测定七叶树制剂中七叶皂苷Ia含量的高效液相色谱法

世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第69期119投稿邮箱：zuixinyixue@·药物研究·RP-HPLC 法测定三七叶中皂苷成分的含量覃佩莉，林海英（通讯作者）（广西白云山盈康药业有限公司，广西 南宁 530002）0　引言三七叶为五加科植物三七Panax notoginseng （Burk ）F.H.Chen 的干燥叶，具有止血、消肿、止痛之功效，对吐血、外伤出血、痈肿毒疮等具有很好的治疗作用。

本品质量标准收载于广西壮药材质量标准第二卷（2011年版）[1]，标准未对其中的活性成分进行含量测定控制，存在不足。

文献报道[2]三七叶中含有多种活性成分，包括三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1等，本实验参照药典方法[3]采用RP-HPLC 法测定三七叶中的三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb1成分，方法准确、可靠，可用于三七叶的质量控制。

1　仪器、样品岛津高效液相色谱仪（LC-20ATVP ）；对照品：三七皂苷R 1、人参皂苷Rb 1、、人参皂苷Rg 1，中国食品药品检定研究院提供；乙腈色谱纯；纯化水；其它试剂为分析纯；三七叶为广西靖西和云南产。

2　方法与结果2.1　色谱条件、系统适用性实验。

照现行版中国药典第四部通则高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A 、B 分别为乙腈、水，按拟定的方法梯度浓度洗脱;检测波长为206 nm 。

理论板数按三七皂苷R 1峰计算应不低于5000，见表1。

表1　色谱条件、系统适用性实验时间（分钟）流动性A（%）流动性B（%）0-16188216-8518→3982→61注：a）专属性试验。

2.2　取三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1对照品适量，精密称定，加甲酵制成每l mL 各含0.2 mg 的对照品混合溶液；取三七叶粉末（过四号筛）1 g ，精密称定，精密加入甲酵50 mL ，称定重量，超声处理（功率350 W ，频率50 kHz ）60 min ，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀滤过，吸取续滤液25 mL ，蒸干，蒸干后的固体物加水15 mL 使溶解，用水饱和的正丁醇液提取3次，每次15 mL ，合并正丁酵液，蒸干，固体物加甲醇溶解，转移于25 mL 容量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀滤过，作为供试品溶液。

高效液相色谱法测定不同年限三七根中皂苷含量朱伟伟;王齐【摘要】[目的]测定不同年限三七根中皂苷的含量.[方法]利用高效液相色谱法,对云南文山产区的三七主根中皂苷含量进行了测定,并探索了不同种植年限样品中皂苷含量的变化情况.色谱条件:色谱柱为Kromasil ODS C18(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,紫外检测器检测波长为203 nm,柱温25℃.[结果]随着种植年限的增加,皂苷含量也相对增加,最佳种植的年限为3～4年.[结论]该方法简单易行,可用于不同年限三七根中皂苷的含量测定.%[Objective J The content of sapomns in the root of Panax notoginsengy Burk. ) F.. H. Chen with different growth ages was measured.[Method] By means of high-performance liquid chromatography, the main root notoginseng the content of the saponin in the root of Panax notoginseng( Burk. ) F. H. Chen from Wenshan areas of Yunnan was tested and the change in the content of the saponin of the samples with different planting years was explored. The chromatographic condition was: the column was Kromasil ODS Cl8(250 mm ×4.6 mm,5 μm) , the acetonitrile-water as mobile phase was used for gradient elution, the flow rate was 1. Oml/min, the wavelength of UV in detector was 203 ran and the column temperature was 25 ℃.[Results] with the increment of growth age, the content of saponin in root of Panax notoginseng (Burk. ) F. H. Chen was relatively increased and the best planting year was in 3 years to 4 years. [Conclusion] The method was simple and could be used in the determination of saponins.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P1407-1408,1651)【关键词】高效液相色谱;三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen);皂苷【作者】朱伟伟;王齐【作者单位】河池学院化学与生命科学系,广西宜州546300;昆明理工大学分析测试研究中心,云南昆明650093【正文语种】中文【中图分类】R284.1三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)为五加科(Araliaceae)人参属(Panax Linn)植物，是我国名贵的中药材，具有活血化瘀和消肿止痛的作用，目前大多数被用于冠心病、心绞痛等心血管系统疾病的防治［1］。

采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量目的研究探讨采用高效液相色谱仪测定复三七中三种皂苷含量的临床应用价值。

