细胞数的测定(血球计数板的使用方法)

血球计数板的计数方法血球计数板是一种常见的实验室设备，用于进行血液细胞计数。

本文将详细介绍血球计数板的计数方法，包括准备工作、样本处理、装载计数板、显微镜观察和计算结果等方面。

一、准备工作1.清洁：将血球计数板从存放位置取出，用酒精或去离子水擦拭干净，确保无灰尘和污垢。

2.检查：检查血球计数板是否完好无损，如有破损或变形应及时更换。

3.校准：使用前应进行校准，确保读数准确可靠。

二、样本处理1.采集样本：从受试者的静脉或指尖采集适量的血液样本，并将其加入到已经预先混合好的抗凝剂中。

2.混匀：轻轻摇动管子使其充分混匀，避免产生气泡。

3.稀释：将适量的稀释液加入到混合好的样本中。

通常情况下，白细胞需要进行稀释，而红细胞不需要稀释。

具体稀释倍数应根据实际情况而定。

三、装载计数板1.取出计数板：将血球计数板取出，放在干净的台面上，注意不要碰到玻璃面。

2.装载样本：使用移液器或吸管将稀释好的样本加入到计数板的样本槽中。

注意不要加过多，以免溢出。

3.震荡：轻轻震动计数板，使其充分混合。

四、显微镜观察1.调节显微镜：将显微镜调整到适当的倍率，并调节焦距，以便观察细胞。

2.观察细胞：在计数板上找到一个适当的视野，并开始观察细胞。

对于白细胞和红细胞，应分别选择不同的区域进行观察。

3.计数细胞：使用目镜和标尺，在每个小方格内逐一计数细胞。

对于白细胞和红细胞，应分别进行计数，并记录下来。

五、计算结果1.白细胞计算：根据已经记录下来的白细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出白细胞计数结果。

2.红细胞计算：根据已经记录下来的红细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出红细胞计数结果。

3.血红蛋白计算：根据已经记录下来的红细胞数量和血红蛋白浓度，按照公式进行计算得出血红蛋白计数结果。

4.其他指标计算：根据实验需要，可以进一步计算其他指标，如平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等。

六、注意事项1.避免使用过期或损坏的血球计数板。

2.样本必须充分混匀，以确保稀释均匀。

细胞计数方法——-－-—细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。

具体操作:１. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3。

计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。

然后按公式计算:细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。

所以,细胞密度=m×1６×10个／ml)说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为:１。

0mm(长)×1.0mm(宽)×０。

１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)=========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝==细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。

计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。

但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、计数区边长为１ｍｍ,则计数区得面积为1mm２,每个小方格得面积为1/400mm2。

