量的微生物降解水中的有机物，接种液的量以使5天耗氧0.1mg/L以下为佳。

使用金属蒸馏器制备的蒸馏水作为稀释水时，应注意检查其中金属离子的含量，以免抑制微生物的繁殖和新陈代谢。

为保证稀释水中的溶解氧接近饱和，必要时可通入净化空气或纯氧，然后置于20℃培育箱中肯定时间，以使与空气中氧分压达到平衡。

稀释倍数的确定以培育第5天耗氧量大于2mg/L，剩余溶解氧大于1mg/L为原则。

稀释系数太大或太小都会导致测试失败。

而且由于BOD5的分析周期较长，一旦显现仿佛情况，也无法原封不动地补充。

测量某工业废水的BOD5时，可先测量其CODCr，然后参考现有水质相近废水的相关监测数据，初步确定待测水样的BOD5/CODCr值，然后计算BOD5的大致范围，并确定稀释系数。

HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法【文档名称】HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法【文档编号】HJ505-2009【文档类别】标准【文档版本】2009版【文档摘要】为了确定水质中五日生化需氧量（BOD5）的测定方法而制定。

介绍了使用稀释和接种法进行BOD5测定的具体步骤以及相关注意事项。

【适用范围】适用于水环境监测、水处理和环境保护等领域，用于测定水样中的五日生化需氧量（BOD5）。

【参考标准】无【主要内容】1. 引言1.1 目的1.2 适用范围1.3 规范性引用文件2. 术语和定义3. 原理3.1 水样处理方法 3.2 制定稀释液3.3 制定营养液3.4 BOD5的测定4. 仪器与设备4.1 培养箱4.2 恒温水浴箱4.3 分光光度计4.4 稀释器5. 样品采集与处理5.1 采样方法5.2 样品保存6. 实验步骤6.1 样品处理6.2 稀释液的制备 6.3 营养液的制备 6.4 实验装置的准备6.5 实验操作6.6 计算方法7. 结果的判定与报告8. 实施规程8.1 实验室条件与环境要求8.2 操作人员技术要求8.3 试剂、标准物质及样品要求8.4 仪器设备要求9. 质量控制10. 附录10.1 样品水质分级表10.2 营养液配方10.3 相关法律及政策文件10.4 相关实验数据和结果10.5 其他附属资料【文档附件】1、样品水质分级表2、营养液配方3、相关法律及政策文件4、相关实验数据和结果5、其他附属资料【法律名词及注释】1、BOD5：五日生化需氧量（Biochemical Oxygen Demand）2、水样处理方法：对水样进行预处理，以消除干扰物质3、制定稀释液：按照一定的比例将水样与培养液混合4、制定营养液：为维持微生物生长所需，将含有营养物质的溶液制备好5、分光光度计：用于测定溶液的吸光度6、试剂：在实验过程中使用的化学物质7、标准物质：具有已知浓度的化学物质，用于校准仪器和验证测定方法8、样品：需要进行测定的水样或水质样品【可能遇到的困难及解决办法】1、水样中含有大量悬浮物和杂质，影响测定结果。

HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法文档模板1. 引言主要描述了如何使用稀释与接种法来测定水质中的五日生化需氧量（BOD5）。

