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α地中海贫血分子诊断的基本方法α地中海贫血是一种与地中海地区有关系的血色素异常疾病，它是由一种遗传缺陷引起的，这种遗传缺陷会导致红细胞内的α珠蛋白链合成异常，从而引起贫血等症状。
对于怀疑患有α地中海贫血的患者，现代医学根据血样中血红蛋白的类型，使用多种方法对其进行诊断。
一、血片染色法血片染色法是一种诊断α地中海贫血的最简单的方法之一。
在此方法中，取一份受测血样，将其制成血片，然后进行染色，以观察红细胞内的颗粒。
如果血样中不含有α地中海贫血，则这些红细胞内的颗粒将像小颗粒一样紧密排列在一起，而如果血样中含有α地中海贫血，则这些颗粒会像较大的颗粒一样分散开来。
当医护人员观察到这种颗粒分散现象时，就可以初步推断该患者可能患有α地中海贫血。
二、血红蛋白电泳法血红蛋白电泳法是一种较为准确的诊断α地中海贫血的方法。
医护人员需要从血样中提取血红蛋白，并将其降解成单个珠蛋白链。
然后，将这些单个珠蛋白链进行电泳分离，将不同类型的珠蛋白链进行区分。
如果患者患有α地中海贫血，则电泳结果中可能会显示多种珠蛋白链类型，包括正常的α珠蛋白链和β珠蛋白链以及一些异常的珠蛋白链。
三、基因分析法基因分析法是一种最准确的诊断α地中海贫血的方法，可以准确地评估患者的DNA序列以及其中的基因突变。
医护人员只需从患者的血样中提取DNA，并进行PCR扩增，然后对扩增的产物进行测序。
通过分析DNA序列中存在的基因突变，医护人员可以准确地诊断患者患有α地中海贫血。
目前诊断α地中海贫血的基本方法包括血片染色法、血红蛋白电泳法和基因分析法。
在临床上，医护人员可以根据患者症状的严重程度以及患者的病史来选择适合的诊断方法。
对于患有α地中海贫血的患者，及时进行诊断和治疗将有助于避免因严重贫血引起的并发症。
除了α地中海贫血的基本诊断方法，还有一些其他的辅助诊断方法可以供医护人员参考。
这些方法可以帮助医护人员更准确地确定患者患有α地中海贫血，以及确定病情的严重程度。
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢如何检查诊断地中海贫血症
导语：说起贫血，相信很多朋友都知道这是怎么回事，也知道如何改善自己的贫血情况，不过您知道吗，贫血也是分类型的，比如说地中海贫血症就是其中
说起贫血，相信很多朋友都知道这是怎么回事，也知道如何改善自己的贫血情况，不过您知道吗，贫血也是分类型的，比如说地中海贫血症就是其中一种。
地中海贫血症虽然临床上并不常见的，但是危害却比较严重，所以当您出现贫血症状的时候，一定要诊断看是否是地中海贫血症。
具体如何检查诊断地中海贫血症您可以看下本文分析。
检查
1.β珠蛋白生成障碍性贫血（地中海贫血）
（1）重型外周血象呈小细胞低色素性贫血，红细胞大小不等，中央浅染区扩大，出现异形、靶形、碎片红细胞和有核红细胞、点彩红细胞、嗜多染性红细胞、豪-周氏小体等；网织红细胞正常或增高。
骨髓象呈红细胞系统增生明显活跃，以中、晚幼红细胞占多数，成熟红细胞改变与外周血相同。
红细胞渗透脆性明显减低。
HbF含量明显增高，大多>0.40，这是诊断重型β地贫的重要依据。
颅骨X线片可见颅骨内外板变薄，板障增宽，在骨皮质间出现垂直短发样骨刺。
（2）轻型成熟红细胞有轻度形态改变，红细胞渗透脆胜正常或减低，血红蛋白电泳显示HbA2含量增高（0.035～0.060），这是本型的特点。
HbF含量正常。
（3）中间型外周血象和骨髓象的改变如重型，红细胞渗透脆性减低，HbF含量为0.40～0.80，HbA2含量正常或增高。
2.α珠蛋白生成障碍性贫血（地中海贫血）
（1）静止型红细胞形态正常，出生时脐带血中Hb Bart's含量为预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏。
