土壤总磷 有机磷 无机磷含量检测试剂盒说明书 微量法

2性能指标
2.1外观
试剂1（R1）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂2（R2）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；包装标签文字符号应完整、清晰。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，340 nm 波长条件下，吸光度应小于0.500。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为 1.20 mmol/L 时，吸光度变化应不小于0.160。

2.5线性范围
试剂盒在（0.30～6.46）mmol/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.9900；
b)当样本浓度不大于3.23mmol/L 时，线性绝对偏差应不超过±0. 32 mmol/L；当样本浓度大于3.23 mmol/L 时，线性相对偏差应不超过±10.0% 。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 2.5%。

2.6.2批间差
相对偏差：R 应不大于 4.5%。

2.7准确度
2.7.1企业参考品测试
测定企业参考品，测定结果与靶值的相对偏差应不超过±10.0% 。

2.7.2质控品测试
测定质控品，测定结果应在靶值范围内。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在100 mg/dL 内、内源性酯浓度在1250 mg/dL 内、结合胆红素浓度在35 mg/dL 内、非结合胆红素浓度在62 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10 .0%以内。

土壤总磷的测定7-1方法选择的依据土壤总磷测定的待测液制备，一般分为碱熔法和酸溶法两类。

在碱熔法中以Na2CO3熔融分解最为完全，准确度比较高，可以作为仲裁方法。

NaOH次之。

但熔融是需要铂坩埚，因此不适宜用于常规分析。

在酸溶法中以H2SO4-HClO4法较好，此法对钙质土壤分解率较高，但对酸性土壤分解不易十分完全，结果往往稍偏低。

待测液中磷的测定，一般都采用钼蓝比色法，所用的显色剂有“钼锑抗”（钼酸铵—酒石酸锑钾—抗坏血酸试剂的简称）、氯化亚锡、抗坏血酸和1，2，4-氨基萘酚磺酸等，其中钼锑抗法有手续简便，颜色稳定，干扰离子允许量大等优点[1，2，3]，因此本章只介绍钼锑抗比色法。

7-2方法要点在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的H2SO4和强氧化剂HClO4作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。

7-3主要仪器分光光度计或光电比色计，2KVA方电炉；3KVA调压变压器。

7-4试剂（1）浓H2SO4（二级）；（2）（HClO4）二级，70-72%）（3）钼锑贮存液浓硫酸（二级）153ml缓慢地倒入约400ml水中，搅拌，冷却。

10g钼酸铵（二级）溶解于约600的300ml水中，冷却。

然后将浓H2SO4溶液倒入钼酸铵溶液中，再加入100ml０.5%酒石酸锑钾（KSbOC4H4O6·1/2H2O，二级）溶液，最后用水稀释至1升，避光贮存。

此贮存液含1%钼酸铵，5.5N H2SO4（4）钼锑抗显色剂 1.50g抗坏血酸（C6H8O6,左旋，旋光度+21～+220，二级）溶于200ml水中，加入5ml浓H2SO4，转入1升容量瓶中，用水定容。

此为100mlppm P标准溶液，可以长期保存。

取此溶液准确稀释20倍，即为5ppm P标准溶液，此溶液不宜久存。

7-5 操作步骤（1）待测液的制备称取通过100目的烘干土壤样品1.0×××g置于50ml三角瓶中，以少量水润湿，加入浓H2SO48ml,摇动后（最好放置过夜）再加入70-72%的HClO4 10滴，摇匀，瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间为45-60分钟（注）。