BOD5是评价废水中有机污染物浓度的重要指标之一，对于环境保护和水质监测非常重要。

2. 适用范围适用于对水样进行五日生化需氧量的测定，使用稀释与接种法。

3. 简介稀释与接种法是一种常用的测定BOD5的方法。

它通过将水样进行稀释，然后接种细菌种子来获得可控制的生化需氧量的反应。

详细描述了测定前的准备工作、实验步骤、计算方法等。

4. 测定前的准备工作4.1 样品采集及处理- 采集水样时要注意避免污染，使用干净的容器进行采集。

- 样品采集后，应尽快将其送至实验室进行处理。

4.2 实验室设备与试剂准备- 根据实验需求，准备适量的培养基、稀释液、标定溶液等试剂。

- 检查实验室设备的完好性，确保无损坏或污染。

5. 实验步骤5.1 样品的稀释- 根据实际需求，将水样按照一定比例稀释，以便得到可测定范围内的BOD5值。

5.2 接种菌液- 在适量的培养基中接种细菌种子，培育细菌液。

5.3 反应瓶的制备- 将已经稀释和接种好的水样倒入BOD5反应瓶中。

- 定量加入已标定过的溶液。

5.4 反应过程的控制- 设置好反应瓶的应有条件：适当的温度、通气等。

- 确保反应瓶中的溶液始终保持适当的pH值，并进行适当的搅拌。

5.5 BOD5值的测定- 在反应过程结束后，使用溶解氧电极等设备测定溶解氧的含量，得到BOD5值。

6. 数据处理与计算方法- 根据实际测定结果，使用相应的公式计算出BOD5值。

- 根据实验需要，进行数据分析及结果报告。

7. 附件所涉及的附件如下：- 附件1：实验记录表格样本- 附件2：标定溶液制备方法8. 法律名词及注释所涉及的法律名词及其注释如下：- 法律名词1：注释1- 法律名词2：注释29. 困难及解决办法在实际执行过程中，可能会遇到以下困难：- 困难1：描述困难1及其解决办法。

bod5测定方法国标稀释与接种法国标稀释与接种法是一种常用的水质检测方法，广泛应用于环境监测、水处理和水质评价等领域。

本文将介绍国标稀释与接种法的原理、步骤和操作注意事项。

国标稀释与接种法是一种基于微生物生长原理的检测方法。

其原理是将待测水样进行稀释，然后接种特定的微生物菌种，通过观察菌落的生长情况来判断水质的好坏。

具体操作步骤如下：1. 准备试剂和设备：包括培养基、蒸馏水、标准菌种、无菌培养皿、移液器、吸管等。

2. 取一定体积的待测水样，按照一定比例稀释。

稀释的目的是使水样中的微生物浓度降低到适合观察的范围，一般为10^-1到10^-6倍稀释。

3. 取稀释液，加入培养基中，制备接种液。

4. 取一定体积的接种液，均匀涂布在无菌培养皿上。

5. 将培养皿倒置，放在恒温培养箱中进行培养。

培养温度一般为35℃，培养时间根据不同的菌种和要求而定，一般为24小时到48小时。

6. 培养结束后，观察培养皿上菌落的形态、数量和颜色等特征。

根据国家标准或相关规定，判断水样的微生物浓度和水质等级。

在进行国标稀释与接种法时，需要注意以下几点：1. 所有使用的器皿、培养基和试剂必须经过高温高压灭菌处理，保证实验的无菌性。

2. 操作过程中要注意个人防护，避免接触待测水样和接种液。

3. 接种液的制备要严格按照国家标准和相关规定进行，避免人为误差。

4. 培养过程中要保持恒温恒湿的环境，避免外界环境对实验结果的影响。

5. 观察菌落时要仔细，根据国家标准或相关规定进行判断，避免主观误差。

国标稀释与接种法是一种简单、快速、经济的水质检测方法。

通过这种方法可以对水样中微生物的浓度和种类进行初步判断，为后续的水质评价和处理提供依据。

然而，需要注意的是，该方法只能对水质中的某些特定微生物进行检测，不能全面评价水质。

因此，在实际应用中，还需要结合其他水质检测方法和指标进行综合分析。

国标稀释与接种法是一种常用的水质检测方法，具有操作简单、结果可靠的特点。

稀释与接种法生化需氧量（BOD5）指标的检测规程1 定义、原理1.1 定义生化需氧量（BOD5）：在规定条件下，水中有机物和无机物在生物氧化作用下所消耗的溶解氧（以质量浓度表示）。

1.2 方法原理将水样注满培养瓶，塞好瓶塞不通气，将培养瓶放入20±1℃的培养箱进行培养5天；培养前后分别测定水样的溶解氧浓度，由两者的差值可算出每升水消耗掉氧的质量，即BOD5值。

由于多数水样中含有较多的需氧物质，其需氧量往往超过水中可利用的溶解氧（DO）量，因此在培养前应对水样进行稀释，使培养后剩余的溶解氧（DO）符合规定。

一般水质监测所测BOD5只包括含碳物质的耗氧量和无机还原性物质的耗氧量。

有时需要分别测定含碳物质耗氧量和硝化作用的耗氧量。

常用区别含碳和氮的硝化耗氧的方法是：向培养瓶中投加硝化抑制剂，加入适量硝化抑制剂后，所测出的耗氧量即为含碳物质的耗氧量。

在5天培养时间内，硝化作用的耗氧量取决于是否存在足够数量的能进行此种氧化作用的微生物，原污水或初级处理的出水中这种微生物的数量不足，不能氧化显著量的还原性氮，而许多二级生化处理的出水和受污染较久的水体中，往往含有大量硝化微生物，因此测定这种水样时应抑制其硝化反应。

