白细胞分类计数(手工法)
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ICS备案号:WS白细胞分类计数参考方法Reference leukocyte differential count method(报批稿)中华人民共和国卫生部 发布目次前言 (Ⅲ)1范围 (4)2总则 (4)3方法 (4)3.1 样本采集 (4)3.2 血涂片制备和要求 (4)3.3 血涂片染色 (4)3.4 需分类的外周血有核细胞 (5)3.5 血涂片检查步骤 (5)3.6 检验人员要求和考核 (6)附录A(规范性附录)常见外周血白细胞形态学 (7)附录B(规范性附录)计算公式 (9)附录C(规范性附录)自动白细胞分类计数的性能评价 (10)参考文献 (16)前言为了保证白细胞分类计数结果具有溯源性和准确性,特制定本标准。
本标准修改采用了美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁发的《白细胞分类计数参考方法和仪器评价方法》标准(H20-A)。
本标准从20XX年XX月XX日起实施。
本标准的附录A、附录B和附录C都是规范性附录。
本标准由卫生部医政司提出。
本标准由上海市临床检验中心负责起草。
本标准主要起草人:胡晓波、许蕾、宋颖、方心驰、张锦锋。
本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。
白细胞分类计数参考方法1 范围本标准规定了建立白细胞分类计数参考方法中有关样本采集、血涂片制备的要求、血涂片染色、血涂片有核细胞检查的步骤、对检验人员的要求和考核等内容。
本标准适用于建立白细胞分类计数参考方法的实验室2 总则2.1 本标准采用手工目视显微镜计数法作为白细胞分类计数的参考方法。
2.2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性,建立参考方法的实验室必须进行比对。
3 方法3.1 样本采集将静脉血采集于EDTA-K2抗凝剂(液体或粉末状)中(浓度为每毫升血液含1.5~2.2mg EDTA-K2·H2O)。
采血后立即混匀,应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。
3.2 血涂片制备和要求3.2.1 血涂片制备3.2.1.1 每份样本制作3张血涂片。
白细胞分类计数(手工法)SOP文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第1 页,共5 页白细胞分类计数(手工法)[测定原理]把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片,用复合染料构成的染色液染色,血片中的细胞由于内容物不同,而被染成不同的颜色,根据各类白细胞形态特征予以分类计数,得相对比值(百分率),以观察数量)形态和质量的变化,对疾病有辅助诊断意义。
[试剂及仪器](一)染色液1. 瑞氏—姬姆萨复合染色液I液取瑞氏染粉 lg、姬姆萨染粉0.3g,置洁净研钵中,加 2 ML丙三醇和少量甲醇(分析纯),研磨片刻,吸出上层染液。
再加少量甲醇,继续研磨,再吸出上清液。
如此连续几次,共用甲醇500ml。
收集于棕色玻璃瓶中,每天早、晚各振摇3min,共5天,以后存放一周即能使用。
?液 pH6.4—6.8磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾(无水)6.64g磷酸氢二钠(无水)2.56g加少量蒸馏水溶解,用磷酸盐调整 pH,加水至1000ml。
2(快速染色液I液:磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 2.56g水溶性伊红 Y 4g(或伊红 B2.5g)蒸馏水 1000ml石炭酸 40ml煮沸,待冷备用。
?液亚甲蓝 4g蒸馏水 1000m1蒸馏水 1000m1高锰酸钾 2.4g煮沸,待冷备用。
文件编号: xxxx医院 XXXX临床检验实验室版序:xxxx页码:第2 页,共5 页白细胞分类计数(手工法) 3(30s快速单一染色液贮存液瑞氏染粉 2.0g姬姆萨染粉 0.6g天青 E 0.6g甘油 10.0ml聚乙烯D比咯烷酮(PVP) 20.0g(或曲拉通X-100 3ml)甲醇 1000ml磷酸盐缓冲液(pH6.2-6.8)磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 0.26g石炭酸 4.0ml蒸馏水加至 1000ml应用液l液、2液按3:1比例混合放置14天后备用。
(二)显微镜。
(三)计数器。
[标本的采集]取手指血或静脉血1.0ml,置于抗凝管中(2%EDTAK2)摇匀待检。
白细胞计数计算步骤白细胞计数是一项常见的医学检验项目,用于评估人体免疫系统的功能和检测疾病。
白细胞是人体免疫系统的主要组成部分之一,通过对白细胞数量的计算,可以提供重要的健康参考指标。
下面将介绍白细胞计数的具体步骤。
一、前期准备进行白细胞计数需要一些基本的实验室设备和试剂。
首先,需要一个血液标本,可以是采集自患者的静脉血或者是其他合适的来源。
此外,还需要抗凝剂,用于防止血液在采集后凝结。
实验室技术人员需要确保标本的采集和储存符合规范,避免任何外部因素对结果的影响。
