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1土壤全磷的测定(硫酸一高氯酸消煮法)方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的硫酸和强氧化剂高氯酸作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。
操作步骤1.在分析天平上准确称取通过100目筛(孔径为0.25mm)的土壤样品1g(精确到0.0001)置于50ml三角瓶中，以少量水湿润，并加入浓H2SO48ml，摇动后(最好放置过夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴摇匀。
2.于瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间约为45—60分钟。
3.将冷却后的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，冲冼时用水应少量多次。
轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，用水定容，用干燥漏斗和无磷滤纸将溶液滤入干燥的100ml三角瓶中。
同时做空白试验。
4.吸取滤液2—10ml于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用稀氢氧化钠(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。
5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。
6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。
7.工作曲线的绘制。
分别吸取5mg/L标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml 容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。
即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。
在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。
结果计算全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100式中：显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；显色液体积—本操作中为50ml；分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；106—将ug换算成gW—土样重(g)。
土壤有效磷有机磷全磷测定方法土壤全磷测定方法HClO4—H2SO4法待测液制备：1.准确称取通过100目筛子的风干土样0.2500—0.500g，置于50ml凯式瓶（或者50ml消化管）中2.以少量水湿润后，加入浓硫酸4ml,摇匀后，再加70-72%高氯酸1ml,摇匀，瓶口上加一个小漏斗，通风厨静置24小时3.置于消化炉中进行3小时消煮，待溶液澄清透明即可。
4.将冷却后的消化液转移入100ml容量瓶中（容量瓶中预先盛水20-30ml），按少量多次的原则用水冲洗消化管，轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，加水定容，静置过夜5.次日小心吸取上层澄清液进行磷的测定。
6.样品空白溶液制备：在样品分解的同时做一个空白实验，即不加土样而加同样量的浓硫酸和高氯酸，与样品进行相同处理土壤速效磷测定方法M3浸提法M3溶液配置(1L)：乙酸：11.5 ml浓硝酸：0.82 ml硝酸铵：20 g氟化铵：0.5556gEDTA：0.2922g基本步骤：1.称取3g过2mm筛子风干土样于50ml聚已烯离心管中2.加入30mlM3浸提液，置于振荡机中振荡5min，振荡速度为200转，温度25℃3.置于离心机中离心，离心速度为8000转/min,温度为25℃，如溶液颜色很深，在离心前加入一定量的活性炭脱色4.用无磷滤纸过滤5.澄清液进行磷的测定。
6.样品空白溶液制备：即不加土样而加同样量M3溶液，与样品进行同样处理。
土壤有机磷含量测定（灼烧法）0.1M硫酸溶液配置：取6ml浓硫酸定容至1L，配置方法浓硫酸缓慢加入水中，最后定容至1000mL 的容量瓶中。
