人8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG) 酶联免疫分析试剂盒 使用说明书

三黄茵赤方含药血清对LO2细胞DNA氧化损伤的影响代欢;刁建新;区锦莹;李海叶;杨运高【摘要】目的探讨三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法采集三黄茵赤方含药血清,以LO2细胞株为研究对象,通过H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤模型,实验分正常对照组、H2O2模型组、三黄茵赤方含药血清5％、10％、15％浓度组、维生素E组,采用倒置显微镜观察各组形态,CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,ELISA检测细胞内8-OHdG含量,彗星实验检测细胞DNA损伤情况.结果与H2O2模型组比较,三黄茵赤方含药血清10％、15％浓度组、维生素E组均能提高细胞存活率(P＜0.05),增强细胞内SOD、CAT、GSH-PX 活性(P＜0.05),改善细胞对ROS清除能力(P＜0.01),降低细胞内8-OHdG含量(P ＜0.01),减低细胞拖尾率、尾长、尾矩及Olive尾矩(P＜0.05).结论三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化性损伤具有保护作用,以15％浓度含药血清组作用最显著.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2015(035)010【总页数】6页(P1434-1439)【关键词】含药血清;LO2细胞;H2O2;DNA氧化损伤【作者】代欢;刁建新;区锦莹;李海叶;杨运高【作者单位】南方医科大学中医药学院,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515;南方医科大学中医药学院,广东广州510515【正文语种】中文肝细胞氧化应激是指.OH、H2O2等活性氧族（reactive oxygen species, ROS）产生过多或/和内源性抗氧化能力降低，氧化系统和抗氧化系统平衡紊乱，而致肝细胞损伤的病理过程［1］。

人chemerin酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中chemerin含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中chemerin水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入chemerin抗原、生物素化的抗人chemerin抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的chemerin呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20,000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释10,000pg/ml，5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312.5pg/ml，156pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制10,000pg/ml标准品：取0.5ml20,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。

8羟基脱氧鸟苷结构8-羟基脱氧鸟苷（8-OH-dG）是一种DNA损伤标志物，常用于评估细胞DNA受到的氧化损伤程度。

它在维持基因组的完整性和稳定性中起着重要的作用。

本文将介绍8-羟基脱氧鸟苷的结构特征、功能以及其在健康和疾病中的应用。

8-羟基脱氧鸟苷是由DNA中的鸟苷经过氧化反应产生的一种修饰碱基。

其结构特征在于其脱氧鸟苷核苷酸的C8位碳上附加了一个羟基基团。

这种修饰使得DNA分子的碱基发生改变，从而影响了DNA的稳定性和功能。

在DNA受到氧化损伤的过程中，8-羟基脱氧鸟苷的形成主要是由于氧自由基和其他损伤因子的作用。

氧自由基可通过引发DNA链断裂、碱基氧化和鸟苷酸的脱氧等过程，导致8-羟基脱氧鸟苷的生成。

而8-羟基脱氧鸟苷与DNA损伤修复酶之间的结合则可以激活细胞内的DNA修复系统。

8-羟基脱氧鸟苷在维持基因组的稳定性和完整性中发挥着重要的作用。

它被认为是氧化DNA损伤的主要标志物之一，可以反映DNA暴露于氧自由基和其他氧化剂的程度。

通过检测8-羟基脱氧鸟苷的含量，可以评估细胞DNA氧化损伤的程度，进一步了解DNA修复过程的进行情况以及相关疾病的发生机制。

在疾病研究中，8-羟基脱氧鸟苷的测定已经成为一种常用的方法。

例如，肿瘤组织中的8-羟基脱氧鸟苷含量通常较高，与肿瘤细胞中的氧化代谢增加、DNA损伤修复系统失调等因素有关。

因此，通过检测8-羟基脱氧鸟苷的含量可以为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要的依据。

此外，糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病等与氧化损伤相关的疾病中，8-羟基脱氧鸟苷的测定也具有重要的临床意义。

这些疾病通常与氧化应激过程密切相关，8-羟基脱氧鸟苷的生成与疾病的发生、发展以及治疗效果密切相关。

总之，8-羟基脱氧鸟苷作为一种DNA损伤标志物，发挥着重要的生物学功能并具有重要的临床应用前景。

通过检测其在细胞和组织中的含量，可以了解DNA氧化损伤的程度和细胞的修复能力，为疾病的早期诊断和治疗提供重要的依据。

人环磷酸鸟苷(cGMP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E0577h自备物品1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、微量加液器及吸头，EP管3、蒸馏水或去离子水，滤纸标本的采集及保存1、组织匀浆：将动物的组织标本先用PBS洗涤，去除多余血液，匀浆化后放在5~10 ml PBS中于-20℃放置过夜，第二天，经过二次反复冻融破膜，将匀浆物5000x g离心5分钟，取上清即可检测。

