大鼠 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG )定量检测试剂盒(ELISA ) 使用说明书
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人8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
7. 检测溶液 B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶 液 A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 标本的采集及保存 1. 细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。 2. 血清：标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟，取上清即可检测，
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 8-OHdG 水平。用纯化的抗体包被微 孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 8-OHdG 抗原、生物素化的抗人 8-OHdG 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转 化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 8-OHdG 呈正相关。用 酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96 孔） 2. 标准品（冻干品）：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后静置 10 分钟以上，
人 8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析试剂盒
使用说明书
产品编号：E0660h
本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
预期应用 ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中 8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量。
概述 DNA 链上的碱基鸟嘌呤 C-8 位易受到羟自由基及单线态氧的攻击而发生羟化，生成加合物
或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3. 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心 15 分
8-羟基脱氧鸟苷在胰岛素抵抗大鼠骨骼肌的表达及运动、吡格列酮的干预作用
酮干 预 组 ， 组 各 １ 每 Ｏ只 ， 继 予 原 饲 料喂 养 。从 实 并
验第 ９ 开 始 ， 动 干 预 组 大 鼠参 照 Ｐ ｏ ｇ等 ｌ 介 周 运 ｌｕ ＿ ３
绍 的训练 方法 进行 为期 ８周 的游 泳 训 练 ， 周 训 练 每 ５天 ， ２ 每 天训 练 ４ ｍｉ ， 前 周 ０ ｎ 之后 每天 训 练 ６ ｍｉ ， ０ ｎ 游 泳池水 深 ５ ｃ 水 温 ３ ℃， 只 大 鼠活 动 面 积 约 ０ｍ， ５ 每
×Ｆ ＮＳ ２ ． ） ， 照 喂饲 高 脂 高糖 饮 食 大 鼠 ＨＯ Ｉ ／２ ５ ］ 按 — ＭＡ—Ｒ大于 基础 饲 料 组 大 鼠 ＨＯＭＡ Ｉ 均 数 ＋１ Ｉ —Ｒ ． ９ ６个 标准 差者 为 Ｉ Ｒ大 鼠 的标 准 ， 选 出 Ｉ 筛 Ｒ模 型 大
鼠。经对 照 Ｉ 模 型 标 准 ， ０只大 鼠均 成 模 。再 将 Ｒ ３ 模 型组 大 鼠 随 机 分 成 １ 组 、 动 干 预 组 和 吡 格 列 Ｒ 运
２ ０ ｍ 吡 格列 酮干 预 组 大 鼠给 予 吡 格 列 酮 ２ ｍｇ ０ｃ ； ０ ／ ｋ ／ （ 理盐 水 稀 释 ） 胃 ， 持 续 ８周 。实 验 期 ｇ天 生 灌 共 间对 照组 和吡格 列酮 干预 组 各有 ２只 大 鼠死亡 。
１２ 主 要仪 器及 试 剂 ．
１ 材 料 与方 法 １ １ 动 物及分 组 处理 ．
表 １ 各组 大 鼠实 验 第 ｌ ６周 末 Ｂ 、 Ｂ Ｆ Ｎ 、 ＯＭＡ Ｉ Ｓ Ｄ 水 平 比 较 （ Ｗ Ｆ Ｇ、 Ｉ Ｓ Ｈ －Ｒ、Ｏ 士 ）
注： 与对 照 组 比较 ， ”Ｐ＜ ０ ０ ， Ｐ ０ ０ ； Ｉ ． ５ ＜ ． １ 与 Ｒ组 比较 ， Ｐ＜ ０ ０ ， ＜ ０ ０ ． ５ ”Ｐ ．１
大鼠 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG )定量检测试剂盒(ELISA ) 使用说明书
rat OHdG (8-OHdG ) quantify test kit (ELISA ) Manual /file/682019From collects and classifies the global productinstrunction manuals to help users access anytime andanywhere, helping users make better use of products.Home: / Chinese: /本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）浓度呈正相关，450nm 波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量。
【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL2标准品0.3mL×6管8显色剂B液6mL320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL4样本稀释液6mL10说明书1份5特殊稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5pg/mL.【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
《8-羟基脱氧鸟苷在胃癌患者血清及组织中含量变化的研究》
《8-羟基脱氧鸟苷在胃癌患者血清及组织中含量变化的研究》摘要：本文旨在研究8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）在胃癌患者血清及组织中的含量变化，探讨其与胃癌发生、发展的关系。
通过对比胃癌患者与健康人群的血清及组织样本，分析8-OHdG水平的变化，为胃癌的早期诊断、病情监测及预后评估提供新的生物标志物。
一、引言胃癌是全球范围内常见的消化道恶性肿瘤，其发病机制复杂，早期诊断及治疗是提高患者生存率的关键。
近年来，8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）作为氧化应激和DNA损伤的生物标志物，在多种疾病的研究中受到关注。
本研究通过检测胃癌患者血清及组织中8-OHdG的含量变化，探讨其在胃癌发生、发展中的作用。