地中海贫血检查方法'针对于困扰的检查，我们建议您要首先结合自家的阳性病史，来作出诊断。
地中海不是一般的贫血症状，作为直接通过基因来遗传的地中海贫血，准妈妈们需要与一些常见贫血症状相区分开，通过化的医学手段来及时断定，对于地中海贫血的检查，我们列出以下几点：1、对于轻型地中海贫血，可以进行实验室检查，成熟红细胞有轻度形态改变，红细胞渗透脆胜正常或减低，血红蛋白电泳显示HbA2含量增高(0.035～0.060)，这是本型的特点。
HbF含量正常。
2、如果您的地中海贫血属于中间型，实验室检查结果为外周血象和骨髓象的改变如重型，红细胞渗透脆性减低，HbF含量约为0.40～0.80,HbA2含量正常或增高。
3、重型的地中海贫血，外周血象呈小细胞低色素性贫血，红细胞大小不等，中央浅染区扩大，出现异形、靶形、碎片红细胞和有核红细胞、点彩红细胞、嗜多染性红细胞、豪-周氏小体等;网织红细胞正常或增高。
骨髓象呈红细胞系统增生明显活跃，以中、晚幼红细胞占多数，成熟红细胞改变与外周血相同。
红细胞渗透脆性明显减低。
HbF含量明显增高，大多>0.40，这是诊断重型β地贫的重要依据。
颅骨X线片可见颅骨内外板变薄，板障增宽，在骨皮质间出现垂直短发样骨刺。
4、除了以上明显的地中海贫血症状，一些常见的疾病很容易误导您的判断。
常发生在身上的缺铁性贫血就很容易与轻型地中海贫血相互混淆，其临床表现和红细胞的形态改变与缺铁性贫血有相似之处，故易被误诊。
但缺铁性贫血常有缺铁诱因，血清铁蛋白含量减低，骨髓外铁粒幼红细胞减少，红细胞游离原叶琳升高，铁剂治疗有效等可资鉴别。
5、还有一种传染性肝炎或肝硬化与地中海贫血的症状也很相似，因HbH病贫血较轻，还伴有肝脾肿大、黄疽，少数病例还可有肝功能损害，故易被误诊为黄疽型肝炎或肝硬化。
但通过病史询问、家族调查以及红细胞形态观察、血红蛋白电泳检查即可鉴别。
我们建议您，地中海贫血的检查一定要及时，轻型的地中海贫血症状容易与很多常见病混淆，我们希望您要通过定时的体检来鉴别出您的疾病，针对轻型，中间型，重型地中海贫血来对症治疗。
地中海贫血基因的诊断标准
1、β地中海贫血。
重型：红细胞的大小不等，出现异形、碎片红细胞和有核红细胞等，网织红细胞含量出现增高的现象。
中期、晚期和幼期的红细胞占大多数。
红细胞的渗透性明显减弱，HbF的含量明显增高。
通过颅骨X光线照片可以看见颅骨内外板变薄，在骨皮质间出现骨刺的状况。
轻型：成熟红细胞有轻度的变形状态，红细胞渗透脆胜减低，血红蛋白含量增高。
中间型：外周血象和骨髓象的改变和重型的状况相同，红细胞渗透脆性降低减弱，HbA2含量正常或呈逐渐增高的状态。
2、HbH地中海贫血。
轻型：红细胞的形态有轻度改变，红纽胞渗透脆性减弱，蛋白小体呈阳性，HbA2和HbF含量正常或稍低。
中间型：外周血象和骨髓象与重型相似，红细胞渗透脆性减低，HbA2及HbF含量正常。
重型：成熟红细胞形态的改变和重型β地中海贫血相同，红细胞计数明显增高，血红蛋白中几乎全都是Hb Bart's。
血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别【摘要】血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血的诊断与鉴别中起着重要作用。
通过测定红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞平均体积等指标，可以帮助医生鉴别两种贫血类型。
地中海贫血常表现为红细胞计数减少、血红蛋白浓度下降及红细胞平均体积正常或增大，而缺铁性贫血则通常伴有小细胞低色素性贫血的特点。
综合多种指标进行准确诊断是关键，血常规检验仅仅是其中之一，其他辅助检查也具有重要性。
对于地中海贫血和缺铁性贫血的鉴别诊断来说，应该综合多种检查结果，以确保患者能够得到正确的诊断和治疗方案。
