用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法

一、实验目的1. 掌握血球样板计数法的基本原理和操作步骤。

2. 学习利用血球样板计数法对微生物进行计数。

3. 提高对微生物计数结果的分析能力。

二、实验原理血球样板计数法是一种利用显微镜直接计数微生物数量的方法。

该方法适用于各种微生物的计数，如细菌、酵母、真菌等。

计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴加到血球样板计数室中，在显微镜下直接观察并计数。

血球样板计数室由一块特殊的载玻片构成，其上有四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。

每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格。

每个大方格分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。

每个大方格中的小方格总数为400个，每个大方格的边长为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。

计数时，通常只计数四个四周大方格内的细胞数。

然后求出每个大方格的平均值，即可得出一个大方格中的平均细胞数。

再根据菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。

三、实验材料1. 血球样板计数室2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液7. 稀释液8. 滤纸四、实验步骤1. 准备工作：将血球样板计数室及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸取少许，注入试管中，加入适量的稀释液，搅拌均匀。

3. 稀释：根据细胞悬液的浓度，将细胞悬液进行适当的稀释，以便在计数时细胞数适中。

4. 计数：将稀释后的细胞悬液吸取少许，滴加到血球样板计数室的盖片边缘，使培养液自然渗透填满计数室。

等待一段时间，让细胞全部沉降到计数室底部。

5. 观察：将计数板放在显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在的位置，然后转换到高倍镜观察。

计数四个四周大方格内的细胞数，记录下来。

6. 计算结果：根据计数结果和菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过血球样板计数法，得到酵母菌的计数结果为N个细胞/ml。

解惑血球计数板“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。

但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。

但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。

笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。

1 规格之惑关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm×2mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm方格。

后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。

以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。

由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(4×10-4mL)、0.1mm3(1×10-4mL)。

当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。

2 公式之惑(以1mm×1mm规格计数板为例)每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是25×16型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，因此每个大方格(计数室)中含有25×16个小方格；另一种为16×25型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为16×25。

显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(25×16或16×25)。

关于酵母菌的计数若干问题解析关于酵母菌的计数若干问题解析酵母菌的计数是近几次高频考点，血细胞计数板的规格和计数方式始终是个难点，需要进行总结。

有的学生担心教材中提到的计数计算，其实，需要搞清楚血细胞计数板的原理。

利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法，计得的是活菌体和死菌体的总和。

计数的操作步骤关于计数室每个计数室分为九个大方格，每个大方格有2mm×2mm×0.1mm 或1mm×1mm×0.1mm，浙科版默认第一种，共有400小格。

中央的大方格用于酵母菌的计数。

两种规格的血细胞计数板大方格、中方格和小方格典例解析试题1：将获得的肿瘤细胞培养液稀释100倍后，用血细胞计数板（规格为2mm×2mm×0.1mm）计数，观察到的计数室中细胞分布如图。

问题：培养液中肿瘤细胞的密度是个/mL。

答案：3.6×107解析：通过统计四个角上的总肿瘤细胞数为9+9+10+8＝36个（统计按照教材上的要求），计算出大方格的总数为36×4＝144个，144/0.4mm3×103mL×100倍＝3.6×107个。

（个人认为，此题的肿瘤细胞数目偏少，值得商榷）例题2：酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3，由400个小方格组成。

现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。

若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有个。

答案：稀释 2×108（5×400/0.1mm3×103×10mL）计数的操作1．稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓，可不必稀释。

2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物，则需清洗后才能进行计数。

3．加样品：在清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。

一、实验目的1. 掌握酵母菌计数的基本方法。

2. 了解血球计数板的使用原理和操作步骤。

3. 通过实验，观察酵母菌在不同条件下的生长情况，分析酵母菌的种群数量变化。

二、实验原理酵母菌是单细胞真核微生物，其生长繁殖过程中会形成菌落。

通过计数一定体积培养液中的酵母菌数量，可以了解酵母菌的种群密度。

血球计数板是一种常用的微生物计数工具，其原理是将计数区域划分为多个小方格，通过显微镜观察，计数每个小方格内的酵母菌数量，从而推算出整个计数区域的酵母菌数量。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母菌菌种、琼脂培养基、无菌水、血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等。