二、材料与方法1. 研究对象选取胃癌患者及健康人群作为研究对象，收集其血清及组织样本。
2. 实验方法（1）血清样本处理：采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中8-OHdG的含量。
（2）组织样本处理：利用免疫组化技术检测组织中8-OHdG 的表达情况。
（3）数据分析：采用统计软件对数据进行处理，分析8-OHdG含量与胃癌发生、发展的关系。
三、结果1. 血清中8-OHdG含量比较胃癌患者血清中8-OHdG的含量显著高于健康人群（P<0.05）。
随着病情的进展，8-OHdG的含量呈上升趋势。
2. 组织中8-OHdG表达情况胃癌组织中8-OHdG的表达明显高于正常组织（P<0.05），且表达水平与肿瘤分期、分化程度密切相关。
高表达8-OHdG的组织，其肿瘤分期较高，分化程度较低。
3. 8-OHdG与胃癌发生、发展的关系经统计分析，血清及组织中8-OHdG的含量与胃癌的发生、发展密切相关。
高水平的8-OHdG可能促进胃癌的发生、发展，提示氧化应激和DNA损伤在胃癌的发生、发展过程中起重要作用。
四、讨论本研究结果表明，胃癌患者血清及组织中8-羟基脱氧鸟苷的含量明显高于健康人群，且与肿瘤分期、分化程度密切相关。
8_羟基脱氧鸟苷在乳腺癌患者血液、尿液及癌组织中的表达及意义
Abstract： Objective： To explore the expression and clinic significance of 8-OHdG in breast cancer． Methods： Pre-operative serum 8-OHdG levels were detected with an enzyme-linked immunosorbent assay in a well-defined series of 173 breast cancer patients． 8-OHdG expression in cancer cells from 150 of these patients was examined by immunohistochemistry． Using HPLC-ECD method determination of 8-OHdG concentration in urine． Ｒesults： The serum 8-OHdG levels and immunohistochemical 8-OHdG expression were in concordance with each other （ P ＜ 0． 05，correlation coefficient 0． 163） ． Negative 8-OHdG immunostaining with poor breast cancer-specific survival according to the multivariate analysis （ P ＜ 0． 01） ． This observation was even more remarkable when ductal carcinomas only （ n = 140） were considered（ P ＜ 0． 001） ． A low serum 8-OHdG level was associated statistically significantly with lymphatic vessel invasion and a positive lymph node status． Breast cancer patients and the healthy women in their urine 8-OHdG density was a significant statistical significance （ P ＜ 0． 01） ． Conclusion： Low serum 8-OHdG levels and a low immunohistochemical 8-OHdG expression were associated with an aggressive breast cancer phenotype． In addition，negative 8-OHdG immunostaining was a independent prognostic factor for breast cancer-specific death in breast carcinoma patients． Using urine concentration of 8-OHdG predictable DNA damage resulting from breast cancer can provide good biological indicators for detecting harm in early breast cancer． Key words： 8-OHdG； Enzyme-linked immunosorbent assay； Immunohistochemistry； Ｒeactive oxygen species
大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)说明书
大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。
用纯化的大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)，再与HRP标记的8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：90ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
8羟基脱氧鸟苷结构
8羟基脱氧鸟苷结构8-羟基脱氧鸟苷（8-OH-dG）是一种DNA损伤标志物，常用于评估细胞DNA受到的氧化损伤程度。
它在维持基因组的完整性和稳定性中起着重要的作用。
本文将介绍8-羟基脱氧鸟苷的结构特征、功能以及其在健康和疾病中的应用。
8-羟基脱氧鸟苷是由DNA中的鸟苷经过氧化反应产生的一种修饰碱基。
其结构特征在于其脱氧鸟苷核苷酸的C8位碳上附加了一个羟基基团。
这种修饰使得DNA分子的碱基发生改变，从而影响了DNA的稳定性和功能。
在DNA受到氧化损伤的过程中，8-羟基脱氧鸟苷的形成主要是由于氧自由基和其他损伤因子的作用。
氧自由基可通过引发DNA链断裂、碱基氧化和鸟苷酸的脱氧等过程，导致8-羟基脱氧鸟苷的生成。
而8-羟基脱氧鸟苷与DNA损伤修复酶之间的结合则可以激活细胞内的DNA修复系统。
8-羟基脱氧鸟苷在维持基因组的稳定性和完整性中发挥着重要的作用。
它被认为是氧化DNA损伤的主要标志物之一，可以反映DNA暴露于氧自由基和其他氧化剂的程度。
通过检测8-羟基脱氧鸟苷的含量，可以评估细胞DNA氧化损伤的程度，进一步了解DNA修复过程的进行情况以及相关疾病的发生机制。
在疾病研究中，8-羟基脱氧鸟苷的测定已经成为一种常用的方法。
例如，肿瘤组织中的8-羟基脱氧鸟苷含量通常较高，与肿瘤细胞中的氧化代谢增加、DNA损伤修复系统失调等因素有关。
因此，通过检测8-羟基脱氧鸟苷的含量可以为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要的依据。