在测定BOD5的同时，需用葡萄糖和谷氨酸标准溶液完成验证监测。

2 试剂除非另有说明，监测时所用试剂均为符合国家标准的分析纯试剂，监测用水均为蒸馏水或同等纯度的水。

水中含铜不应高于0.01mg/l，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。

2.1 接种水如监测样品本身不含有足够的合适性微生物，应采用下述方法之一，以获得接种水①城市废水，取自污水管或取自没有明显工业污染的住宅区污水管。

（这种水在使用前应倾出上清液备用）。

②在1L水中加入100g花园土壤，混合并静置10min。

取上清液备用。

③含有城市污水的河水或湖水。

④污水处理厂出水。

⑤当待分析水样为含难降解物质的工业废水时，取自待分析水排放口下游约3～8km的水或所含微生物适宜于待分析并经化验室培养过的水。

测量BOD5时应注意哪些因素1.溶解氧由于测试温度设定在20°C，冬季采集的样品溶解氧过饱和，夏季采集的样品可能在20°C时溶解氧欠饱和。

这些样品应在BOD5测定之前进行搅拌和曝气，以将溶解氧调整到20°C饱和点相近。

2.PH试验水样的pH值应调整至6.7～7.5（最佳点为pH7.2）。

BOD5读数的下降可能是由于被测样品的pH值超过了这个范围。

对于含有大量酸或碱的样品，BOD5读数可能会低于实际含量。

酸性或碱性水样应用适当浓度的NaOH或H2SO4中和。

假如工业废水含有酸或盐的氧化物，或需要高倍稀释，对于标准的五天BOD5测定，可以使用pH7.2的磷酸缓冲液作为稀释剂。

3.温度试验过程中将搅拌器置于20℃±1℃的培育箱中。

BOD的测定也可以超过这个温度范围。

例如，在35℃或37℃时，测量BOD所需的时间可分别缩短至2.5天或34小时，测量结果与20℃5天相像。

上升温度得到的BOD值与5天在20℃下测得的结果有很好的相关性。

假如取样时样品温度超过20℃，或样品温度低于20℃，可将样品置于恒温箱中恒温。

样品需要在样品测量之前进行处理。

4.BOD5的稀释仪器的测量范围为0～1000mg/L。

假如测试样品的BOD5估算值高于1000mg/L，可用稀释水稀释样品。

加入的稀释水也应保持在20℃，并应使用曝气使氧气饱和。

假如需要测试几个相同的样品，应将充足量的原始水样稀释，并从稀释后的样品中取出与测量范围相对应的体积。

例如，原水样稀释两倍时，稀释倍数为2；原水样按1:10稀释时，稀释倍数为10。

5、BOD5的接种什么是接种BOD5试验要求水样含有供生物氧化的有机物和适量的氧化有机物的需氧细菌，以及吞食有机物和增长需氧细菌生长的其他微生物。

假如水样中根本没有或几乎没有这类微生物，就必需对水样按肯定比例加入这类微生物溶液。

这个过程应称之为接种。

与生活污水不同，工业废水可能不含有充足量的细菌以供样品中所含有机物完全的生化分解，假如所测定的样品就是这种废水，应加入接种溶液。

HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法引言水是人类生活中不可或缺的重要资源，保持水体的水质良好对于人类的生存和健康至关重要。

五日生化需氧量(BOD5)是评估水体有机物含量和有机污染的重要指标之一。

本文将介绍HJ505-2009标准中所规定的水质五日生化需氧量的测定方法，主要包括稀释与接种法。

一、试剂和仪器（不含人名）1. 试剂：- 无菌蒸馏水- 稀释液- 接种物2. 仪器：- 恒温水浴器- 生化需氧量测定仪二、方法步骤1. 样品采集：在需要测定的水体中采集适量的水样，并尽快将其送至实验室。