【关键词】地中海贫血、缺铁性贫血、血常规检验、诊断、鉴别、辅助检查、重要性、准确性1. 引言1.1 地中海贫血和缺铁性贫血简介地中海贫血是一种遗传性疾病，主要发生在地中海周边地区，因此得名。
这种疾病主要是由于β地中海贫血红细胞性贫血的突变引起，导致人体无法正常合成血红蛋白。
而缺铁性贫血则是由于机体缺乏足够的铁元素，无法合成足够的血红蛋白，从而导致贫血发生。
两种贫血在临床上有许多相似的表现，诊断和鉴别诊断需要依靠实验室检查。
地中海贫血通常在儿童时期就会发生症状，包括贫血、黄疸、生长迟缓等。
而缺铁性贫血则多见于女性、孩童和孕妇，主要表现为疲乏、头晕、心悸等症状。
血常规检验是诊断和鉴别地中海贫血和缺铁性贫血的重要工具，通过检测血红蛋白水平、红细胞数量、红细胞平均体积等指标来进行鉴别诊断。
及时进行血常规检验可以帮助医生准确诊断患者并制定治疗方案，避免延误病情。
地中海贫血和缺铁性贫血是两种常见的贫血疾病，血常规检验在诊断和鉴别诊断中具有不可替代的作用。
了解两种贫血的特点和血常规检验的意义可以帮助医生更好地进行诊断和治疗，提高患者的生存率和生活质量。
1.2 血常规检验在贫血诊断中的重要性血常规检验在贫血诊断中具有重要性是因为血常规检验是一项简单、快速、经济且广泛应用的检查方法，能够提供关于患者贫血类型、程度和可能病因的重要信息。
血常规检验在地中海贫血和缺铁性贫血诊断与鉴别地中海贫血和缺铁性贫血是两种常见的贫血疾病，它们在临床上常常需要进行鉴别诊断。
血常规检验是一种简单且常用的检查方法，对于地中海贫血和缺铁性贫血的诊断与鉴别起着非常重要的作用。
本文将从血常规检验的角度，探讨地中海贫血和缺铁性贫血的诊断与鉴别。
地中海贫血是一种常见的遗传性贫血病，主要发生在地中海沿岸的一些国家，如地中海沿岸的意大利、希腊、土耳其等地区，故得名“地中海贫血”。
它是由遗传缺陷导致的血红蛋白的合成障碍性疾病，主要包括地中海贫血症（α-地中海贫血）和地中海贫血（β-地中海贫血）两种类型。
地中海贫血的临床表现主要是患者出现憔悴、乏力、贫血等症状，严重者还可能导致骨髓增生不良，甚至死亡。
与地中海贫血相比，缺铁性贫血则是由于机体内铁摄入不足或者铁丢失过多，导致机体内铁储备不足而引起的贫血。
患者常表现为皮肤苍白、疲乏无力、头晕乏力等症状，严重者还可能出现心悸、呼吸困难等症状，严重影响患者的生活质量。
在进行地中海贫血和缺铁性贫血的诊断与鉴别时，血常规检验是一项不可或缺的检查方法。
它包括红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞压积、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量、红细胞体积分布宽度等指标，以下将详细介绍这些指标在地中海贫血和缺铁性贫血的诊断与鉴别中的作用。
1. 红细胞计数（RBC）红细胞计数是指单位体积血液中红细胞的数量，它是评价患者贫血程度的一个重要指标。
在地中海贫血患者中，红细胞计数常常正常或轻度减少，而在缺铁性贫血患者中，由于机体内铁储备不足，红细胞合成受到抑制，因此红细胞计数通常较少。
通过红细胞计数可以初步判断患者贫血的类型。
2. 血红蛋白浓度（Hb）3. 红细胞压积（Hct）4. 平均红细胞体积（MCV）6. 红细胞体积分布宽度（RDW）在实际临床工作中，医生还需要全面了解患者的临床表现、病史和家族史等情况，综合分析，并结合其他必要的检查手段，如遗传学检测、红细胞电泳等，才能最终做出地中海贫血和缺铁性贫血的确诊和鉴别诊断。
地中海贫血的诊断方法 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
地中海贫血的诊断方法
B-地中海贫血的筛查和诊断主要依赖实验室检查，方法主要有：
1 血常规检测