方法以三七总皂苷分散片为研究对象，对其中的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1含量进行检测。

结果不同批次三七总皂苷分散片中，人参皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人参皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片。

结论通过高效液相色谱仪（HPLC）可以同时对三七中不同皂苷的含量进行准确定量，且具有操作简单、快捷的优点，重复性好，稳定性强，可以用于三七相关药物质量控制的过程中，值得推广应用。

标签：高效液相色谱；三七；皂苷；含量三七是我国传统医学中最珍贵的药材之一，具有止血、补血、活血、抗血栓等多种功效[1]。

本文以三七总皂苷分散片为研究对象，通过高效液相色谱法对三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1等三种皂苷含量进行测定，并对其具体操作方法及检测结果进行分析。

具体报告如下。

1资料与方法1.1一般资料仪器：选择日本岛津仪器生产的LC-10A高效液相色谱仪（组成部分有微体积串联双柱塞、柱温箱、紫外可见双波长检测器、超声波提取器HS 3120、中文化LC工作站）。

试剂：对照品人参皂苷Rb1（批号：110703-201420）、对照品人参皂苷Rg1 （批号：110703-201421）、对照品三七皂苷R1 （批号：110703-201423）；三七总皂苷分散片（三七总皂苷含量为50 mg/片）；洗脱剂乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、水（超纯水）。

其中，对照品皂苷购自中国食品药品检定研究院，三七总皂苷分散片为自制，洗脱剂购自津市科密欧化学试剂开发中心。

1.2方法分别取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品进行精密称定，并使用浓度为20%的乙腈水溶液对其进行溶解，并制成1 ml的混合溶液（其中人参皂苷Rb1含量为0.5 mg、人参皂苷Rg1含量为0.4 mg、三七皂苷R1含量为0.12 m）。

表4 凌霄花喷雾剂对热板法疼痛阈值的影响组别数量/只用药量痛阈值x s P值对照组101ml/20g 2.72 1.6实验组101ml/20g76.9 7.3<0.01 2.3.1 灌胃法 取雄性昆明种小鼠30只,体重20 ~22g,随机分为对照组与给药组。

对照组给常水0.8m l20g-1,给药组给凌霄花喷雾剂0.8ml20 g-1,45min后放入小鼠活动仪内,记录10m in内各组小鼠活动次数,结果见表5。

表5 凌霄花喷雾剂对小鼠自主活动的影响实验方法组别n自发活动数抑制率/%P值灌胃法对照组15133.1 5.9实验组1568.5 3.2外涂法对照组15130.0 8.8实验组15110.1 4.848.52<0.01 15.33>0.052.3.2 外涂法 取昆明种雄性小鼠30只,体重20 ~22g,随机分为对照组和给药组。

各组动物于给药前24h,将背部脊柱两侧去毛,每侧2cm!2cm。

对照组给予常水0.6ml/只,给药组给予凌霄花喷雾剂0.6ml/只,均匀涂于脱毛区,45m in后放入小鼠活动仪内,记录各组小鼠10min内活动次数,结果见表5。

3 讨论本研究结果证明,凌霄花喷雾剂对组织胺所致小鼠皮肤毛细血管通透性增加有显著抑制作用,能使慢性疼痛模型(热板法)痛阈值有显著的提高。

外涂给药能明显降低二甲苯致小鼠耳壳炎性肿胀和琼脂所致小鼠足跋庶肿胀程度,口服表现轻度抑制小鼠自主活动的作用。

提示凌霄花喷雾剂可能对炎症反应多个环节均有抑制作用,从而缓解炎症反应症状,达到镇痛的目的。

结果表明,凌霄花喷雾剂对于临床蚊虫叮咬所致局部痛、痒、肿、胀可以发挥治疗作用。

参考文献:[1] 李仪奎主编.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,1991.3[2] 陈奇主编,中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993.9收稿日期:1999 10 25高效液相色谱法梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1含量李性天,周密妹,耿立坚,曲春华 (武汉铁路中心医院,湖北武汉430064)[摘要] 目的:以HPLC梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1含量。

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三七茎叶提取物中皂甙成分定性及三七皂甙Fa的制备
本文运用高效液相色谱-质谱和质谱/质谱联用技术,在适宜的分析条件下,对三七茎叶提取物中的皂甙成分进行分离并定性。