2、其它生物标本：请1000或-80保存应小于1周，-20不应超过2个月；操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37，余孔分别加标准品或待测样品100温育2小时。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2、弃去液体，甩干，不用洗涤。

每孔加检测溶液A工作液 100温育1小时。

3、弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400，加上覆膜，37，酶标板加上覆膜37，终止反应，此时蓝色立转黄色。

终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（4、洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。

5、试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。

请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10值扣除空白孔值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。

推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如 curve expert 1.3，根据样品值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的，其余试剂短期保存请置于4。

开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20。

1、 检验申请单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV （1+2）]测定。

临床医生根据需要提出检验申请。

2、 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml ，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。

也可采集血浆，用肝素、EDTA 或枸橼酸盐抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml 的全血标本，或少于0.1ml 的血清或血浆。

2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h 后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。

离心必须达到3000rpm 15min ，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h ，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d ，在-20℃最多可保存4周。

避免反复冻融。

不可使用热灭活的标本。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d 。

2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。

医院检验科免疫室 体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共 页3．方法原理本实验采用HIV 特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。

当待测标本中存在HIV 抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB 底物参与反应的情况下，产生显色反应。

人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书产品规格：96T/48T供应商：上海樊克生物有限公司本产品只用于科研实验人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书，(LR/Ob-R)ELISA试剂盒，苗条素受体elisakit elisa试剂盒上海樊克生物供应！人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书Reagent preparationThe kit is removed from the cold storage environment and can be used at room temperature.1 standard solution: the kit provides 6 tube standard, each tube has been calibrated concentration, and freeze dry. Before the experiment in each standard tube added 0.5ml sample dilution and cover after standing for 10 minutes or more, then repeatedly reversed / rubbing its dissolution, restore the complex for each standard tube body labeling concentration.2.20 * washing buffer dilution: distilled water diluted by 1:20, that is, 20 copies of 1 x wash buffer plus 19 copies of distilled water.Kit performance:1 sample linear regression and the expected concentration correlation coefficient R value is above 0.990.The 2 batch and the batch should be less than 9% and 11% respectively.人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书ELIAS试剂盒的实验条件:1. 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。

人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平。

用纯化的人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG），再与HRP标记的8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：360ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