地中海贫血的重要特征之一是小细胞低色素性贫血，如MCV≤80 fl，MCH≤25．0 Pg，则可疑为地中海贫血患者或基因携带者，可同时测定血清铁和铁蛋白，以排除缺铁性贫血。
2 红细胞渗透脆性试验(一管法)
其原理是地中海贫血红细胞膜表面粗糙、凹陷、折叠和浆膜扩展，膜与内容物之比增大，对渗透溶解的抗性增加，在0．32％(或0．36％)NaC1中溶解度降低(脆性降低)。
一管法可用于地中海贫血群体筛查。
3 血红蛋白(Hb)电泳Hb电泳
是检测地中海贫血、异常血红蛋白最常用的方法，可观察到HbE、HbH等异常血红蛋白区带，同时可定量检测HbF、HbA2的含量并区分常见类型的地中海贫血。
有研究显示MCV、Hb电泳和红细胞脆性实验三者联合检测的灵敏度可达100％，阴性预告值达100％，联合特异度可达100％，阳性预告值达100％DS。
4 高效液相色谱技术(HPLC)
原理：采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术，全自动分析仪可分离血红蛋白的变异体与亚型，容易发现重型和轻型B地中海贫血。
在操作上，HPLC采用的是全血标本，不需要制备Hb液，只要
将全血标本直接放在仪器上，通过电脑操作便能实现HbA、HbA2、HbF等定量检测。
优点：所需样本量少，自动化程度高，操作简单，快速，能消除人为误差，结果准确。
HPLC也可用于胎儿脐带血的产前诊断，可诊断出重型B地中海贫血，但不能区分正常胎儿和杂合子胎儿。
近年来，地中海贫血高发地区也采用此法进行携带者检测。
5 基因诊断
近年来，随着分子生物学研究领域的不断发展，从最初的B珠蛋白基因簇限制性酶切多态性检测至目前的聚合酶链反应(PCR)技术结合其他分子生物学方法，B地中海贫血的诊断已逐步改进和完善。
基因诊断方法有下列几种：
5．1 限制性片段长度多态性连锁分析(RFLP连锁分析)
原理：DNA限制性内切酶可识别并切割DNA上特定的核苷酸序列，得到一定长度的DNA片段，而碱基的突变可导致酶切位点的丢失或形成，从而改变酶切片段的大小。
突变基因在经过相应的限制性内切酶水解后，其电泳条带的数量和大小就会发生改变，根据这些改变可判断出突变是否存在。
缺点：由于单独使用该方法，不能直接测出受试者突变基因的类型，必须结合寡核苷酸探针等技术，故其应用范围有一定限制，且操作繁琐。
如果母亲或父亲在所有的多态性位点上都为纯合子，无法用此方法进行产前诊断，或者患儿和父母所有位点上都是杂合状态，只能进行50％的排除性诊断。
5．2 探针斑点杂交技术(allele—specific oligonucleotide ASO)应用引物扩增珠蛋白基因，同时合成与正常序列和突变
序列完全互补的寡核苷酸探针。
将PCR扩增产物点在尼龙膜上，分别
与标记的正常和突变的ASO探针杂交，不完全互补的探针，在一定条
件下可以完全洗脱，再从放射自显影观察杂交结果。
如果两个等位B
珠蛋白基因正常，仅与正常探针杂交，反之，均带有突变时，则仅
与突变探针杂交。
这种检测方法快速、灵敏。
缺点：对DNA的纯度和
数量要求较高，一次杂交能检测一种突变，对于具有高度异质性的B
地中海贫血往往需要多次更换探针杂交，才能确定诊断，如使用同
位素标记探针，还存在放射性污染等问题。
5．3 反向点杂交方法(Reverse dot blot hybridization，RDB) 与传统等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交的基本原理相同，所不
同的是：将膜上固定探针取代固定靶DNA，经一次杂交就可对未知样
品中多个突变进行检测，改变了传统杂交法一次只能检测一种突变
的方式。
优点：较快速、敏感，操作简单。
缺点：只能检测已知位
点突变的B地中海贫血，不能检出未知突变。
5．4 缺口PCR(gap PCR) 原理：设计三个或两对引物，即在
缺失区域外侧，靠近缺失位点的位置设计一对引物，另外一个或一
对引物在缺失区域内。