此外，糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病等与氧化损伤相关的疾病中，8-羟基脱氧鸟苷的测定也具有重要的临床意义。
这些疾病通常与氧化应激过程密切相关，8-羟基脱氧鸟苷的生成与疾病的发生、发展以及治疗效果密切相关。
总之，8-羟基脱氧鸟苷作为一种DNA损伤标志物，发挥着重要的生物学功能并具有重要的临床应用前景。
通过检测其在细胞和组织中的含量，可以了解DNA氧化损伤的程度和细胞的修复能力，为疾病的早期诊断和治疗提供重要的依据。
一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法[发明专利]
专利名称：一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法专利类型：发明专利
发明人：邱彬,赵华楠,罗子伊,傅志宏,林敏
申请号：CN202010538033.7
申请日：20200612
公开号：CN111638258A
公开日：
20200908
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种肿瘤标志物8‑羟基脱氧鸟苷的检测方法，包括以下步骤：准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β‑环糊精（β‑CD）、五水硫酸铜（CuSO·5HO）、L(+)‑抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8‑羟基脱氧鸟苷（8‑OHdG）、氯化钾（KCl）；本发明通过设置准备试剂和设备、CuNCs材料合成、CuNCs‑MWCNTSs材料的合成、CuNCs‑MWCNTSs‑nafion材料的合成、电极的修饰、8‑OHdG的检测和电化学测试的工艺流程，解决了传统的8‑OHdG测定方法预处理步骤复杂，使用的仪器昂贵，操作程序十分繁琐，这些限制了传统的8‑OHdG测定方适用性的问题，该肿瘤标志物8‑羟基脱氧鸟苷的检测方法，具备预处理步骤十分简单、操作程序比较容易仪器较为普通的优点。
申请人：中玺(泉州)科技有限公司
地址：362000 福建省泉州市晋江市罗山街道世纪大道南段3001号三创园创客大街D304
国籍：CN
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正常成人尿中8-羟基脱氧鸟苷水平的观察
正常成人尿中8-羟基脱氧鸟苷水平的观察孙贵范;刘珊;李冰;李昕;郭晓英;孙鲜策【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2002(18)1【摘要】目的检测正常成人尿中 8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)水平 ,了解其在正常人群中的分布范围。
方法用 8-OHdG的酶联免疫试剂盒检测尿中 8-OHdG 水平 ,用苦味酸法测定尿中的肌酐 ,计算 8-OHdG的肌酐校正值。
结果正常人群尿中 8-OHdG水平为14 15± 9 0 0ng/mgCr。
在不同性别间存在显著性差异 ,男性为 11 85± 5 72ng/mgCr ,女性为16 2 4± 10 83ng/mgCr。
按 10岁一个年龄段分层 ,在男性、女性和全体人群中各年龄组间均无显著性差异。
女性在 2 1～ 6 0岁年龄段 8-OHdG水平有随年龄增加而增高的趋势。
结论正常人群 8-OHdG 水平的 95 %参考值范围在男女性分别为 0～ 2 5 77ng/mgCr和 0～ 4 4【总页数】2页(P23-24)【关键词】8-羟基脱氧鸟苷;人群分布;参考值范围;DNA损伤;苦味酸法【作者】孙贵范;刘珊;李冰;李昕;郭晓英;孙鲜策【作者单位】中国医科大学公共卫生学院【正文语种】中文【中图分类】R122.12;R446.12【相关文献】1.长期汞暴露人群尿中8-羟基-2'-脱氧鸟苷水平的增高研究 [J], 李玉锋;李柏;王江雪;贾光;王天成;阎蕾;瞿丽雅2.原发性肝癌患者尿8-羟基脱氧鸟苷水平的观察 [J], 唐毅;李辛平;唐振勇;刘丽丽;唐耘天3.天津地区正常人群尿8-羟基脱氧鸟苷水平分析 [J], 高瑞霄; 唐亮; 张美娟4.天津地区正常人群尿8-羟基脱氧鸟苷水平分析 [J], 高瑞霄; 唐亮; 张美娟5.电子垃圾拆解区学龄前儿童铅暴露对尿中8-羟基脱氧鸟苷水平的影响 [J], 廖伟棠;霍霞;刘伟;杨辉;纪旻辉;徐锡金因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析(ELISA)
人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平。
用纯化的人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG），再与HRP标记的8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：360ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）定量检测试剂盒（ELISA）
使用说明书
【试剂盒名称】
大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）定量检测试剂盒（ELISA）
【试剂盒用途】
定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）浓度呈正相关，450nm 波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量。
【试剂盒组成】
1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL
2标准品0.3mL×6管8显色剂B液6mL
320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL
4样本稀释液6mL10说明书1份
5特殊稀释液6mL11封板膜2张
6酶标试剂6mL12密封袋1个
备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5pg/mL.
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，平板混匀器混匀30s （或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。
最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【样本要求】
1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为2.5-80pg/mL，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（2.5-80pg/mL范围内），乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
【操作程序总结】
准备试剂，样品和标准品
【检测范围】
2.5pg/mL-80pg/mL 【规格】
96人份/盒
【贮藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6个月。