同时,运用制备型高效液相色谱,确定了从三七茎叶提取物中制备三七皂甙Fa的工艺条件。

高效液相色谱-质谱和质谱/质谱联用技术是对中药成分定性的一种重要手段。

本实验确定液质联用中液相色谱的分离条件为:乙腈-1mM的醋酸氨水溶液作为流动相进行梯度洗脱,最终共分离出12种皂甙。

通过研究其一级质谱和二级质谱,对12种皂甙进行定性,分别为人参皂甙Rg₁,Rb₁,Rc及其同分异构
体,Rb₂,Rb₃,Rd,三七皂甙R₁,Fa,Fc,Fe和绞股兰皂甙IX。

以三七茎叶提取物为原料,三七皂甙Fa为目的产物,直接利用制备型高效液相色谱从原料中提纯三七皂甙Fa。

分别考察了流动相配比、流动相流速以及原料上样量对分离过程和产品纯度的影响,最终确定了适宜的制备色谱条件为:流动相流速是30ml/min,流动相配比为甲醇:水=70:30,原料上样量0.3～0.4g。

在此条件下,制得的三七皂甙Fa的纯度为91.2%。

将制得产品进行液质分析,确定为目的产物三七皂甙Fa。

高效液相色谱—离子阱质谱分析七叶皂苷钠中的皂苷类成分作者：宋晓虹王维皓陈世涛陈莎章军王跃生刘安来源：《中国中药杂志》2016年第13期[摘要] 七叶皂苷钠为娑罗子中总皂苷制得的钠盐，其粉针剂为疗效明确的处方药。

该研究采用高效液相色谱-离子阱质谱对分离制备的七叶皂苷Ⅰa，七叶皂苷Ⅰb，异七叶皂苷Ⅰa，异七叶皂苷Ⅰb，aesculiside A， aesculiside B， aesculuside A， escin Ⅳc， escinⅡa及escin Ⅴ对照品进行了裂解规律的研究及总结，并根据裂解规律对七叶皂苷钠粉针剂中的皂苷类成分进行分析，对粉针原料中除上述10个对照品外的19个皂苷类成分进行了结构推测。

分析结果显示，七叶皂苷钠原料中皂苷苷元的结构类型有2种，分别是原七叶皂苷元型及玉蕊精醇C型；取代基主要为乙酰基、巴豆酰基及当归酰基；取代位置常位于C-21，C-22及C-28位。

糖苷键位于C-3位，糖链的组成以2分子葡萄糖及1分子葡萄糖醛酸居多。

该研究为明确七叶皂苷钠粉针的化学成分组成提供了实验数据，也为该品种后续的质量评价及安全性评价提供了科学依据。

[关键词] 七叶皂苷钠；皂苷；高效液相色谱-离子阱质谱；娑罗子[Abstract] Sodium aescinate， which is produced from saponins of Chinese Buckeye Seed， is a prescription drug for treatment of brain edema and all kinds of swellings caused by surgery. In this article， high-performance liquid chromatography/ion trap （HPLC-IT） mass spectrometry was applied to study the characteristic ions of ten reference substances， namely escin Ⅰa， escin Ⅰb，isoescin Ⅰa， isoescin Ⅰb， aesculiside A， aesculiside B， aesculuside A， escin Ⅳc， escinⅡa and escin Ⅴ， which were isolated from aescinate. Furthermore， 19 saponin compounds were predicted in sodium aescinate， besides the above mentioned reference substances. The study showed that sapogenins in sodium aescinate had two structural types， namely protoaescigenin and barringenol C， and the substituent acetyl， tigloyl or angeloyl was usually located at C-21， C-22 or C-28 position. Among these predicted saponins， their sugar chains were all located at C-3 position consisting of glucose and glucuronide. This study provides experimental data for chemical constituents in sodium aescinate and scientific basis for quality and safety evaluation.[Key words] sodium aescinate；saponins；HPLC-IT mass spectrometry；Chinese Buckeye Seeddoi：10.4268/cjcmm20161313娑罗子Chinese Buckeye Seed为七叶树科植物七叶树Aesculus chinensis Bge.，浙江七叶树A. chinensis Bge. var. chekiangensis （Hu et Fang） Fang或天师栗A. wilsonii Rehe.的干燥、成熟种子[1]。

作者简介:湛建峰,硕士研究生,主管药师;研究方向:药物分析;Tel :(010)67095745;E 2mail :zhanjianfeng2000@tom 1com七叶皂苷A 、B 的制备液相色谱法分离和结构确证湛建峰1,2,3,牛剑钊1,张启明1,冯　芳2(1中国药品生物制品检定所,北京　100050;2中国药科大学;　3湖南省岳阳市药品检验所)摘要:　目的建立制备型高效液相对β2七叶皂苷钠原料进行分离纯化制得七叶皂苷A (escin Ia )和七叶皂苷B (escin Ib )的方法。