2. 实验试剂：无菌生理盐水、染色液（如龙胆紫）等。

四、实验步骤1. 菌种活化：将酵母菌菌种接种于琼脂培养基上，在适宜温度下培养24小时，得到活化菌种。

2. 制备酵母菌悬液：将活化菌种接种于无菌水中，振荡均匀，制成酵母菌悬液。

3. 酵母菌计数：将酵母菌悬液稀释至适当浓度，用血球计数板进行计数。

操作步骤如下：a. 将盖玻片放置于计数室上，用无菌滴管将酵母菌悬液滴于盖玻片边缘，让悬液自行渗入计数室。

b. 待悬液渗入计数室后，将盖玻片轻轻放置，避免产生气泡。

c. 将计数板置于显微镜载物台上，调整显微镜至适当倍数，观察计数室。

d. 计数每个小方格内的酵母菌数量，重复计数3次，求平均值。

4. 数据分析：根据计数结果，计算酵母菌的种群密度。

五、实验结果与分析1. 实验结果：在实验过程中，观察到酵母菌在适宜条件下生长良好，菌落呈白色，数量逐渐增多。

2. 数据分析：根据计数结果，计算出酵母菌的种群密度，并绘制酵母菌生长曲线。

六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了酵母菌计数的基本方法，了解了血球计数板的使用原理和操作步骤。

2. 实验结果表明，酵母菌在适宜条件下能够迅速繁殖，其种群数量随时间推移呈现增长趋势。

3. 本实验为后续研究酵母菌生长特性、发酵工艺等提供了基础数据。

七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

实验：利用血细胞计数板（细菌计数板）对酵母菌进行计数
1.取5克（活性干酵母）溶于95mL无菌水中，相当于稀释_______倍
2.显微镜下，低倍镜观察血球计数板，找到计数室，共_________大格
3.盖上盖玻片
4.取稀释到一定程度（5~10个酵母/小格）酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。

先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。

计数前观察酵母菌的形态
每1mL菌液所含酵母菌____________个
5克干酵母含酵母菌____________个
6.每次计数完毕，将血球计数板和盖玻片用清水冲洗干净，切勿用硬物刷洗，洗净后自然晾干（用纱布擦试）。

7.观察菌落中的酵母菌。

高中生物实验:观察培养液中酵母菌种群数量的变化_1、通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，来研究一个种群的数量变化情况，尝试构建种群增长的数学模型。

2、通过使用血球计数板掌握单细胞生物的计数方法。

二、实验原理：1、酵母菌可以用液体培养基来培养，培养液中的酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、PH、温度等因素有关，我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。

2、利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目，所以一般用于单细胞微生物数量的测定，由于血球计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的，所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。

三、实验材料：酵母菌菌种，无菌马铃薯培养液或肉汤培养液。

四、实验用具：无菌水，试管，棉塞，恒温培养箱，显微镜，无菌滴管，无菌移液管，小烧杯或小试管，血球计数板(2mm 2mm)、纱布、滤纸、镊子、盖玻片。

五、方法步骤：1、取相同试管若干支，分别加入5ml肉汤培养液，塞上棉塞。

2、用高压锅进行高压蒸汽灭菌后冷却至室温，标记甲、乙、丙等。

3、将酵母菌母液分别加入试管各5ml，摇匀后用血球计数板计数起始酵母液个数，做好记录。

4、将各试管送进恒温箱，25℃下培养7天。

5、每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。

六、实验结论：培养液酵母菌种群数量随时间呈S型增长变化。

七、考点提示：1、以防培养液带上杂菌与酵母菌形成竞争关系，抑制酵母菌培养。

从试管中吸出培养液进行计数时，应将试管振荡几次，以便使酵母菌均匀分布，提高计数的代表性和准确性。

2、对于压在小方格界线上的酵母菌应计数同侧相邻两边上的菌体数，另两边不计数。

3、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？答：摇匀试管取1ml酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以 n 2.5 104 ，即为1ml 酵母菌原液中酵母菌个数。

用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法血球计数板是一种用于计数细胞的装置，通常用于测定血液中各类细胞的数量。

