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微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
微生物菌种的保藏方法1微生物菌种的保藏微生物菌种的保藏是生物学研究的重要环节，它也是生物资源的基础。
微生物的保藏需要充分的考虑长期保藏的要求，能有效防止细菌的腐败，缩短菌株检疫和检测所需的时间，还可以提高细菌新特征的研究成果。
但是，由于不同物种之间的差异性，微生物菌种的保藏可能涉及各种复杂的方法，需要更加正确和有效的保藏来保护和维护菌株。
1.1定期替换培养基微生物菌种的保藏通常使用加入防腐剂的培养基进行贮藏，但是由于长时间的贮藏，培养基的成分会逐渐减少，菌株也会逐渐衰老，这可能会影响到菌株的存活率和活跃度。
所以，贮藏前应加入新鲜的培养基和抗生素，定期替换新鲜培养基，以保证菌株的流动性。
1.2贮存条件的控制正确控制贮存条件，如温度、湿度、控制空气的酸碱度等，可以使菌株的活跃性或存活率保持最佳状态。
一般来说，细菌能够在室温（25度）下长期贮存，但是会减慢其增殖和繁殖的速度，同时还要注意湿度，太过潮湿会使细菌存活率降低，尤其是嗜水性细菌；而太过干燥则会造成菌株衰老，影响菌株的存活率并降低其活力。
1.3贮藏容器的选择贮藏容器也是微生物菌种保藏的重要组成部分，不同种类的细菌需要不同种类的容器来保存。
一般来说，普通细菌能够在塑料袋或瓶中长期贮存，只需每隔一段时间就更换新的瓶或袋，但对于致病细菌则必须使用带有封闭口的易破袋。
1.4贮藏环境的更新贮藏环境的更新也是保藏细菌的重要环节。
定期更换菌种本身的培养环境，例如移动菌瓶到新的室温，或将菌瓶置于新的室温环境中，可以有效提高菌种的活跃性，同时也可以更换新的培养基和抗生素，定期更新贮藏环境，有效规避细菌衰老的问题，确保细菌的存活率和增殖率。
以上就是微生物菌种的保藏方法，主要涉及到定期替换培养基、贮存条件的控制、贮藏容器的选择以及环境的更新等，只有正确地运用它们，才能确保菌株的存活率和活动性。
微生物资源的收集和保藏张道锋上海交通大学农业与生物学院食品安全与微生物实验室2015.1内容提要1.微生物资源分布2.样品收集和处理3.预处理和选择性培养基4.获得纯培养和初步鉴定5.新物种的识别和鉴定6.菌种保藏和编号7.相关机构和网站8.系统分类学简介微生物资源分布普通环境, 33, 21%植物, 5,3%临床样本,85, 55%动物, 27, 18%不详, 5, 3%矿地水池, 1, 1%有机污染土壤, 5, 3%河流, 5, 3%土壤, 20, 13%尘埃, 2, 1%牛, 5, 3%鱼, 8, 5%猴, 2, 1%其他, 12, 8%水苔,5, 3%痰, 28, 19%组织洗液, 9, 6%组织, 31, 21%伤口感染,6, 4%排泄物, 4, 3%其他, 7, 5%分枝杆菌160多个物种的来源分布样品收集和运输原则：避免外源污染；避免长途运输造成目标群体的消亡样品收集样品运输预处理和选择性培养基•分离目的：定向分离，分离未知菌，分离“混合菌”•基本原则：获得目的菌，排除非目的菌•预处理：富集，减少非目的菌，促进萌发，促进释放；干热，湿热，增菌，噬菌体，表面活性剂，机械破碎，震荡均质……•选择性培养基：针对分离目的选择，pH，盐浓度，特殊营养物质，抑制剂•其他因素：氧气、温度、培养时间获得纯培养和初步鉴定•纯培养：只有一种微生物的培养物，都由一个细胞产生（狭义）；广义？•初步鉴定：生理生化反应，分子标记（16S rRNA，特异靶点）新物种的识别和鉴定•可能的新物种：独特的属性（生理生化，分子）•证据：16S rRNA similarity≤97%；DDH ≤ 70%；ANI ≤ 95%•鉴定：生理生化，细胞化学，分子特征：多相分类EZbioCloud菌种保藏和编号•菌株定义：待选，初入选，入选，模式菌株，专利或生产菌株•编号：自己可读：123，a12，a1-2-b ，M2-4-5实验室可读：ABC001-ABC999国际可读：DSM 45643T ，ATCC 25923T ，CCTCC AA 209045，SJTUF10781菌种保藏•悬液保存（常温）•液体石腊保存（常温）•沙土管保存（有孢子或芽胞）•甘油保存（-70℃、-20℃）•冻干保存（5℃）•液氮保存（甘油管）普通冰箱，超低温冰箱，冷库，组合式冷柜，液氮柜相关机构和网站菌种保藏中心---《布达佩斯条约》•中国典型培养物保藏中心（CCTCC ）•中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)•美国典型微生物菌种保藏中心（ATCC)•德国微生物菌种保藏中心（DSMZ ）•台湾生物资源保存及研究中心（BCRC ）•韩国典型菌种保藏中心(KCTC)•法国巴斯德菌种保藏中心(CIP)•日本微生物菌种保藏中心(JCM)国内其它保藏中心•中国医学细菌保藏管理中心：CMCC•中国工业微生物菌种保藏管理中心：CICC •中国农业微生物菌种保藏管理中心：ACCC •中国海洋微生物菌种保藏管理中心：MCCC •YIM，SCSIO，及其它地方单位保藏中心DSMZStraininfoBiosafety Level•一级低个体危害，低群体危害对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（农业部令第16号）动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法(农业部令第16号)2008年11月4日农业部令第16号公布，农业部令2016年第3号修订。
第一章总则第一条为了加强动物病原微生物菌（毒）种和样本保藏管理，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规，制定本办法。
第二条本办法适用于中华人民共和国境内菌（毒）种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条本办法所称菌（毒）种，是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本，是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构，是指承担菌（毒）种和样本保藏任务，并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌（毒）种或者样本的单位。