基本步骤：1.准确称取过100目筛子的风干土壤样品0.4000g置于15ml瓷坩埚中2.置于550℃马弗炉中灼烧1小时，取出冷却3.用40ml0.1M硫酸溶液将土样洗入聚已烯离心管中4.摇匀后将离心管置于40℃的烘箱中一个小时5.取出冷却至室温，置于离心机中离心5min，转速8000转/min,温度25℃6.用无磷滤纸过滤7.澄清液用于磷的测定8.称取0.4000g土样于聚已烯离心管中，加入40ml0.1M硫酸溶液，其他步骤同上，测定未灼烧土壤样品浸提液中磷的含量。
一、实验目的1. 掌握土壤中磷的提取和测定方法。
2. 了解土壤中磷的形态及其影响因素。
3. 通过实验，提高实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理土壤中的磷主要以有机磷和无机磷两种形态存在。
无机磷主要包括正磷酸盐、磷酸氢盐和磷酸二氢盐等。
本实验采用硫酸-过氧化氢消解法提取土壤中的磷，利用钼锑抗显色反应，通过分光光度法测定土壤中磷的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、电热板、离心机、移液器、容量瓶、锥形瓶、烧杯、玻璃棒等。
2. 试剂：（1）土壤样品：采集于不同地区的土壤，过筛后备用。
（2）硝酸、过氧化氢、硫酸、钼酸铵、酒石酸锑钾、抗坏血酸等。
四、实验步骤1. 土壤样品的制备：准确称取土壤样品0.5g，置于锥形瓶中。
2. 消解：向锥形瓶中加入5ml硝酸、2ml过氧化氢，置于电热板上加热消解，直至溶液呈无色透明。
3. 定容：待溶液冷却后，转移至50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
4. 显色：向容量瓶中加入2ml钼酸铵溶液、1ml酒石酸锑钾溶液、1ml抗坏血酸溶液，混匀，静置10min。
5. 比色：在波长680nm处，用1cm比色皿，以试剂空白作参比，测定吸光度。
6. 计算磷含量：根据标准曲线，计算土壤样品中磷的含量。
五、实验数据与结果1. 标准曲线绘制：以磷酸盐标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 土壤样品中磷含量的测定：根据实验数据，查标准曲线得到土壤样品中磷的含量。
六、实验讨论与分析1. 实验结果表明，土壤样品中磷的含量与土壤类型、采样地点等因素有关。
2. 在实验过程中，消解过程对磷的提取和测定结果有较大影响。
本实验采用硫酸-过氧化氢消解法，消解效果较好。
3. 实验过程中，显色反应时间、温度等因素对测定结果有一定影响。
本实验在室温下显色10min，效果较好。
4. 实验结果与土壤样品中磷的实际含量可能存在一定误差，这与实验操作、仪器精度等因素有关。
七、实验结论通过本实验，掌握了土壤中磷的提取和测定方法，了解了土壤中磷的形态及其影响因素。
土壤中有机磷的测定实验方案设计土壤中磷知识总结I、土壤中磷的来源及分布：土壤中的磷素来源于成土矿物、有机物质和含磷化学肥料。
土壤全磷量不能作为当季作物的土壤供磷的水平指标，但可作为表示土壤潜在肥力的一项指标。
土壤磷素分为无机形态和有机形态。
无机形态的磷约占全磷的50%〜90%,主要包括磷酸钙类化合物（Ca-P）、磷酸铁类化合物（Fe-P）、磷酸铝类化合物（AI-P ）和表面为氧化铁胶膜所封闭的闭蓄态磷（O-P）。
风化程度较高的土壤，如红壤以O-P和Fe-P为主，风化程度较低的土壤以Ca-P 和AI-P 为主。
有机形态的磷约占全磷10%〜50%,主要以磷脂、植素、核酸和核蛋白形式存在。
土壤有机磷含量与土壤有机质含量密切相关。
土壤有效磷是指当季作物所能吸收的磷。
土壤中磷移动性很小。
作物吸收的磷主要是土壤溶液中的H2PO- 4和HPO2 4-。
U、磷的营养功能：1、磷是植物体内重要化合物的组成元素；2、磷能加强光合作用和碳水化合物的合成与运转；3、促进氮素代谢；4、磷能促进脂肪代谢；5、提高作物对外界环境的适应性川、作物磷素营养失调的症状缺磷时，各种代谢过程受到抑制，植株生长迟缓、矮小、瘦弱、直立、根系不发达，成熟延迟、籽实细小、植株叶小、叶色暗绿或灰绿、缺乏光泽，主要是细胞发育不良致使叶绿素密度相对提高，同时，Fe的吸收间接地促进叶绿素合成，使叶色暗，严重缺磷时，在不少作物茎叶上明显地呈现紫红色的条纹或斑点（花青苷）甚至叶片枯死脱落，症状一般从基部老叶开始。
逐渐向上部发展。
缺磷造成玉米果穗秃顶，油菜脱荚，棉花和果树落蕾、落花，甘薯及马铃薯薯块变小，耐贮性变差。
磷素过剩，谷类无效分蘖，秕粒增加，叶肥厚而密，植株早衰。
由于磷过多，而引起的病症，通常以缺Zn、Fe、Mg 等的失绿症表现出来。
W土壤中磷的测定方法：测定土壤速效磷的方法选择，酸性土壤一般采用盐酸氟化铵或氢氧化钠一草酸钠法来提取，石灰性土壤或中性土壤采用碳酸氢钠来提取。