血球计数板的使用方法血球计数板是临床检验中常用的一种实验工具，用于进行血液细胞计数。

它能够帮助医生了解患者的血液状况，对于疾病的诊断和治疗起着重要的作用。

在使用血球计数板时，我们需要按照一定的步骤和方法进行操作，下面将详细介绍血球计数板的使用方法。

首先，准备工作。

在进行血球计数板的使用前，需要准备好所需的仪器和试剂，包括血球计数板、显微镜、计数用液等。

同时，要确保仪器的清洁和完好，避免因为仪器问题导致实验结果的不准确。

第二步，取样。

在进行血球计数前，需要从患者的静脉血中抽取一定量的血液样本。

在抽取血样时，要注意使用无菌注射器和采血针，避免引入外部细菌或其他污染物质。

第三步，稀释。

将取得的血液样本进行稀释处理，使其浓度适合于在血球计数板上进行观察和计数。

通常情况下，我们会采用一定比例的稀释液将血液样本稀释，以便于在显微镜下观察到合适数量的血细胞。

第四步，填充血球计数板。

将稀释后的血液样本填充到血球计数板的计数室中。

填充时要注意不要使得计数室过满或者过少，以免影响后续的观察和计数。

第五步，观察计数。

将填充好的血球计数板放置在显微镜下，以适当的放大倍数观察血细胞的数量和形态。

在观察过程中，要仔细观察每一个计数室，并记录下其中的红细胞、白细胞和血小板的数量。

第六步，计数。

根据观察到的血细胞数量，进行相应的计数。

通常情况下，我们会选择几个计数室进行计数，并取其平均值作为最终的计数结果。

在计数过程中，要注意避免重复计数或者漏计，保证结果的准确性。

最后，记录结果。

将观察和计数的结果记录在实验记录表中，并进行相应的数据处理和分析。

在记录结果时，要注意标明样本的来源和处理方法，以便于后续的结果验证和分析。

总之，血球计数板的使用方法包括准备工作、取样、稀释、填充、观察计数、计数和记录结果等步骤。

在进行实验时，要严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性和可靠性。

希望以上介绍能够帮助大家正确使用血球计数板，提高实验效率和结果质量。

血球计数板的计数方法血球计数板是临床实验室中常用的一种计数工具，用于进行血细胞计数。

正确的计数方法对于获得准确的结果至关重要。

下面将介绍血球计数板的计数方法。

首先，准备工作。

在进行血球计数之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。

包括血球计数板、显微镜、计数用盖玻片、血细胞计数液等。

确保实验器材的清洁和完整，以免影响计数结果。

其次，取样。

取适量的血液样品，使用吸管或注射器将血液滴在计数板的计数室中。

注意避免气泡的产生，以确保计数的准确性。

然后，计数。

将计数板放置在显微镜上，调节镜头至适当倍数。

在计数室的九个小方格中，选择几个进行计数。

根据所选小方格的面积和深度，计算出所选小方格的体积。

然后在显微镜下观察所选小方格中的血细胞数量，并进行计数。

接着，计算。

根据所选小方格的体积和计数结果，计算出每升血液中的血细胞数量。

通常情况下，计数板上的每个小方格代表的体积是已知的，根据这一体积和计数结果，可以得出血细胞的浓度。

最后，记录。

将计数结果准确记录下来，包括所选小方格的数量、计数板的倍数、计数室的体积等信息。

这些记录对于结果的准确性和可复现性具有重要意义。

在进行血球计数板的计数方法时，需要注意以下几点，首先，要保持耐心和细心，避免因匆忙而导致计数错误。

其次，要进行多次计数，并取平均值，以提高结果的准确性。

最后，要严格按照操作规程进行，避免操作失误。

总之，血球计数板的计数方法是临床实验室中常用的一种技术。

正确的计数方法能够确保结果的准确性，对于临床诊断和治疗具有重要意义。

希望本文介绍的计数方法能够对相关人员有所帮助，提高血球计数的准确性和可靠性。

细胞数的测定一、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。

二、原理用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。

血球计数板是一块特制的厚载玻片，其上由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25×16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3三、血球计数板的使用方法（一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5～10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。

（二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。

由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。

静置5-10分钟。

（三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。

位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。

如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。

当芽孢菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。

（四）计数时若使用刻度为25×16（大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。

如用刻度为16×25（大格）的计数板，除数四角的4个大格外，还需数中央1个大格的菌数（即80小格）。

每小格中菌数以5-10个为宜，如菌液过浓可适当稀释。

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数方法--—--—细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。

具体操作:1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板．2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml（注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。

所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为：1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝===细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

血球计数板的使用方法
一、注意事项
1. 血球计数板只能用于血液检查，不能用于测量其他物质；
2. 将血球计数板放置于平面上，确保平稳，防止晃动和碰撞；
3. 在开始测定之前，要根据靶点的电极安装完整；
4. 滴血时要涂抹几种抗凝剂，防止血液沉淀。

如果血液较深，可在计数前用刨子将血液挖出。

二、步骤
1. 将血液精确滴在血球计数板上；
2. 连接血球计数板上的接头，打开电源；
3. 根据靶点调整电位器；
4. 将光学镜头的焦距调节到节点最佳状态；
5. 通过镜头观察血液样本，一次性计数红细胞、白细胞和血小板的数量；
6. 通过刀片移动的方式，进行血球的细致观察和计数；
7. 计数结束后，关闭电源，清理血球计数板上的血液，清洗各个部分，涂抹上抗菌剂。

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。

所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

血球计数板及其使用方法1、血球计数板的构造血球计数板是一种生物学或医学仪器，用以对人体血液中红细胞、白细胞进行显微计数，也常用于一些细菌、真菌、酵母菌等较大细胞或微生物的计数。

血球计数板的形状如图1所示，血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上由4个槽构成3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一方格网，每个方格网共分9个大方格（大方格用三线隔开），中央的一大方格作为计数用，称为计数室，如图2所示。

计数室的规格常有两种:一种叫XXX式（16×25型），是一个计数室分为16个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成25个小方格;另一种叫汤麦式(25×16型），是一个计数室分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