8-羟化脱氧鸟苷正常值范围8-羟化脱氧鸟苷（8-OHdG）是一种DNA损伤标志物，通常与氧化应激和细胞内DNA氧化损伤相关。

正常值范围是指在健康人群体内8-OHdG的浓度或尿液中的含量处于正常的范围内。

下面将详细介绍8-OHdG的正常值范围。

1.浓度范围：8-OHdG通常以纳摩尔/毫摩尔（nM/mol）的浓度进行表示。

在健康成人中，8-OHdG的血浆浓度通常在1.6至13 nM/mol之间。

这个范围的浓度反映了人体内正常的氧化水平和DNA损伤程度。

2.生理普遍性：8-OHdG是DNA损伤的指标，它在全球各地的健康人群中都有普遍存在。

然而，根据不同的个体特征和环境条件，其正常值范围可能会有一定的变化。

3.年龄差异：与年龄相关的氧化应激通常会导致DNA氧化损伤的增加。

因此，8-OHdG的正常值在不同年龄段之间可能会有所差异。

一般来说，儿童和青少年的8-OHdG浓度通常较低，而老年人的浓度可能会稍高。

4.性别差异：女性通常比男性具有更高的氧化应激水平，因此女性的8-OHdG浓度可能会稍高于男性。

然而，这种差异并不明显，所以在评估8-OHdG的正常值范围时，性别因素的影响可以忽略不计。

5.疾病状态：某些疾病或病理条件可导致体内氧化应激的增加，从而引起DNA氧化损伤的增加。

一些研究发现，在某些慢性病如糖尿病、肿瘤及心血管疾病等患者中，8-OHdG浓度明显增加。

因此，疾病状态是评估8-OHdG正常值范围的重要因素。

总体而言，8-OHdG的正常值范围是一个相对的概念，因为体内DNA氧化损伤的程度在个人之间会有差异。

对于临床或科研目的，通常会在一定数量的健康人群中进行调查研究，来确定8-OHdG的正常范围。

此外，还需要对个体的特殊情况进行综合分析，包括年龄、性别、疾病状态等因素。

只有这样才能更好地理解和应用8-OHdG的正常值范围。

尿中反反式粘糠酸苯巯基尿酸和8 羟基脱氧鸟苷的测定苯是一种广泛存在于工业和生活环境中的化学污染物。

基于苯对人体的危害性，世界诸多发达国家均制订了工作场所相应的职业卫生标准以保护职业苯接触工人的身体健康，但由于作业环境苯浓度的监测数据并不能完全客观地反映个体接触的实际情况和个体易感性，尤其不能反映机体体内蓄积作用(内暴露剂量)，用于对长期低剂量职业苯接触工人的危险度评价有一定的局限性。

苯的生物标志物因其灵敏度高，特异性强，更能客观、全面、准确反映工人的实际接苯状况，因此更适合作为职业苯接触工人暴露水平检测、健康监护、暴露危害性评价。

生物标志物根据性质不同可分为接触标志物、效应标志物。

目前研究较多的苯接触标志物有反-反式粘糠酸（tt-MA）与苯巯基尿酸（S-PMA）。

表1为2种接触标志物的比较。

进入机体的苯约2%-25%通过体内代谢酶的作用转化为tt-MA，但食品中的防腐剂山梨酸回产生正干扰，目前通用的检测技术是液相色谱-紫外检测法，能够满足我国卫生限值3.0 mg/g肌酐对检测的要求。

S-PMA转化比例低，为0.1%-0.5%，但有更长的生物半减期和更高的特异性，该化合物的检测必须要使用质谱检测器才能满足美国卫生限值25 μg/g肌酐（我国尚无卫生限值）对检测检出限的要求。

总之，S-PMA生物监测的应用价值明显优于tt-MA，但对检测技术的要求更高。

表1 2种接触标志物的比较代谢物名称苯转化比例特异性检测技术限值反-反式粘糠酸2%-25% 有干扰HPLC-UV 3.0 mg/g肌酐8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)是研究最的早期效应标志物。

8-OHdG是主要的DNA氧化产物之一，是评价DNA氧化损伤的通用指标。

虽不是苯暴露的特异性标志物（除苯暴露外，如多环芳烃类和丁二烯等也可诱导DNA氧化损伤），但可以通过8-OHdG反映DNA损伤情况来间接评价苯暴露情况。

目前报道的检测方法为液相色谱电化学检测法，尿液中8-OHdG的含量0-15ng/ml。

人IL-8定量分析酶联免疫检测试剂盒IL-8简介：IL-8是由巨噬细胞产生的单核因子，是趋化因子家族C-X-C亚族（α亚族）中的一员，对中性粒细胞、T淋巴细胞、嗜碱性粒细胞具有趋化作用，能够吸附中性粒细胞，嗜碱性粒细胞和T细胞，但是单核细胞除外。

人的IL-8 cDNA 序列表明有99个氨基酸残基。

经过剪节掉22个个残基后，形成成熟的具有77个氨基酸的蛋白。

IL-8还能够调节T 淋巴细胞、B淋巴细胞成熟分化，在炎症反应、免疫调节中起重要作用，并且研究表明IL-8还具有促进血管生成的作用。

IL-8在人体内存在两种主要形式，一种是来源于单核细胞含72个氨基酸的多肽，另一种是来源于内皮细胞含77个氨基酸的多肽。

72aa比77aa的IL-8具有更高的趋化活性，而77aa的IL-8具有诱导白血病细胞凋亡的功能，其位于N端的五肽序列已被确定是IL-8具有诱导凋亡功能的活性部位。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-8 的浓度。

IL-8 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-8 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

当加入生物素化的抗人IL-8 抗体后，抗人IL-8 抗体与IL-8 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。

生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

最后加入显色剂，若样本中存在IL-8 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。

通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-8 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-8 浓度。

人定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分规格预包被板12条或 6条样本分析缓冲液1瓶5ml/3 ml标准品稀释液10ml/5ml标准品2/1（冻干)生物素化抗体1瓶10ml/5mlHRP连接的酶结合物1瓶10ml/5ml浓缩洗涤液 20×30ml/瓶TMB底物1瓶10ml/5 ml终止液1瓶5ml/3 ml封板胶纸3/2张说明书1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。