土壤中磷含量的测定（比色法）一、现阶段测定土壤中磷含量主要方法有如下几种：（一）中性和石灰性土壤速效磷的测定 (0.5mol/L NaHCO3法)石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。
一般用碳酸盐的碱溶液。
由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。
同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、 CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。
（二）酸性土壤速效磷的测定方法A(0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl法)NH4F--HCI法主要提取酸溶性磷和吸附磷，包括大部分磷酸钙和一部分磷酸铝和磷酸铁。
因为在酸性溶液中氟离子能与三价铝离子和铁离子形成络合物，促使磷酸铝和磷酸铁的溶解：3NH4F+3HF+AlPO4一H3PO4+(NH4)3AlF63NH4F+3HF+FePO4一H3PO4+(NH4)3FeF6溶液中磷与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，在一定酸度下被SnCl2还原成磷钼蓝，蓝色深浅与磷的浓度成正比。
（三）酸性土壤速效磷的测定方法B0.05mol/L HCl-0.025mol/L ( 1/2H2SO4 )法本法特别适用于固定磷较强的酸性土壤。
如土壤有机质含量较低，pH小于6.5，阳离子交换量小于100 cmol/kg的土壤。
本法不仅适用于酸性土壤速效磷的测定，也能用以测定其酸性土壤速效磷的测定方法B 0.05mol/L HCl-0.025mol/L ( 1/2H2SO4 )法他有效养分。
（四）土壤有机磷的分离测定方法原理：土壤经550℃灼烧，使有机磷化合物转化为无机态磷，然后与未经灼烧的同一土样，分别用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液浸提后测定磷量，所得结果的差值即为有机磷。
土壤中全磷测定土壤全磷分析土壤全磷测定要求把无机磷全部溶解，同时把有机磷氧化成无机磷，因此测定的第一步是样品分解，第二步是溶液中磷的测定。
一、HClO4–H2SO4消煮，钼蓝比色法1.方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的H2SO4和强氧化剂HClO4作用，分解成正磷酸盐而进入溶液。
在一定酸度下，正磷酸根与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，在还原剂的作用下形成“钼蓝”，使溶液呈蓝色。
蓝色深浅与磷的含量成正比，可用分光光光度法于700nm处测定。
2.仪器设备分光光度计消煮炉3.试剂（1）浓H2SO4；（2）70%～72%HClO4；（3）2,4-二硝基酚指示剂：0.2g 溶于100 mL水中；（4）4 mol?L-1氢氧化钠溶液；（5）钼锑储存溶液；a浓硫酸153 mL缓缓倒入400 mL水中，b10g 钼酸铵溶于60℃ 300 mL水中，a倒入b中，加入100 mL 5g·L-1的酒石酸锑钾溶液，用水定容摇匀，贮存于棕色试剂瓶中。
（6）钼锑抗显色剂：100 mL钼锑储存溶液中加1.5g抗坏血酸，现配现用。
（7）磷标准贮存溶液（ρ=100 mg·L-1)，0.4390g 磷酸二氢钾（105℃烘2h）溶于100 mL水中，加入5mL硫酸，定容至1L；（8）磷标准溶液（ρ=5.00mg·L-1)，磷标准贮存溶液准确稀释20倍。
4.操作步骤（1）样品消煮称取100目土样0.3～1 g于50 mL消化管中→ 加少量水润湿后加浓硫酸8mL，摇匀→ 加70～72%高氯酸10滴，摇匀，管口加一个小漏斗→ 加热消煮，至溶液开始转白后继续消煮20min→ 冷却后用水洗入100 mL容量瓶中→ 定容摇匀→ 静置过夜取上清液或用干燥的无磷滤纸过滤。
（同时做空白试验）（2）溶液中磷的比色测定移取澄清液或滤液2～10 mL于50ml容量瓶中→ 加水至约30 mL→ 加二硝基酚指示剂2滴→ 用4 mol?L-1 NaOH调节pH至溶液刚呈黄色→ 加钼锑抗显色剂5 mL→ 定容，摇匀→ 半小时后（高于15℃）于700nm处比色测定标准曲线分别移取5.00mg·L-1磷标准溶液0、1、2、3、4、5mL于50mL 容量瓶中，同上操作，以吸光度为纵坐标，磷浓度为横坐标绘制工作曲线。