2. 样品准备：- 如果水样中有悬浮物，需要通过过滤将其去除。

- 将样品的温度调整至适合接种的温度范围（一般为20℃-30℃）。

3. 稀释：- 将适量的水样取出，按照一定的比例用无菌蒸馏水稀释。

- 稀释液的浓度根据样品的预估BOD5值确定。

4. 接种：- 在稀释液中加入适量的接种物。

- 接种物的选择应根据样品的特性和预估BOD5值来确定。

5. 试管设置：- 取一定数量的试管，根据实验要求分别设置不同的对照组和样品组。

- 每个试管中加入相应的稀释液和接种物。

6. 水浴培养：- 将试管放置于恒温水浴器中，控制温度在指定的范围内。

- 培养时间一般为5天。

7. BOD5测定：- 利用生化需氧量测定仪测定试管中的BOD5值。

- 测定时注意保持试管的环境与空气隔绝，避免氧气对结果的影响。

8. 数据处理：- 计算每个样品组和对照组的BOD5值。

- 根据实验需要进行数据统计和分析。

三、实验注意事项1. 样品采集时要避免污染和外界干扰，尽量减少样品与空气接触的时间。

2. 实验过程要严格按照标准操作，避免操作失误对结果的影响。

3. 样品和试剂的操作要在无菌条件下进行，避免细菌污染。

4. 温度的控制是保证结果准确性的重要因素，要使用恒温水浴器进行控制。

水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
什么是BOD5？
BOD5，也就是五日生化需氧量（Biochemical Oxygen Demand），是一种用来衡量水中有机物质分解速度的指标。

通俗地说，就是测量水中的有机物质被微生物分解所消耗的氧气量。

这个指标可以评估污水、废水以及天然水体的水质。

BOD5的测定
BOD5的测定需要进行水样稀释和接种操作。

下面分别介绍这两个步骤。

水样稀释
为了保证BOD5的测定准确性，需要将水样进行稀释，通常是以1:5或1:10
的比例稀释。

具体的步骤如下：
1.取一定量的水样，根据实际情况选择合适的量，通常是10 mL或20
mL；
2.分别加入已经在恒温条件下预先接种好的含有适当微生物的生物培养
液；
3.用去离子水或蒸馏水进行稀释，使稀释比例达到1:5或1:10；
4.用漩涡振荡器将混合液充分混匀，然后装入BOD5需氧瓶中。

接种
接种是指在水样中向其中添加某些特定微生物，常用的有镰刀菌和链球菌等。

作用是加速水中的有机物质分解，提高BOD5的测定准确性。

接种的具体步骤如下：
1.在稀释过的水样中加入0.5 ml左右的包含有大量微生物的生物培养
液，然后用漩涡振荡器均匀混合，放入BOD5需氧瓶中；
2.氧化还原指示液（常用的指示液为甲基橙）滴入需氧瓶中，然后将其
密封，放入常温下放置5天。

BOD5的测量是一种水质评价的标准方法，可以作为污水、废水处理以及水环境保护的重要依据。

通过对稀释和接种方法的认真实施，可以保证测定结果的准确性和可靠性。

稀释与接种法测BOD5考核样品注意事项
蔡丽;张波浪
【期刊名称】《山西化工》
【年(卷),期】2022(42)6
【摘要】主要阐述了如何用稀释与接种法准确地测定BOD5考核样品,介绍了稀释接种水的制备、接种液的选取、稀释倍数的确定以及样品分析过程中若干注意事项等。

【总页数】2页(P172-173)
【作者】蔡丽;张波浪
【作者单位】四川省内江生态环境监测中心站;内江市生态环境局
【正文语种】中文
【中图分类】X832
【相关文献】
1.稀释接种法测BOD5考核样品的一些注意点
2.模型公式法在确定BOD5样品稀释系数中的应用
3.利用稀释与接种法快速有效测定BOD5的探讨
4.稀释接种法进行五日生化需氧量(BOD5)测试方法探讨
5.稀释接种法快速准确测定BOD5标准样品的技术探讨
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五日生化需氧量稀释和接种法质量控制评价五日生化需氧量（BOD5）是一个重要的水质指标，用于评估水体中有机物污染的程度。

BOD5是指在规定的条件下，微生物在五天内分解水中某些可氧化物质，特别是有机物，所消耗的溶解氧的量。

这个指标对于了解水体的健康状态，预测水体中生物的生存情况，以及评估水体的自净能力等方面都具有重要意义。

在BOD5的测定中，稀释与接种法是一种常用的方法。

这种方法适用于含有较多有机物的地面水、工业废水和生活污水的测定。

通过稀释，可以将样品中的有机物浓度降低到适宜的程度，保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。