e+h的磷表(蓝法)试剂理论说明1. 引言1.1 概述磷是生命中不可或缺的元素之一，广泛存在于土壤、水体和生物体中。

其在环境监测、农田管理以及工业生产等领域都具有重要的应用价值。

因此，准确、快速地检测和测定磷含量成为了科学研究和工程实践中的迫切需求。

在磷的分析检测方法中，自20世纪初期以来，磷酸盐试剂已被广泛应用。

其中，磷表(蓝法)试剂作为一种常用的分析试剂，在准确测定磷含量方面表现出色，并被广泛用于水质监测、土壤肥力检测以及农业生产过程中。

本文旨在对磷表(蓝法)试剂进行理论说明，包括其原理、制备方法、反应机理以及应用领域等方面内容。

1.2 文章结构本文分为五个主要部分进行阐述：引言部分介绍了文章的背景和目的；第二部分详细说明了磷表(蓝法)试剂的原理，包括其背景与起源、成分与制备方法以及反应机理与作用方式；第三部分探讨了磷表(蓝法)试剂在环境监测、农业和工业领域的具体应用；第四部分对磷表(蓝法)试剂的优缺点进行了分析；最后一部分总结研究成果，并提出了未来的研究方向。

1.3 目的本文旨在深入探讨磷表(蓝法)试剂在磷含量检测方面的重要性和应用价值。

通过对其原理、制备方法以及反应机理的详细介绍，可以使读者更好地理解并掌握该试剂的使用。

此外，通过对其在环境监测、农业和工业领域中广泛应用的实例介绍，可以展示其实际价值和潜力。

通过对优缺点进行全面评估，可以为科学家和决策者提供参考，并指导未来研究工作的方向。

2. 磷表(蓝法)试剂的原理2.1 背景与起源磷表(蓝法)试剂是一种常用于测定水中磷含量的化学试剂。

其名称中的"蓝法"来源于其最终产物形成的深蓝色络合物。

磷表试剂最早由美国化学家Murphy于1930年开发出来，用于测定土壤和水体中的无机磷含量。

2.2 成分与制备方法磷表试剂主要包括三个组分：富马酸铵、亚硫酸铵和二氧化硫。

富马酸铵作为络合剂，与形成的深蓝色络合物稳定结合；亚硫酸铵在反应中还原五价磷为三价磷；而二氧化硫则作为催化剂提高反应速率。

无机磷测定试剂盒（磷钼酸盐法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中无机磷的浓度。

1.1规格液体双剂型试剂1(R1)：80mL×2，试剂2(R2)：36mL×2，校准品：2mL×1；试剂1(R1)：60mL×2，试剂2(R2)：27mL×2，校准品：2mL×1。

液体型试剂1(R1)：100mL×2，试剂2(R2)：10mL×1，校准品：2mL×1 1.2规格划分说明根据净含量划分规格。

1.3主要组成成分1.3.1 液体双剂型试剂盒由试剂1（R1）液体、试剂2（R2）液体和校准品液体组成。

1.3.1.1 试剂1（R1）液体表面活性剂硫酸 0.36mol/L1.3.1.2 试剂2（R2）液体钼酸铵 3.5 mmol/L硫酸 0.36 mol/L氯化钠 150 mmol/L1.3.1.3 校准品：水基质（1个浓度）磷酸二氢钾校准品定值范围 1.03 mmol/L～1.55mmol/L（每批定值）1.3.2 液体型试剂盒由试剂1（R1）液体、试剂2（R2）液体和校准品液体组成。

1.3.2.1 试剂1（R1）液体钼酸铵 1.06 mmol/L硫酸 0.446 mol/L1.3.2.2试剂2（R2）液体吐温-801.3.2.3 校准品：水基质（1个浓度）磷酸二氢钾校准品定值范围 1.03 mmol/L～1.55mmol/L（每批定值）2.1 外观液体双剂型试剂盒中各组件的外观应满足：a) 试剂1（R1）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；b) 试剂2（R2）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；c)校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

液体型试剂盒中各组件的外观应满足：a) 试剂1（R1）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；b) 试剂2（R2）应为淡黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；c)校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

无机磷测定试剂盒（磷钼酸还原法）
适用范围：本产品适用于体外定量测定人血清中磷的含量。

1.1 产品规格
1.2 主要组成成分
2.1外观
2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无破损；
2.1.2试剂为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