1土壤全磷的测定(硫酸一高氯酸消煮法)方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的硫酸和强氧化剂高氯酸作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。
操作步骤1.在分析天平上准确称取通过100目筛(孔径为0.25mm)的土壤样品1g(精确到0.0001)置于50ml三角瓶中，以少量水湿润，并加入浓H2SO48ml，摇动后(最好放置过夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴摇匀。
2.于瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间约为45—60分钟。
3.将冷却后的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，冲冼时用水应少量多次。
轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，用水定容，用干燥漏斗和无磷滤纸将溶液滤入干燥的100ml三角瓶中。
同时做空白试验。
4.吸取滤液2—10ml于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用稀氢氧化钠(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。
5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。
6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。
7.工作曲线的绘制。
分别吸取5mg/L标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml 容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。
即得0，,,,,,,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。
在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。
结果计算全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100式中：显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；显色液体积—本操作中为50ml；分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；106—将ug换算成gW—土样重(g)。
土壤中有机磷的测定——实验方案设计土壤中磷知识总结Ⅰ、土壤中磷的来源及分布：土壤中的磷素来源于成土矿物、有机物质和含磷化学肥料。
土壤全磷量不能作为当季作物的土壤供磷的水平指标，但可作为表示土壤潜在肥力的一项指标。
土壤磷素分为无机形态和有机形态。
无机形态的磷约占全磷的50％～90％，主要包括磷酸钙类化合物（Ca-P）、磷酸铁类化合物（Fe-P）、磷酸铝类化合物（Al-P）和表面为氧化铁胶膜所封闭的闭蓄态磷（O-P）。
风化程度较高的土壤，如红壤以O-P和Fe-P为主，风化程度较低的土壤以Ca-P 和Al-P为主。
有机形态的磷约占全磷10％～50％，主要以磷脂、植素、核酸和核蛋白形式存在。
土壤有机磷含量与土壤有机质含量密切相关。
土壤有效磷是指当季作物所能吸收的磷。
土壤中磷移动性很小。
作物吸收的磷主要是土壤溶液中的H2PO- 4和HPO2 4-。
Ⅱ、磷的营养功能：1、磷是植物体内重要化合物的组成元素；2、磷能加强光合作用和碳水化合物的合成与运转；3、促进氮素代谢；4、磷能促进脂肪代谢；5、提高作物对外界环境的适应性Ⅲ、作物磷素营养失调的症状缺磷时，各种代谢过程受到抑制，植株生长迟缓、矮小、瘦弱、直立、根系不发达，成熟延迟、籽实细小、植株叶小、叶色暗绿或灰绿、缺乏光泽，主要是细胞发育不良致使叶绿素密度相对提高，同时，Fe的吸收间接地促进叶绿素合成，使叶色暗，严重缺磷时，在不少作物茎叶上明显地呈现紫红色的条纹或斑点（花青苷）甚至叶片枯死脱落，症状一般从基部老叶开始。
逐渐向上部发展。
缺磷造成玉米果穗秃顶，油菜脱荚，棉花和果树落蕾、落花，甘薯及马铃薯薯块变小，耐贮性变差。
磷素过剩，谷类无效分蘖，秕粒增加，叶肥厚而密，植株早衰。
由于磷过多，而引起的病症，通常以缺Zn、Fe、Mg等的失绿症表现出来。
Ⅳ土壤中磷的测定方法:测定土壤速效磷的方法选择，酸性土壤一般采用盐酸氟化铵或氢氧化钠一草酸钠法来提取，石灰性土壤或中性土壤采用碳酸氢钠来提取。