接种则是为了引入能够分解废水中有机物的微生物，特别是在不含或少含微生物的工业废水中。

对于使用稀释与接种法测定BOD5的质量控制，以下几点是重要的：1. 准确控制稀释倍数：根据水样的具体情况，选择合适的稀释倍数。

如果BOD5未超过6mg/L，则不必稀释，可直接测定。

对于高浓度的废水，需要进行适当的稀释，以使BOD5在适宜的范围内。

2. 保证接种液的质量：接种液的质量对于测定结果的准确性至关重要。

应按照国家标准制备接种液，并保证其菌种丰富、活性良好。

如果使用购买的接种液，应选择质量可靠的产品，并对其性能进行验证。

3. 严格控制实验条件：BOD5的测定需要在恒温条件下进行，温度波动不应超过±1℃。

同时，要保证充足的溶解氧供应，以支持微生物的活性。

4. 实验操作的规范性：在实验过程中，应按照标准的操作程序进行样品处理、接种、培养和测定等步骤。

操作人员应经过培训，熟悉实验流程和注意事项，避免操作失误对结果的影响。

5. 实验室内的质量控制：定期进行实验室内的质量控制，包括空白实验、平行样测定、加标回收实验等。

这些质量控制措施有助于发现实验中的异常情况，及时纠正误差，保证测定结果的准确性。

6. 定期校准仪器和设备：用于BOD5测定的仪器和设备应定期进行校准，确保其准确性和稳定性。

校准过程中发现的问题应及时处理，以保证测定结果的可靠性。

HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1.引言五日生化需氧量(BOD5)是评价水体中有机污染程度的重要指标之一。

本方法是根据HJ505-2009标准，采用稀释与接种法来测定水样的BOD5。

2.仪器和试剂2.1 仪器BOD培养箱恒温槽p栓塞瓶或其它带塞密封较好的容器反应瓶（容量250 ml）毫升级量筒2.2 试剂含有碳源和养分的培养液水样3.样品处理3.1 采样根据标准规定的采样方法，采集待测水样，并用密封容器密封。

3.2 样品稀释将采样得到的水样，根据需求进行适当的稀释。

确保稀释后的水样符合测试条件。

4.实验步骤4.1 培养液接种将稀释后的水样接种到含有碳源和养分的培养液中。

培养液的配制按照标准规定进行。

4.2 反应瓶封闭将接种好的培养液倒入反应瓶中，并用塞子或其它密封物将其封闭。

4.3 反应瓶容器将封闭好的反应瓶放入恒温槽或BOD培养箱中，保持温度恒定。

按照标准规定的要求，设置好温度和时间。

4.4 反应结束在规定的反应时间后，取出反应瓶，进行测定。

根据标准中的步骤进行测定。

5.数据处理和计算根据标准中的数据处理和计算公式，将测定得到的数据进行处理，得到五日生化需氧量(BOD5)的结果。

6.结果表述按照标准要求，将测定得到的结果以适当的形式进行表述，如单位、精确度等。

7.根据测定结果，得出对水质BOD5的评价，按照标准规定的评价标准进行评定。

8.注意事项根据标准中的注意事项和操作规程，进行实验过程中的注意事项和保持操作的规范性。

以上即为HJ505-2009标准中关于水质BOD5测定的稀释与接种法的实验步骤和操作流程。

实验过程中请遵循相关的安全操作规程，并确保实验条件和操作准确性。

稀释接种法测定BOD5
一、适用范围
大于或等于2mg/L，最大不超过6000mg/L，超过6000mg/L时稀释造成的误BOD
5
差较大。

二、仪器
生化培养箱、污水瓶（水封瓶）、量筒、玻璃棒、5-20L细口玻璃瓶、乳胶管、溶氧仪
三、试剂
稀释液的pH值应为7.2。

10）接种液：一般取生活污水（中水站调节池水），在室温放置一夜，取上清液使用。

当分析含有难于降解物质的废水时，应选用于该废水相适用的污泥，如该废水污水处理厂曝气池内混合液，室温静止一昼夜后取上清液使用。

11）接种稀释水：取适量接种液，加入稀释水中，混匀。

每升稀释水中接种液加入量为1-10ml，一般3-5ml即可（暂定加5ml）。

pH值应为7.2，配制后应立即使用。

四、 步骤
（2）稀释倍数的确定
（3）测定
按照选定的稀释比例，计算好所需接种稀释水和水样，用乳胶管将接种稀释水和水样移入量筒中，按比例混匀。

再用虹吸的方法将混合后的水吸入的污水瓶中，装满，用溶氧仪测定溶解氧，记录。

盖上盖子，用去离子水水封好。

放入20℃的生化培养箱培养五天，取出后测定瓶内水样的溶解氧，记录。

五、 计算
计算公式为：
式中：C 1—水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L ）
C 2—水样在5d 培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L ）
B 1—接种稀释水培养前的溶解氧
B 2—培养后的溶解氧
f 1—稀释水在培养液中所占比例
f
—水样在培养液中所占比例
2。