2.2净含量
净含量不低于标示值。

2.3试剂空白吸光度
在主波长340nm、副波长405nm，37℃条件下, 试剂空白吸光度A≤0.5。

2.4线性范围
（0.5,6）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990。

相对偏差不超过±10.0% 2.5分析灵敏度
在产品说明书规定参数设定条件下，浓度为1.53mmol/L时，吸光度变化△A≥0.161。

2.6 精密度
2.6.1批内重复性
CV≤8.0%。

2.6.2批间差
相对极差R≤10.0%。

2.7 准确度
测定参考物质GBW（E）080186，测定结果应在标称值不超过±10.0%。

2.8 稳定性
未开封试剂2℃～8℃储存,有效期为12个月。

取到效期后2个月内产品进行检测, 检测结果应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1和2.7的规定。

土壤总磷/有机磷/无机磷含量检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4071规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体100mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体 5.5mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前配制，加入8mL蒸馏水，充分溶解后加入4mL试剂二，混匀；配好的溶液应为浅黄色。

若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，该试剂应现配现用。

2、标准品：40µg/mL无机磷标准品。

产品说明：土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。

土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。

同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。

利用钼蓝法定磷。

取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。

技术指标：最低检出限：0.3932µg/mL线性范围：1-400µg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、可调式水浴锅、分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉、研钵、蒸馏水、30-50目筛、100目筛。

操作步骤：一、样本处理：（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.无机磷：称取通过30-50目筛子的风干土样0.01g，转移到1mL离心管，加入1mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000rpm，离心10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。

2.总磷提取：取通过100目筛子的风干土样，550℃灼烧1h，冷却后称取约0.01g，转移到1mL离心管，加入1mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000rpm，离心10min，取上清液二，用于总磷含量测定。

总磷的测定方法总磷是指水体或土壤中的无机磷和有机磷的总和，是评价水体或土壤中营养盐含量的重要指标之一。

总磷的测定方法有多种，包括分光光度法、原子荧光光谱法、离子色谱法等。

下面将分别介绍这些方法的测定步骤和操作要点。

一、分光光度法。

分光光度法是测定总磷含量的常用方法之一。

其操作步骤如下：1. 样品处理，将水样或土壤样品按照一定的方法进行提取和预处理，得到待测液体。

2. 酸化处理，将待测液体中的有机磷转化为无机磷，通常采用硫酸或过氧化钾酸化。

3. 过滤，将酸化后的液体进行过滤，去除杂质。

4. 加试剂，向过滤后的样品中加入含有反应试剂的溶液，使其与总磷发生显色反应。

5. 分光光度测定，使用分光光度计测定样品中总磷的吸光度，根据标准曲线计算出总磷的含量。

二、原子荧光光谱法。

原子荧光光谱法是一种高灵敏度、高选择性的分析方法，适用于测定微量总磷。

其操作步骤如下：1. 样品制备，将水样或土壤样品进行酸溶解或干燥研磨处理，得到适合原子荧光光谱分析的样品。

2. 原子荧光光谱分析，使用原子荧光光谱仪对样品进行分析，得到总磷的含量。

三、离子色谱法。

离子色谱法是一种准确、快速的离子分析方法，适用于测定水体中的无机磷和有机磷。

其操作步骤如下：1. 样品预处理，将水样进行预处理，通常包括过滤、酸化等步骤。

2. 样品分析，将预处理后的样品通过离子色谱仪进行分析，得到无机磷和有机磷的含量。

以上是总磷的测定方法的简要介绍，不同的方法适用于不同类型的样品和不同的分析要求。

在进行总磷测定时，需要根据实际情况选择合适的方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。

同时，对于不同的测定方法，也需要注意其操作要点和注意事项，确保实验过程中的安全和准确。

中性、碱性土壤速效磷含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2965规格：100T/96S产品内容：提取液：液体125mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂三：液体5mL×1瓶，室温保存。

标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存。

工作液：35mL棕色空瓶×1瓶。

O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为工作液（定磷剂）的配制：按H2浅黄色。

若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、一部分微溶性的无机磷和易矿化的有机磷等，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

用弱碱法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm 光吸收，即可计算磷含量。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、20目筛、漩涡震荡仪、EP管、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理：新鲜土样风干，过20目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10-20的比例（建议称取约0.05g 土样，加入1mL提取液），振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、将10μmol/mL标准液用提取液稀释为6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL的标准溶液备用。