用NaHCO 3 溶液(pH8.5) 提取土壤速效磷，在石灰性土壤中提取液中的HCO 3 - 可和土壤溶液中的Ca 2+形成CaCO 3沉淀，从而降低了Ca 2+ 的活度而使某些活性较大的Ca—p 被提取出来。
在酸性土壤中因pH 提高而使Fe-p ，A1-P 水解而部分被提取。
实验部分一、实验目的1、了解光度法测定土壤中有效磷的原理及方法2、熟悉分光光度计的使用二、实验原理1、土壤中的磷大部分不能被植物直接吸收利用，易被吸收利用的有效磷通常含量很低。
土壤中的有效磷是指能为当季作物吸收的磷量。
2.土壤中有效磷的测定方法有：生物方法、同位素方法、阴离子交换树脂方法及化学方法等。
其中应用最普遍的是化学方法。
它是用浸取剂提取土壤中的一部分有效磷。
浸取剂种类很多，它的选择主要根据各种土壤的性质而定。
酸性土壤中磷酸铁和磷酸铝形态的有效磷可用酸性氟化铵提取，形成氟铝化铵和氟铁化铵配合物，少量的钙离子形成氟化钙沉淀，磷酸根离子被提取到溶液中来，石灰性土壤则采用碳酸氢钠溶液浸取。
3.在含磷的溶液中，加入钼酸铵，在一定酸度条件下，溶液中的磷酸与钼酸络合形成黄色的磷钼杂合酸——磷钼黄。
H 3PO4+12H2MoO4==H3[PMo12O40]+12H2O三、主要仪器和试剂1、仪器：723分光光度计，10mL吸量管，振荡机，漏斗，滤纸。
2个滴瓶，50mL带塞比色管4个，50mL三角瓶4个，50mL容量瓶6个,25mL容量瓶4个。
2、试剂：（1）HCl溶液（0.5mol/L）50mL ：4.5mL浓盐酸+100mL水（2）NH4F溶液（1mol/L）30mL：称取3.7g氟化铵，溶于100mL蒸馏水中（3）提取剂：分别移取15mL 1mol/LNH4F溶液和25mL 0.5mol/LHCl溶液，假如460mL蒸馏水中，配制成0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl溶液（500mL）。
（4） H3BO3溶液（100g/L）100mL ：10g硼酸溶解于水中，稀释至100mL.（5） 15g/L钼酸铵-3.5mol/L盐酸溶液：溶解15g钼酸铵于300mL蒸馏水中，加热至60℃左右，如有沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入350mL 10mol/L HCl溶液，并用玻璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至1L，充分摇匀，储存于棕色瓶中。
放置时间不得超过两个月。
（6）氯化亚锡溶液（25g/L）：称取氯化亚锡2.5 g溶于10mL浓盐酸中，溶解后加入90mL蒸馏水，混合均匀置于棕色瓶中，此溶液现配现用。
（7）磷标准溶液（50μg/mL）：准确称取105℃烘干的KH2PO4（A.R）0.2195g，溶解于400mL水中加浓H2SO45mL(防止溶液长霉菌)，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，要匀。
准确移取上述磷标准溶液25.00mL于250mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即为5μg·/m L-1（此溶液不宜久存）。
四、实验步骤1、吸收池配套性检验用拇指和食指捏住洗手池毛面，分别在4个吸收池内注入蒸馏水3/4，用滤纸吸干池外壁的水滴，再用擦镜纸擦拭光面至无痕迹，垂直放在吸收池架上，盖上样品室盖，将在参比位置上的吸收池推入光路调零调百。
拉动样品槽拉杆，依次将被测溶液推入光路，读取相应的透射比或吸光度。
若所测得各吸收池透射比偏差小于0.5%，则这些吸收池可以配套使用2、在不同波长条件下测定标准溶液的吸光度：用吸量管吸取磷标准溶液（5µg·mL-1）5.0 mL分别放入25 mL容量瓶中，加入0.03mol·L-1NH4F-0.025mol·L-1HCl溶液5-10 mL（按所取滤液毫升数而定），用吸量管加钼酸铵-盐酸溶液5mL，加蒸馏水至瓶颈刻度，并滴加25g·L-1氯化亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，与土样溶液同时显色，用1cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于722E型分光光度计中，在440—700nm波长范围内分别测定其吸光度A值。
当临近最大吸收波长附近时应间隔波长10nm测A值，其他各处可间隔波长20nm测定。
然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。