测量BOD5时配制稀释水注意事项稀释水的质量对BOD5测量的精准性具有紧要意义。

因此，稀释水空白的5天耗氧量必需小于0.2mg/L，小于0.1mg/L是比较好的。

接种稀释水应在0.3～1.0mg/L之间。

保证稀释水水质的关键是掌控有机物含量比较低，抑制微生物繁殖的物质含量比较低。

因此，使用蒸馏水作为稀释水比较好。

用离子交换树脂制成的纯水不适合作为稀释水，由于去离子水往往含有从树脂中分别出来的有机物。

假如用于制备蒸馏水的自来水中含有某些挥发性有机化合物，为了防止它们残留在蒸馏水中，蒸馏前应进行去除有机化合物的预处理。

用金属蒸馏器制成的蒸馏水应注意检查其中金属离子的含量。

假如使用的稀释水因存在有机物而达不到要求，可加入适量曝气池接种物，在室温或20℃下保存肯定时间予以除去。

接种量以5天耗氧量0.1mg/L为原则。

为防止藻类大量繁殖，必需在暗室中进行储存。

假如储存后的稀释水中有沉淀物，仅使用上清液过滤除去沉淀。

为保证稀释水中的溶解氧接近饱和，必要时可用真空泵或喷水器吸入净化空气，或用微型空压机注入净化空气，氧气瓶可用于注入纯氧，然后充氧。

将稀释后的水置于20℃培育箱中肯定时间，使溶解氧达到平衡。

冬季放置在较低室温的稀释水可能含有过多的溶解氧，而在酷热的夏季则相反。

因此，当室温与20℃相差较大时，必需在培育箱中放置一段时间，使其与培育环境的氧分压保持平衡。

测定BOD5时如何确定稀释倍数？稀释倍数过大或过小都可能导致5d耗氧量过小或过多，超过正常耗氧量范围则试验失败。

但是，由于BOD5的测量周期较长，一旦显现这种情况，就不能按原样补充。

因此，必需高度重视稀释因子的确定。

虽然工业废水成分多而杂，但BOD5值与CODCr值之比通常在0.2～0.8之间。

造纸、印染、化工等行业的废水比例较低。

一些含有颗粒有机物的废水，如酒糟废水等，在测定其BOD5时，会因培育瓶底部的颗粒物沉淀而无法参加生化反应，导致显着下降。

较低的比率。

稀释接种法
注意事项:
适用于Bod5大于或等于2mg/L, 且不超过6000 mg/L的水样。

实验结果可能被水中存在的某些对微生物有毒的物质干扰，如杀毒剂，有毒金属或游离氯等，会产生生化抑制作用。

水中的藻类或硝化微生物也可能造成虚假的偏高结果。

多数水样中含有较多的需氧物质，需氧量往往超过水中可利用的溶解氧量，培养前需对水样稀释。

测定bod5的同时，需用葡萄糖谷氨酸标准溶液完成验证实验。

分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或等同纯度的水，水中含铜不应高于0.01mg/L,并不应有氯，氯胺，苛性碱，有机物和酸类。

玻璃器皿必须清洁
样品需充满并密封与瓶中，置于2~5摄氏度保存到分析时。

一般在采样后6小时内检验。

如果样品的pH不在6~8之间，先做单独实验，确定需要用的盐酸溶液（4.5）或氢氧化钠溶液（4.6）的体积，在中和样品，不管有无沉淀生成。

对含游离氯或结合氯的样品，加入所需体积的亚硫酸钠溶液（4.7）使游离氯和结合氯失效注意避免加过量。

在试验样品的准备时，将实验样品温度升至20摄氏度，然后在般充满的容器内摇动样品，以便消除可能存在的过饱和氧。

稀释样品是避免夹杂空气泡。

得到的bod5应在180~230之间，否则应检查接种水，如果必要还应检查分析人员的技术。