实验五 白细胞分类计数

嗜酸性粒细胞 （血涂片）
3. 嗜碱性粒细胞（B） 胞体呈圆形，略小于中性粒细胞
胞浆：含粗大但大小不一、分布不均匀的 紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上， 致使核的轮廓与结构模糊不清
胞核：核分叶不明显，形态不规则。
嗜碱性粒细胞 （血涂片）
颗粒特点 大小不一 分布不均 嗜碱性强
4. 淋巴细胞（L）
3.计数的白细胞数：白细胞总数在（3.0~15.0） ×109/L之间者，分类计数100个白细胞；总数在 15.0×109/L以上时，计数200个；总数低于 3.0×109/L时，应选用两张血涂片计数50~100个白 细胞。
4.计数结果：用各类白细胞的百分率乘以白细胞总数， 即可求得每升血液中各类白细胞数量的绝对值。
胞浆：丰富，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃 样半透明。胞浆内含大量细小、弥散分布的 灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。
胞核：细胞核大，呈不规则圆形、肾形、马 蹄形或不规则分叶，有时折叠扭曲。染色质 细致、疏松如网状，染为淡紫红色。
五类白细胞
外周血正常白细胞形态特征
直径 细胞 （μm）
形态
核径最窄处小于最宽 处1/3为分叶核，细 胞分2~5叶，甚至5叶 以上。
中性粒细胞
杆状核
分叶核
2. 嗜酸性粒细胞（E）
形态：略大于中性粒细胞
胞浆：胞浆内充满粗大、整齐、均匀、 排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗 粒
胞核：长呈分叶状，二叶居多，呈眼镜 状，偶见3~4叶,染色质粗，染深紫红色。
2.核右移：主要见于营养性巨幼细胞 性贫血、恶性贫血等
3. 毒性变化
大小不均：病程长的化脓性炎症 中毒颗粒：化脓菌感染及大面积烧伤 空泡：败血症 Dohle小体 （蓝斑）：是核和胞质发育不平衡表现 退行性变：核固缩、核肿胀 、核溶解
中 性 粒 细 胞 大 小 不 均
大小不均
杜勒体
异 形 淋 巴 细 胞
Ⅰ型（空泡型）
Ⅱ型（单核细胞型）
Ⅲ型（幼稚细胞型）
实验五 白细胞分类计数
一、实验目的
掌握显微镜外周血白细胞分类计数（DLC）的 方法；
掌握外周血各类白细胞的正常形态。
二、实验原理
将血液制成细胞分布均匀的血涂片， 用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特 点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。 通常计数100个白细胞，计算得出各种白 细胞所占的百分率。
参与对寄生虫的免疫反应
三、白细胞正常形态
1.中性粒细胞(N) 直径10-15um 胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红
色中性颗粒。 胞核：染色不均
按胞核的形态分为：
N杆状核 （Nst）
核径最窄处大于最宽处1/3 为杆状核，核型多样，可 呈C形 、S形、V形或不规 则形。
N分叶核 （Nsg）
着色不清。颗粒紫黑色 、量少、大小不均、排 列杂乱、可盖于核上
透明、淡蓝色、多无颗 粒，大淋巴细胞可有少 量粗大、不均匀紫红色 颗粒
半透明、灰蓝色或灰红 色。颗粒细小、尘土样 紫红色
弯曲呈杆状、带状、蜡肠样 分2～5叶。杆状5～8%，2 叶30～35%，3叶40～ 50%，4叶15～20%，5叶 <0.5%，6叶0% 多分2叶，眼镜形
中性分Nsg 50~70
嗜酸性 E 0.5~5
嗜碱性B
0~1
淋巴 L
20~40
单核M
3~8
绝对值（ ×109/L ） 0.04~0.50 2.00~7.00 0.05~0.50 0~0.10 0.80~4.00 0.12~0.80
七、注意事项
1.计数区域：以体尾交界处最佳。
2.分类方法：遵循一定的方向，以“城垛式”连续 进行，避免主观选择视野；结果的记录可采用计数 器、手工画“正”字或“+++++”。
胞质
细胞核形
染色质
中性杆 10～15 状核 中性分 10～15 叶核
嗜酸性 13～15 粒细胞
嗜碱性 10～12 粒细胞
淋巴细 6～15 胞
单核细 12～20 胞
圆形 圆形
圆形
圆形
圆形或椭圆 形