3、在不同显色剂用量条件下测定标准溶液的吸光度：按步骤2进行操作，加入不同量的显色剂0、1,00、3.0mL、4.0mL、5.0mL、7.0mL、9.00mL摇匀。
用1cm 吸收池，以试剂空白为参比溶液，在选定的波长下测吸光度。
记录各吸光度。
在最大吸光度附近每隔0.10mL测吸光度。
4、有色配合物稳定性试验取两个洁净的容量瓶，用步骤（2）方法配制氯化亚锡有色溶液和试剂空白溶液，放置约2min，立即用1cm吸收池，以试剂空白溶液为参比溶液，在选定的波长下测定吸光度。
以后隔10min、20min、30min、60min、120min测定一次吸5、工作曲线的制作分别准确移取5µg·mL-1磷标准溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL于6个25mL容量瓶中，加入0.03mol·L-1NH4F-0.025mol·L-1HCl溶液5-10 mL （按所取滤液毫升数而定），用吸量管加钼酸铵-盐酸溶液5mL，加蒸馏水至瓶颈刻度，并滴加25g·L-1氯化亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，与土样溶液同时显色，测其吸光度。
6、土壤样品预处理称取风干土壤样品1g（精确至0.01g）,放入50~100mL小塑料瓶（或50mL带塞比色管）中，加入0.03mol·L-1NH4F-0.25mol·L-1HCl溶液20mL，稍摇匀，立即放在振荡机上，振荡30分钟。
用无磷干滤纸过滤，滤纸承接于盛有100g·L-1H3BO3溶液15滴的50mL 三角瓶中，摇动瓶内溶液（加H3BO3防止F-1对显色的干扰和腐蚀玻璃仪器）。
7、土壤中有效磷的测定准确移取上述土壤滤液5~10mL容量瓶中，用吸量管加入15g·L-1钼酸铵-盐酸溶液5mL，摇匀，加入蒸馏水至瓶颈刻度，滴加25g·L-1.氯化亚锡3滴后，再用水稀释至刻度，充分摇匀。
显色15min后，再分光光度计上，以试剂为空白，用1cm比色皿在680nm处测其吸光度值。
五、注意事项用氯化亚锡作还原剂作还原剂生成磷钼盐，溶液的颜色不够稳定，必须严格控制比色时间，一般在显色后的15-20分钟内颜色较为稳定，显色后应准确放置15min后，立即比色，并在5min内完成比色操作。
六、数据处理七、实验评议与讨论所需仪器与试剂清单1、仪器723分光光度计，10mL吸量管，振荡机，漏斗滤纸。
2个滴瓶，50mL带塞比色管4个，50mL三角瓶4个，50mL容量瓶6个,25mL25mL容量瓶4个。
2、试剂（1）HCl溶液（0.5mol/L）：4.2mL浓盐酸+100mL水（2）NH4F溶液（1mol/L）：称取3.7g氟化铵，溶于100mL蒸馏水中（3）提取剂：分别移取15mL1mol/LNH4F溶液和25mL 0.5mol/LHCl 溶液，假如460mL蒸馏水中，配制成0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl溶液（500mL）。
（4） H3BO3溶液（100g/L）100mL ：10g硼酸溶解于水中，稀释至100mL.（5） 15g/L钼酸铵-3.5mol/L盐酸溶液：溶解15g钼酸铵于300mL蒸馏水中，加热至60℃左右，如有沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入350mL 10mol/L HCl溶液，并用玻璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至1L，充分摇匀，储存于棕色瓶中。
放置时间不得超过两个月。
（6）氯化亚锡溶液（25g/L）：称取氯化亚锡2.5 g溶于10mL浓盐酸中，溶解后加入90mL蒸馏水，混合均匀置于棕色瓶中，此溶液现配现用。
（7）磷标准溶液（50μg/mL）：准确称取105℃烘干的KH2PO4（A.R）0.2195g，溶解于400mL水中加浓H2SO45mL(防止溶液长霉菌)，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，要匀。
准确移取上述磷标准溶液25.00mL于250mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即为5μg·/m L-1（此溶液不宜久存）。
日程安排第一周6.18-6.19：查阅资料，设计实验方案6.20 ：方案探讨，改进，确定6.21 ：实验仪器与试剂准备第二周6.25：配制实验所需试剂6.26-6.27：条件实验每日两个6.28-6.29：土壤样品测定(每日一种试样)第三周7.2：试样处理及测定（每日一种式样）7.3：加标回收量测定7.4-7.5 ：实验室清扫，仪器药品整理，实验总结。
