3. 合成不同长度的新生肽片断: 在不同的阶段终止正在核糖体上合成的蛋白质肽链,
从而得到一系列不同长度的肽片断(都是以N-端开头), 然后观察他们的折叠过程。
(二)研究方法:
快速动力学方法与蛋白质空间结构研究方法相结合,捕捉 蛋白质折叠的中间状态,拼出折叠过程
快速动力学方法:停流法(stopped flow) 温度跃迁法(temperature jump) 超快光谱法等
I (x,y) = log [ P(x/y) / P(x) ] 若: y对x无影响,则 P(x/y) =P(x) ,并且I (x,y) =0
y有利于x的产生,则 P(x/y) P(x), I (x,y) 0 y不利于x的产生,则 P(x/y) <P(x),I (x,y) < 0
若y较复杂,分成若干个相关联或独立的事件,则其信息分 解方程扩展为:
(4) Stress-90:
功能不十分清楚,一般只与少数几种底物蛋白作用,如: 几种蛋白激酶,钙调素等
(5) 分子内伴侣: 枯草杆菌的Ser蛋白酶(胞外酶) N 信号肽-----前导肽(77aa)------酶蛋白 C
指导分泌
分子内伴侣
成熟蛋白
(三)分子伴侣的功能
① 稳定新生肽链未折叠构象,帮助新生肽链正确折叠 ② 帮助寡聚蛋白亚基的正确组装 ③ 维持蛋白处于可转运构像,辅助跨膜运输 ④ 参与抗逆反应 ⑤ 个别分子伴侣兼有折叠酶的作用: 如:E. coli分子伴侣 触发因子:脯氨酰异构化酶
识别未折叠或错误折叠的蛋白并以单体形式与其结 合,在ATP存在下,帮助正确折叠
此外,细胞质中的Hsp70能与核糖体上正在合成的 新生肽链结合,使多肽以完全伸展的状态进行跨膜运输。 Stress-70家族成员:Dna k, Dna J (E. coli);