无机磷检测作业指导书1.试剂及其配制1.1硫酸溶液：c（H2SO4）=6.0mol/L在搅拌下将300mL硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/mL）缓缓加到600mL水。

1.2钼酸铵溶液溶解28g钼酸铵【（NH4）6Mo7O24·4H2O】于200mL 水中。

溶液变混浊时，应重配。

1.3酒石酸锑钾溶液溶解6g酒石酸锑钾（C4H4KO7Sb·1/2H2O）于200mL水中，贮于聚乙烯瓶中。

溶液变混浊时，应重配。

1.4混合溶液搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸溶液中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，混匀。

贮于棕色玻璃瓶中。

溶液变混浊时，应重配。

1.5抗坏血酸溶液溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。

在4℃避光保存，可稳定1个月。

1.6磷酸盐标准贮备液称取1.011g硝酸钾（预先在110℃烘1h，置于干燥器中冷却至室温）用少量蒸馏水溶解后，转移至1000ml容量瓶中，稀释至标线，加1.0ml三氯甲烷，混匀，浓度为140.0mg/L，有效期半年。

1.7磷酸盐标准使用液吸取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中，稀释至标线，混匀，浓度1.40mg/L。

2.绘制工作曲线2.1量取磷酸盐标准使用溶液0，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00mL于50mL具塞量筒中，加水至50mL标线，混匀。

各浓度依次为0，0.030，0.060，0.120，0.180，0.240mg/L。

2.2各加1.0mL混合溶液，1.0mL抗坏血酸溶液，混匀。

显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Ai。

其中零浓度为标准空白吸光值Ao。

2.3以吸光值（Ai—Ao）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线。

3.水样测定量取50mL经0.45um微孔滤膜过滤的水样至具塞量筒中，按绘制工作曲线步骤测定吸光值Aw。

无机磷检测试剂盒(硫酸亚铁钼蓝比色法)简介：血清中的无机磷(Inorganic phosphorous)主要由H 2PO 4-和HPO 42-两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在在不同的pH 环境下能快速相互转换。

WHO 推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。

Leagene 无机磷检测试剂盒(硫酸亚铁钼蓝比色法)是先经硫酸亚铁提纯蛋白，利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，后者被硫酸亚铁还原成蓝紫色的复合物，通过分光光度计检测610nm 处吸光度值，根据公式计算出无机磷含量。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 (选做)制备样品：① 血浆、血清样品：取待测血浆、血清样品，加入Pi Assay buffer ，充分混匀，室温静置，离心取上清，-20℃冻存，用于Pi 的检测。

② 尿液样品：取适量的待测尿液，用50%的盐酸调pH 至6.0。

用蒸馏水做稀释。

取0.1ml 稀释后的尿液样品，加Pi Assay buffer ，充分混匀，室温静置，离心取上清，-20℃冻存，用于Pi 的检测。

③ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清。

取匀浆样品，加入Pi Assay buffer ，充分混匀，室温静置，离心取上清，-20℃冻存，用于Pi 的检测。

④ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Pi ，可以使用去离子水稀释。

⑤ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Pi 含量。

2、 制备磷标准工作液：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：标准品稀释液=的比例稀释，即获得磷标准(1.292mmol/L)。

3、 Pi 检测：按下表操作。

编号 名称TC1039 50T TC1039 100T Storage试剂(A): 磷标准(1mg/ml) 1ml 2ml 4℃ 试剂(B): 标准品稀释液 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(C): Pi Assay buffer 250ml 500ml RT 试剂(D): 硫酸亚铁钼蓝显色液 15ml30ml4℃ 避光使用说明书1份加入物空白管标准管测定管Pi Assay buffer/ml 2.0 ——磷标准工作液/ml — 2.0 —处理后的待测上清液/ml —— 2.0硫酸亚铁钼蓝显色液/ml 0.25 0.25 0.254、混匀，室温静置，分光光度计640nm处检测，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，读取各管吸光度值。