二、样本处理在进行白细胞计数之前,需要先对血液标本进行样本处理。
通常,最常用的方式是将血液标本进行稀释,以提高结果的准确性。
稀释液可以采用盐水或其他合适的稀释液。
将血液标本和稀释液按照一定比例混合,得到适当稀释的样本。
三、计数方法有多种方法可用于白细胞计数,常用的有手工计数和自动计数两种方法。
下面将分别介绍这两种方法。
1. 手工计数手工计数是一种基本的方法,需要使用显微镜和血液计数室。
首先,将稀释后的标本吸入血液计数室中,并等待一段时间,以使白细胞在计数室中沉淀。
然后,使用显微镜对计数室中的细胞进行观察和计数。
通常,需要随机选择数个视野并计算细胞的数量,然后取平均值作为结果。
2. 自动计数自动计数是一种高效且准确的方法,通过自动化设备进行细胞计数和分类。
在这种方法中,稀释后的标本被放入自动计数仪器中。
仪器将自动进行细胞计数和分类,然后给出结果。
自动计数具有快速、高通量和准确性高的优点,且消除了人为误差的影响。
四、结果解读得到白细胞计数的结果后,需要进行正确的解读。
白细胞计数的正常范围通常在每立方毫米血液中4,000到11,000个细胞。
不同的检测方法和实验室可能会有轻微的差异,因此应该参考具体的实验室参考值进行解读。
如果白细胞计数超出正常范围,可能表明存在某种疾病或感染。
在这种情况下,通常需要结合其他检验结果和临床症状来做出准确的诊断。
白细胞分类手工计数【操作人员】经批准人授权的同志。
【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜,血球分类计算器。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改,可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】白细胞分类计数的手工操作。
【方法学原理】把血液制成细胞分布均匀的薄膜徐片,用复合染料染色,根据各类白细胞形态特征予以分类计数,求得各类白细胞的比值(百分率),并可计算出各类白细胞的绝对值,以观察数量、形态和质量的变化,对疾病有辅助诊断意义。
【试剂】瑞氏试剂。
【操作步骤】1. 采血后推制厚薄适宜盼血膜片,血膜应呈舌状,头、体,尾清晰可分。
2. 推好的血膜在空气中晃动,以促使快干,天气寒冷或潮湿时,应于37℃温箱中保温促干,以免细胞变形缩小。
3. 瑞氏染色。
4. 先用低倍镜观察全片的染色质量和细胞分布情况,注意血片的边缘和尾部是否有巨大异常细胞和徽丝蚴等,然后选择涂片的体尾交界处染色良好的区域,在油镜下自血膜的体尾交界处向头部方向迂回检查,线路呈“弓”字形,计数l00或200个白细胞,按其形态特征进行分类计数,求出各类白细胞的比值(百分率)。
【参考范围】成人白细胞分类参考值────────────────────────────────百分率(%) 绝对值(×109/L)────────────────────────────────中性杆状核粒细胞 1-5 (0.04-0.5)中性分叶核粒细胞 50-70 (2-7)嗜酸性粒细胞 0.5-5 (0.02-0.5)嗜碱性粒细胞 0-1 (O-1)淋巴细胞 20-40 (0.8-4)单核细胞 3-8 (0.12-0.8)────────────────────────────────【质量控制】1.一般选择涂片的体尾交界处染色良好的区域用油镜计数,移动线路呈“弓”字形,避免重复计数。
临床检验之白细胞计数-练习题及答案(一)1.白细胞计数:白细胞计数是测定单位体积内血液中各种细胞总数。
2.下列不属于白细胞三分群分类的是()A.小细胞B.中间细胞C.大细胞D.单核细胞解析:D 白细胞三分群分类为小细胞、中间细胞、大细胞。
白细胞数计算的方法包括手工法和血细胞分析仪计数法;而白细胞三分群的计数法是血细胞分析仪计数法中的电阻抗原理。
3.下列不属于白细胞五分群分类的是()A.中性粒细胞B.浆细胞C.淋巴细胞D.单核细胞解析:B 白细胞五分群分类为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。
4.白细胞计数的参考方法是()A.手工计数法B.电阻抗原理C.电阻抗与射频技术联合白细胞分类法D.光散射与细胞化学技术联合白细胞分类计数法解析:A 白细胞计数的参考方法是手工计数法;而电阻抗原理、电阻抗与射频技术联合白细胞分类法、光散射与细胞化学技术联合白细胞分类计数法、容量电导光散射(VCS)白细胞分类法、多角度偏振光散射白细胞分类技术属于血细胞分析仪的分类计数法。
5.下列关于白细胞手工计数法描述错误的是()A.计数血涂片体尾交界区域的白细胞数B.有核红细胞不计入白细胞中,要单独报告C.幼稚异常的WBC应计入白细胞计数中,并分类报告D.白细胞分类计数无需有序进行解析:D 在手工计数白细胞时,一般计数血涂片体尾交界区域的白细胞数;白细胞分类计数需有序进行;手工分类计数可根据白细胞的数量进行确定计数,如白细胞数<3×109/L,手工白细胞计数数一般是100个白细胞即可,如白细胞数3-15×109/L,手工白细胞计数数一般是200个白细胞即可,如白细胞数>15×109/L,手工白细胞计数数一般是50-100个白细胞即可;有核红细胞不计入白细胞中,要单独报告;幼稚异常的WBC应计入白细胞计数中,并分类报告;计数时需注意观察WBC、RBC、PLT形态有无异常,有无寄生虫。