可是不管计数室是哪种构造，它们都有一个配合特点，即计数室都由400个小方格组成。

计数室的边长常为1mm,则计数室的面积为1mm2，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数室的容积为0.1mm3,每个小方格的边长为0.05mm,每个小方格的容积为边长为0.25mm，每其中方格的容积为长为0.2mm，每其中方格的容积为12、血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例）(1)用血球计数板计数培养液中的酵母菌个数。

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌的计数，以每小方格内含有45个酵母菌为好，一般稀释10倍即可。

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室盖上专用的盖玻片。

(4)将稀释后的培养液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗人，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻使酵母菌全部沉到计数室内。

(5)计数时，如果使用16×25型的计数室，要按对角线位，取左上，左下，右上，右下4个中方格（即100个小方格）的酵母菌个数3如果为25×16型的计数室，除了取其4个对角方位外，还需再数屮央的一个中方格（即80个小方格）的酵母菌个数。

血球计数板的使用方法
血球计数板是一种用于测量血液中各种血球数量的实验室工具。

下面是使用血球计数板的一般步骤：
1. 准备工作：
- 清洁血球计数板：使用酒精或其他适当的清洁剂将血球计
数板彻底清洁，并确保完全干燥。

- 准备血液样本：采集血液样本，并将其置于抽血管中。

2. 充填血液样本：
- 将橡胶管连接至抽血管的一端，并将另一端放入含有适当
稀释液（例如乙醇，盐水等）的试管中。

- 轻轻压抽血管，让血液与稀释液混合，确保样本适当稀释。

3. 填充计数室：
- 将计数室的一角放入混合好的血液样本液中。

- 逐渐放松手指，使液体自然充满整个计数室。

4. 观察计数室：
- 使用显微镜，在10倍或40倍放大倍数下观察计数室的血
球图像。

- 记录计数室内的血球数量。

5. 计算血球数量：
- 将计数室中各种血球的数量进行计算和统计。

- 根据计数室内的面积和深度，计算总血球数量。

- 可以使用计数室所覆盖的血球数量与已知的面积，以得出
总血球数量的近似值。

6. 清洗和储存：
- 使用适当的清洁剂彻底清洗计数室，确保无血液残留。

- 将计数室储存在干燥，洁净的地方，以防止污染和损坏。

请注意，使用血球计数板可能需要一定的实验室训练和技巧，以确保准确性和可靠性。

在进行血液分析时，应遵循实验室的操作指南和安全规定。

血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。

具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。

可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。

2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。

3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。

滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。

4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。

5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。

一般使用的计数面积为3个或4个方格。

6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。

根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。

7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。

使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。

在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。

血球计数板使用方法
血球计数板介绍
使用方法
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面通常稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。

5．计数时若计数区是由16个大方格构成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。

假如是25个大方格构成的
计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。

为了保证计数的准确性，避免重复计数与漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。

如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

即位于本格上线与左线上的细胞计入本格，本格的下线与右线上的细胞按规定计入相应的格中。

见右图：即本格中计数细胞为3个。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或者抹擦，以免损坏网格刻度。

洗净后自行晾干或者用吹风机吹干，放入盒内储存。

计数公式
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数
1、25格×16格的血球计数板计算公式：
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数
例1：用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm ×1mm×0.1mm方格，由400个小方格构成，假如一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先稀释后再计数。

若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 5×400×10000×10＝2×108 个。

耶赛明（南通）保健有限公司目的 Purpose规范计数板的标准操作，确保设备的操作有章可循。

范围 Scope适用于计数板的日常使用。

职责 Responsibility质检部的检验员负责遵守该规程，质检部负责人负责监督与管理。

内容Procedure1 概述1.1 测定微生物细胞和动物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。

1.2 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等1.3 血球计数板1.3.1 是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

1.3.2 中间平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方网格（图1）。

图1：血细胞计数板构造（一） 图2：血细胞计数板构造（二）1.3.3 每个方网格分为9个大方格，正中间的大方格为计数室，计数室内的刻度有两种：一种是每个计数室内分为16个中方格（中方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格（图2）；另一种是每个计数室内分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数室内都由400个小方格组成。

1.3.4 计数室边长为1mm，则计数室的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。

盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

1.3.5 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物或细胞的数量，再换算成每毫升样液（或每克样品）中微生物或细胞的数量。

已知：1cm3体积=10mm×10mm×10mm=1000mm3=1ml；所以：1cm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。