然而，血球计数板也可以应用于计数其他类型的微生物，如酵母菌。

下面将详细介绍使用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法。

1.准备工作-准备血球计数板：将血球计数板放在平整、干净的工作台上。

-准备显微镜：确保显微镜的放大倍数适合酵母菌的观察。

2.制备样品-培养酵母菌：选择适用于酵母菌的培养基，并在温度适宜的条件下培养酵母菌至合适的生长阶段。

-稀释样品：取适量酵母菌培养物，并使用物理或化学方法将其稀释至适宜的浓度。

常规稀释范围为10^-1至10^-73.接种样品-将适量的稀释后的酵母菌样品吸入移液管中。

-用移液管加样品到血球计数板的一个大格中。

重复这个过程，直到填充至少3个大格。

-轻轻拍打血球计数板，以使酵母菌分布均匀。

4.观察和计数-将装有血球计数板的试管放置在显微镜下，以便于观察。

-调节显微镜的焦距，以清晰地观察酵母菌。

-随机选择一个大格开始计数。

对于每个大格，观察所有四个角以及中央的九个小格。

计数以一个有效酵母菌可见于格子线与其相交的点为依据。

-对于每个大格中酵母菌的计数结果，将计数值乘以10（表示小格数），然后累加得到总数。

例如，如果一个大格中计数到45个酵母菌，总数应为45x10=450。

-重复以上步骤，直到至少3个大格被计数。

如果计数结果在这些大格之间差异较大，则需要继续计数至一个统一的结果。

5.计算酵母菌的浓度-计算平均数：将各个大格的计数结果相加，并除以计数的大格数，得到平均数。

-计算总体浓度：将平均数乘以初始的稀释倍数。

例如，如果初始稀释倍数为10^-4且平均数为80，总体浓度应为80x10^4=800,000CFU/mL （菌落形成单位/毫升）。

-根据需要，可以根据大格的面积进行进一步的修正。

需要注意的是，血球计数板通常用于测量血液细胞的数量，而不是酵母菌等微生物。

因此，使用血球计数板计数酵母菌需要一些修正和适应。

一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。

血球计数板是常用的计菌器之一。

血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。

在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。

计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。

但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。

1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。

将每一中格放大，可见25个小格。

计数重复3次，取其平均值。

计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。

实验六酵母菌细胞总数的测定实验六酵母菌细胞总数的测定一、实验目的通过实验掌握酵母菌细胞总数的测定方法，了解酵母菌在发酵过程中的生长繁殖情况。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，在适宜的条件下可以迅速生长繁殖。

通过测定酵母菌细胞的总数，可以了解其在发酵过程中的生长情况。

本实验采用血球计数板法进行酵母菌细胞总数的测定。

三、实验步骤1.准备实验材料：血球计数板、显微镜、酵母菌培养液、无菌棉签、离心管、离心机、滴管等。

2.将酵母菌培养液在离心机中离心10分钟，转速为1000转/分钟，弃去上清液，留下沉淀物。

3.用无菌棉签轻轻地将沉淀物涂抹在血球计数板的计数室底部，注意不要将沉淀物压破。

4.将血球计数板放置在显微镜下，找到计数室所在的位置，观察并计数酵母菌细胞的数量。

每个大方格内含有16个小方格，每个小方格内含有16个网格，每个网格内含有16个红细胞和白细胞或霉菌菌落等。

5.统计所有网格内的酵母菌细胞数量，并计算每毫升发酵液中所含的酵母菌细胞数。

公式如下：酵母菌细胞数/mL = （A×B×C×D×10000）/10000×W×V其中，A代表每个大方格内酵母菌细胞数，B代表每个小方格内酵母菌细胞数，C代表每个小方格内红细胞和白细胞或霉菌菌落数，D代表稀释倍数，W代表称取发酵液的质量（g），V代表发酵液的体积（mL）。

6.重复实验三次，求平均值。

四、实验结果与分析1.实验结果：在实验过程中，我们发现血球计数板的使用对于酵母菌细胞总数的测定非常重要。

通过血球计数板的统计和分析，我们得到了每毫升发酵液中酵母菌细胞的数量。

根据实验数据，我们可以得出以下表格：2.结果分析：从实验结果可以看出，三次实验的平均值为4.0×10^7个/mL。

这说明在发酵过程中，酵母菌的数量呈指数增长趋势，增长速度较快。

这也说明了酵母菌在适宜的条件下可以迅速生长繁殖。

同时，实验过程中需要注意无菌操作，避免杂菌污染对实验结果的影响。

微生物的计数——血球计数板法【摘要】测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。

分光光度法比拟简便，易操作，但是会使数据严重偏大。

而平板计数法那么会使实验数据严重偏小。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌那么采用彼得罗夫·霍泽〔Petrof Hausser〕细菌计数板。

两种计数板的原理和部件一样，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进展计数。

一、实验目的与要求1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。

2、了解血球计数板的构造和使用方法。

3、学会用血球计数板对酵母细胞进展计数。

二、根本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

此法的优点是直观、快速。

将经过适当稀释的菌悬液〔或孢子悬液〕放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进展计数。

由于计数室的容积是一定的〔0.1mm2〕，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积的微生物总数目。

由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。

血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进展。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是一样的，即16×25=400小方格。

探究培养液中酵母菌种群数量的变化一、实验目的：1．通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，尝试建构种群增长的数学模型。

2．用数学模型解释种群数量的变化。

3．学会使用血细胞计数板进行计数。

二、实验原理：1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

2．等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

多余培养液用滤纸吸去。

稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。

注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。

这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。

血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；计算公式：酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数注释：1. 1ml=1000mm3，每一大方格的体积为0.1mm3，即相当于1×104ml2. 培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。