在缺失区域内的引物能够在杂合子和正常人
中扩增出片段，在缺失纯合子中不能扩增。
在缺失区域外侧的一对
引物，因为缺失使相距甚远的两端DNA拉进，从而可扩增出特定的
DNA片断。
从而检测出纯合子患者，杂合子携带者。
Wang等报道用此方法对89个B珠蛋白基因突变的检测。
5．5 扩增不应突变系统(amplification refractorymutation sys—tems，ARMS)或称等位基因特异性PCR 原理：在PCR中，针对某个点突变设计出3端碱基与目的基因的突变碱基互补的引物，PCR反应中，只有突变的基因才有相应的扩增产物，而正常的基因则不能扩增。
从而将正常与突变的DNA区别开来。
优点：仅需微量的DNA样品(100～400 ng)，通过简单的设计，仅需同一种PCR循环体系便可同时探测常见B珠蛋白基因突变，无需PCR之后的分子杂交等过程，不需限制性内切酶及放射性核素。
缺点：特异性较低，易出现假阳性或假阴性。
有报道应用该方法进行B地中海贫血的检测。
5．6 实时荧光定量PCR(real—time PCR) 在实验过程的PCR 体系中加入荧光集团，由于被测产物的数量与起始模板拷贝数直接相关，具体可以通过特定的定量PCR仪监测每次循环产生的荧光信号强度，并参照对照基因的标准曲线来定量，荧光染料能与所有的DNA 相结合，不必因为模板不同而特别定制。
缺点：由于选取的相对定量和标准曲线本身存在局限性，所得结果存在误差。
国内外有报道采用该方法进行B地中海贫血的检测?。
5．7 单链构向多态性PCR(PCR—SSCP) 与PCR联合应用，即PCR．SSCP是一种基于单链DNA构象差别来检测未知点突变的常用方法。
原理：PCR产物在加热或变性剂下生成单链，单个核苷酸的改变即可造成DNA片断单链的改变。
根据构象不同的单链DNA在非变性
聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)条件下电泳表现不同的迁移率，电泳带用银染法显示，无放射性核素污染。
可用于检测B地中海贫血基因缺失的病人及携带者，是一种筛查未知点突变的有效方法。
缺点：当PCR 产物小于200 bp．可检出70％～90％的突变率，敏感度随PCR的长度
5．8 等位基因特异性扩增技术(Allele Specific PCR，AS—PCR) 原理：针对B地中海贫血的突变类型设计特异碱基引物，根据扩增得到的电泳带判断是否存在对应的点突变，结果清晰、准确可靠，尤适用于小片段DNA分析，可作为快速检测携带者的筛查手段。
5．9 DNA芯片技术(DNA chip) 以反向斑点杂交为基本原理。
将预先设计好的大量核酸探针有序、高密度地显微打印在玻璃片、硅片等固体支持物上，制成DNA微阵列。
用荧光标记的待测样品DNA、eDNA或RNA与位于芯片上的核酸探针杂交后，通过激光共聚焦荧光扫描系统检测杂交信号强度，用特制的软件对荧光信号进行分析处理，便可得到待测样品的遗传信息或表达信息。
优点：高通量，基因诊断可在一张芯片上完成，适用于大面积的筛查。
缺点：设备要求及费用较高，目前难以推广。
5．10 DNA序列测定法(DNA sequencing) 常用于分析基因的未知或已知突变。
应用PCR扩增产物在DNA自动测序仪上进行序列分析。
该法快速、简便、灵敏，重复性好，是基因突变检测的最直接、最准确的方法。
5．11 荧光聚合酶链反应(Fluorescent PCR) 荧光PCR是近年发展起来的新兴技术，它比普通的PCR敏感性高出一千倍以上。
用不同颜色的荧光素对PCR扩增产物进行标记，在DNA测序仪上同时检测出不同颜色、不同片段的PCR扩增产物，从而分辨正常人，杂合子和纯合子。
国外已有报道利用荧光PCR检测B珠蛋白基因簇大片段缺失。
而国内应用荧光PCR进行地中海贫血植入前遗传学诊断，胎儿羊水和脐带血地中海产前基因诊断，及检测单单细胞B地中海贫血基因。