血球计数板的计数方法血球计数板是一种用于计数血液中各种细胞数量的仪器。

它是由一块玻璃板和一根计数棒组成的。

玻璃板上有许多小方格，每个小方格的大小和深度都是固定的。

计数棒是一根细长的棒状物，一端有一个小圆球，可以吸取血液样本。

使用血球计数板进行计数时，需要按照一定的步骤进行操作。

需要准备好血液样本。

通常情况下，血液样本是从患者的静脉中抽取的。

抽取血液时需要注意卫生和安全，避免感染和交叉感染的发生。

抽取的血液样本需要用抗凝剂进行处理，以防止血液凝固。

接下来，需要将血液样本放在计数棒上。

将计数棒的小圆球轻轻地放在血液样本上，让血液自然吸入计数棒中。

吸入的血液量应该是适量的，不要过多或过少。

过多的血液会使计数棒上的血液过于密集，难以进行计数；过少的血液则会导致计数不准确。

然后，需要将计数棒上的血液样本滴在玻璃板上。

将计数棒的小圆球轻轻地触碰玻璃板上的小方格，让血液样本自然滴落在小方格中。

每个小方格中应该只有一滴血液，不要让血液溢出或者混合在其他小方格中。

接着，需要进行计数。

使用显微镜观察玻璃板上的小方格，计数板上的小方格通常是由9个大方格组成的。

在显微镜下，可以看到每个小方格中的血细胞数量。

根据每个小方格中的血细胞数量，可以计算出每个大方格中的血细胞数量。

最后，根据每个大方格中的血细胞数量，可以计算出整个计数板中的血细胞数量。

在进行计数时，需要注意以下几点：1. 计数时需要仔细观察，避免漏计或重复计数。

2. 计数时需要按照一定的规律进行，避免出现计数错误。

3. 计数时需要注意计数板上的各种细胞数量，包括红细胞、白细胞、血小板等。

4. 计数时需要注意计数板上的各种细胞形态和大小，以便进行鉴别诊断。

5. 计数时需要注意计数板上的各种细胞分布情况，以便进行统计分析。

血球计数板是一种非常重要的医疗仪器，它可以帮助医生进行血液检查和诊断。

使用血球计数板进行计数时，需要仔细操作，遵循一定的规律，以保证计数的准确性和可靠性。

细胞悬液中细胞数量的计数一般使用血球计数板（hemocytometer 或 haemocytometer) 在显微镜下直接计数。

其原理是，观察在一定的微量容积中的细胞数目，然后推算出“每毫升细胞数”。

其缺点是，包括死细胞及微小杂物均被计算在内，所以，计数的结果可能偏高。

这种方法常用于个体较大的细胞或菌体（如人体血细胞，酵母菌等），不适合于普通细菌（如大肠杆菌）和病毒（但某些昆虫的病毒，如多角体病毒，除外）。

不论计数的对象如何，均须制备分散的悬液。

一 制备细胞悬液不同细胞，制备悬液的方法不同。

真菌细胞因有坚硬细胞壁，可以用振荡器或超声波处理以助分散。

这里以贴壁生长的哺乳动物为例，介绍制备贴壁细胞悬液的一般步骤：1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS 洗培养物一次。

2）、给培养瓶内加入1.5 毫升 0.25％胰蛋白酶溶液（培养瓶面积为25平方厘米），于37℃消化3～5 分钟 。

3）、期间不断在显微镜下观察。

当细胞变圆脱壁时，加入一定量的培养液（如5 毫升）以终止胰蛋白酶的消化，并用吸管吹打以便细胞更好的分散。

二 计数与计算过程1）、在血球计数板中央放置计数专用的盖玻片。

2）、用微量取样器吸取细胞悬液（一般15-20微升即可），沿计数板凹蹧处加入，至盖玻片与计数板间的空隙被液体充满为止。

3）、在显微镜下按箭头方向计数四角内的细胞总数（每角有16小方格，见下图W 区)。

对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。

血球计数板使用方法4）、按下式计算细胞密度。

如果密度太大（如每个W区超过500-100 0），可以先稀释5-10倍然后再重新计数，最后计算结果要乘以稀释倍数。

细胞密度/毫升＝（4个W区细胞总数/4）×10000 x 稀释倍数三举例有学生将样品稀释100倍后，数得4个W区的细胞总数为520，那么他的样品浓度（稀释前）是：520/4 x 10000 x 100 = 1.3 x 108/毫升四血球计数板1）、俯视，侧视图2）、显微镜下（W和粗黑线条是为了方便理解而画的，箭头表示计数W区的顺序）五注意事项1）、务必使细胞充分分散。