圆形、椭圆 形或不规则 形
粉红色。颗粒量多、细 小、均匀、紫红色
粉红色。颗粒量多、细 小、均匀、紫红色
着色不清。颗粒橘黄、 粗大、整齐排列、均匀 充满胞质
中 性 粒 细 胞 中 毒 颗 粒
中毒颗粒：粗大、大小不等、分布不均匀
的紫黑色或深紫红色颗粒。
中 性 粒 细 胞 退 行 性 变
退行性变
中性粒细胞空泡性变：中性粒细胞胞质内出 现一个或数个空泡
空泡
杜勒小体：中性粒细胞胞质毒性变化保留 的局部嗜碱性区域，呈圆形、梨形、云雾 状，天蓝色或灰蓝色
核形因颗粒遮盖而不清晰
圆形、椭圆形、肾形
肾形、山字形、马蹄形、扭 曲折叠不规则形
粗糙，深紫红色 粗糙，深紫红色
粗糙，深紫红色
粗糙，深紫红色
深紫红色，粗糙成 块，核外缘光滑
疏松网状，淡紫红 色，有膨胀和立体 起伏感
四、一些异常结构及细胞的认识
1.核左移
外周血中杆状核粒细胞增多或出现晚幼粒、中幼粒、 早幼粒细胞
三、实验器材与试剂 器材： 显微镜，香柏油，擦镜纸，清洁液 试剂：Wright 染液。
四、实验标本：制备良好的血涂片
五、操作步骤
1.制备血涂片：按照正确的操作方法制备血涂片
2.染色：用Wright染液对血涂片染色，冲洗干净， 自然干燥后备用 。
3.低倍镜观察：低倍镜下观察全片，包括白细胞飞分 布和染色情况。
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4.油镜观察：选择血涂片体尾交界处细胞分布均 匀、着色良好的区域，滴加1滴香柏油，按一定 的方向顺序对所见到的每个白细胞进行分类，并 用白细胞分类计数器做好记录，共计数100个白 细胞。
5.计算：求出各类白细胞所占的百分率。 6.报告方式： 百分率（%）。
六、参考区间
WBC 百分率 （%）
中性杆Nst 1~5
单核细胞（Monocyte，M）
吞噬，杀灭病原体 清除损伤或已死亡的细胞 处理抗原
嗜碱性粒细胞（Basophil，B）
通过释放嗜碱性颗粒（组胺、肝素、慢反 应物质等）参与超敏反应
嗜酸性粒细胞（Eosinophil，E）
抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞合成和释 放活性物质，吞噬其释出颗粒，破坏组胺， 限制过敏反应
中性粒细胞
粒细胞
嗜酸性粒细胞
白细胞
淋巴细胞
嗜碱性粒细胞
单核细胞
——白细胞是机体抵抗病原微生物等异物
入侵的主要防线
全能干细胞
髓系干细胞
粒-单核系祖细胞
GM-CSF
原粒细胞
早幼粒细胞 原单核细胞
淋巴系干细胞
T淋巴系祖细胞 B淋巴系祖细胞
T原淋巴细胞
B原淋巴细胞
中幼粒细胞
幼单核细胞
晚幼粒细胞
杆状核粒细胞 分叶核粒细胞
5.血涂片中有有核红细胞时，应逐个计数，但不计入 100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到的有 核红细胞个数来报告，并注明其所属阶段。
6.分类中还应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、 染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及 其他异常所见。
外周血各类白细胞的正常形态
一、白细胞的组成
单核细胞
嗜酸性 粒细胞
嗜碱性 粒细胞
T幼淋巴细胞 T淋巴细胞
B幼淋巴细胞
B淋巴细胞 浆细胞
二、白细胞的功能
中性粒细胞（Neutrophil，N）
具有趋化、变形、黏附、吞噬、杀菌作用， 防御和抵抗病原菌侵袭
淋巴细胞（Lymphocyte，L）
B细胞 T细胞
浆细胞 生成Ab 免疫活性物质
体液免疫 细胞免疫
形态：直径6-15um，分为大L和小L。
胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒，常呈裸 核。大淋巴胞浆丰富 ，呈透明蓝色，常有 少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。
胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色 质粗糙，排列均匀，大淋巴细胞核常 偏于一侧。
淋巴细胞 （血涂片）
5.单核细胞（M）
形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um 胞体呈圆形或不规则形 。