菌（毒）种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条农业部主管全国菌（毒）种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府兽医主管部门负责本行政区域内的菌（毒）种和样本保藏监督管理工作。
第五条国家对实验活动用菌（毒）种和样本实行集中保藏，保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌（毒）种或者样本。
第二章保藏机构第六条保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业部指定。
保藏机构保藏的菌（毒）种和样本的种类由农业部核定。
第七条保藏机构应当具备以下条件：（一）符合国家关于保藏机构设立的整体布局和实际需要；（二）有满足菌（毒）种和样本保藏需要的设施设备；保藏高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本的，应当具有相应级别的高等级生物安全实验室，并依法取得《高致病性动物病原微生物实验室资格证书》；（三）有满足保藏工作要求的工作人员；（四）有完善的菌（毒）种和样本保管制度、安全保卫制度；（五）有满足保藏活动需要的经费。
动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法中华人民共和国农业部令第16号《动物病原微生物菌(毒)种保藏管理办法》已经2008年11月4日农业部第8次常务会议审议通过,现予发布,自2009年1月1日起施行。
部长 孙政才二★★八年十一月二十六日第一章 总 则第一条 为了加强动物病原微生物菌(毒)种和样本保藏管理,依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规,制定本办法。
第二条 本办法适用于中华人民共和国境内菌(毒)种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条 本办法所称菌(毒)种,是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本,是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构,是指承担菌(毒)种和样本保藏任务,并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌(毒)种或者样本的单位。
菌(毒)种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条 农业部主管全国菌(毒)种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府兽医主管部门负责本行政区域内的菌(毒)种和样本保藏监督管理工作。
第五条 国家对实验活动用菌(毒)种和样本实行集中保藏,保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌(毒)种或者样本。
第二章 保藏机构第六条 保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业部指定。
保藏机构保藏的菌(毒)种和样本的种类由农业部核定。
第七条 保藏机构应当具备以下条件:(一)符合国家关于保藏机构设立的整体布局和实际需要;(二)有满足菌(毒)种和样本保藏需要的设施设备;保藏高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本的,应当具有相应级别的高等级生物安全实验室,并依法取得《高致病性动物病原微生物实验室资格证书》;(三)有满足保藏工作要求的工作人员;(四)有完善的菌(毒)种和样本保管制度、安全保卫制度;(五)有满足保藏活动需要的经费。
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2022年修订）正文：----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2008年11月26日农业部令第16号公布，2016年5月30日农业部令2016年第3号、2022年1月7日农业农村部令2022年第1号修订。
）第一章总则第一条为了加强动物病原微生物菌（毒）种和样本保藏管理，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规，制定本办法。
第二条本办法适用于中华人民共和国境内菌（毒）种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条本办法所称菌（毒）种，是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本，是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构，是指承担菌（毒）种和样本保藏任务，并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌（毒）种或者样本的单位。
菌（毒）种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条农业农村部主管全国菌（毒）种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府畜牧兽医主管部门负责本行政区域内的菌（毒）种和样本保藏监督管理工作。
第五条国家对实验活动用菌（毒）种和样本实行集中保藏，保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌（毒）种或者样本。
第二章保藏机构第六条保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业农村部指定。
保藏机构保藏的菌（毒）种和样本的种类由农业农村部核定。