方法采用制备色谱柱waters HRC 18;以乙腈21%醋酸(28∶72)为流动相;流速为42mL ・min 21,检测波长为220nm 。

结果用紫外、红外、质谱和核磁共振法确证结构,经分析型H PL C 检查,纯度达9810%以上。

结论该法可靠、准确,适合于七叶皂苷A 、B 的制备、分离、纯化。

关键词:　七叶皂苷钠;七叶皂苷A ;七叶皂苷B ;制备液相色谱中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:100227777(2009)1221184203Structure Identif ication and Purif ication of Sodium Aescinate by Preparative HPLCZhan Jianfeng 1,2,3,Niu Jianzhao 1,Zhang Qiming 1and Feng Fang 2(1National Instit ute for t he Control ofPharmaceutical and Biological Product s ,Beijing 100050;　2China Pharmaceutical U niversity ;　3YueyangInstit ute for Drug Control )ABSTRACT :　Objective To establish a preparative HPL C met hod for t he p urification of crude product.Methods The p urification was performed on a Waters HRC 18column and mobile p hase of aceto nit rile 21%acetic acid (28∶72).The flow rate was 40mL ・min 21,and t he determination wavelengt h was set at 220nm.R esults The p urity was over 9810%by HPL C.The Struct ure identification by t he data of UV 、IR 、1HNMR and 13CNMR.Conclusions The met hod is reliable ,accurate and suitable for escin Ia ,b p reparation ,separation and p urification.KEY WOR DS :　sodium aescinate ;escin Ia ;escin Ib ;p reparative HPL C 中药娑罗子系指七叶树(A escul us chi nensis Bge )、浙江七叶树[A escul us chi nensis v ar.cheki angensis Fang ]、或天师栗(A escul usw ilsonii Rehd )的果实或种子[1]。

七叶皂苷钠含量的测定一、七叶皂苷钠含量测定的重要性七叶皂苷钠在很多方面都有着重要的作用呢，所以测定它的含量可太有必要啦。

比如说在医药领域，它的含量多少可能直接关系到药品的效果呀。

要是含量不准确，那药品可能就不能很好地发挥作用，甚至可能还会有不良影响呢。

就像我们做一道菜，盐放多放少都会影响味道，七叶皂苷钠的含量也是这个道理，必须得精确测定。

二、测定七叶皂苷钠含量的方法1. 化学分析法酸碱滴定法。

这种方法是利用七叶皂苷钠的一些化学性质，通过酸和碱的反应来确定它的含量。

不过呢，这个方法操作起来得特别小心，因为酸和碱的用量得非常精准，就像走钢丝一样，稍微偏一点结果可能就不对啦。

而且这个过程还需要一些特殊的仪器来辅助，像滴定管之类的，要保证它的准确性，不然也会影响测定结果哦。

氧化还原滴定法。

这也是一种常见的化学分析方法。

它是基于七叶皂苷钠在氧化还原反应中的一些特性来测定含量的。

在这个过程中，要选择合适的氧化剂或者还原剂，就像给七叶皂苷钠找一个合适的“搭档”来进行反应。

但是呢，这个“搭档”的选择可不容易，得考虑很多因素，比如反应的速度呀，反应的完全程度呀等等。

2. 仪器分析法高效液相色谱法（HPLC）。

这可是个很厉害的方法呢。

它就像是给七叶皂苷钠做一个超级细致的“体检”。

把样品注入到仪器里面，然后通过一系列的程序，就可以很准确地得到七叶皂苷钠的含量。

不过这个仪器可娇贵了，使用的时候得按照严格的操作规程来，比如说流动相的选择、流速的设置、柱温的控制等等，任何一个小环节出问题都可能影响结果。

紫外 - 可见分光光度法。

这个方法是利用七叶皂苷钠对特定波长的光的吸收特性来测定含量的。

我们要先找到七叶皂苷钠吸收光最强的那个波长，然后在这个波长下进行测量。

但是这个方法有个小缺点，就是它可能会受到一些杂质的干扰，就像一群人里面有几个捣乱的，会影响我们对主角七叶皂苷钠的判断。

所以在使用这个方法之前，可能需要对样品进行一些预处理，把那些捣乱的杂质给去掉。