血球计数板的构造和使用方法简介

血球计数板生物实验用具血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.实验六微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。

血细胞计数板的结构和使用主要内容一.计数板结构◆结构◆区域划分二.计数板使用◆使用◆计数顺序与原则◆质量保证◆评价◆考核方法一、改良Neubauer计数板结构计数板上下各一个计数池1mm1m m计数板结构区域划分二、计数板使用计数顺序与原则计数板使用质量保证1．计数板（1）计数板合格性鉴定鉴定周期：每隔1年，要求计数室的玻面光滑、透明、划线清晰，划线面积准确。

1）盖玻片检查：包括厚度和平整度，要求盖玻片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致。

2）计数室深度：高度误差应在±2%（±2μm）以内。

3）计数室划线：每个大方格边长的误差应小于1%。

（2）保证计数板和盖玻片清洁：防止计数板污染，致使充液时产生气泡。

如使用血液充液，计数板和盖玻片使用后应依次用95%（V/V）乙醇、蒸馏水棉球擦拭，最后用清洁纱布手揩净。

（3）加盖玻片：WHO推荐采用推式法，以保证充液的高度为0.10mm。

当盖玻片盖在计数板上时，若两层玻璃之间见到彩色条带（Newton环），说明计数板和盖玻片清洁良好。

2．充液（1）平放计数板。

充液前应适当用力、快速振荡细胞悬液30秒，使其充分混匀，但不能产生过多气泡，以免影响充液和准确计数，也要防止剧烈振荡以免破坏细胞。

（2）一次完成充液，如充液过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。

（3）充液后不能移动盖玻片。

3．静置计数板白细胞和红细胞计数一般需沉淀2～3分钟，血小板计数应沉淀10～15分钟，同时需注意保湿。

4．计数（1）如果细胞严重分布不均，应重新充液计数。

如白细胞总数在正常范围内时，各大方格的细胞数不得相差8个以上。

两次重复计数误差：白细胞不超过10%，红细胞不超过5%。

（2）计数原则计数细胞时应遵循计数原则，并注意与非细胞成分相区别。

5．计数误差（1）技术误差（technical error）：由于操作不规范或使用器材不准确造成的误差称为技术误差。

血球计数板及其使用方法1、血球计数板的构造血球计数板是一种生物学或医学仪器，用以对人体血液中红细胞、白细胞进行显微计数，也常用于一些细菌、真菌、酵母菌等较大细胞或微生物的计数。

血球计数板的形状如图1所示，血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上由4个槽构成3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一方格网，每个方格网共分9个大方格（大方格用三线隔开），中央的一大方格作为计数用，称为计数室，如图2所示。

计数室的规格常有两种:一种叫XXX式（16×25型），是一个计数室分为16个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成25个小方格;另一种叫汤麦式(25×16型），是一个计数室分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

可是不管计数室是哪种构造，它们都有一个配合特点，即计数室都由400个小方格组成。

计数室的边长常为1mm,则计数室的面积为1mm2，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数室的容积为0.1mm3,每个小方格的边长为0.05mm,每个小方格的容积为边长为0.25mm，每其中方格的容积为长为0.2mm，每其中方格的容积为12、血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例）(1)用血球计数板计数培养液中的酵母菌个数。

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌的计数，以每小方格内含有45个酵母菌为好，一般稀释10倍即可。

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室盖上专用的盖玻片。

(4)将稀释后的培养液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗人，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻使酵母菌全部沉到计数室内。

(5)计数时，如果使用16×25型的计数室，要按对角线位，取左上，左下，右上，右下4个中方格（即100个小方格）的酵母菌个数3如果为25×16型的计数室，除了取其4个对角方位外，还需再数屮央的一个中方格（即80个小方格）的酵母菌个数。

关于血球计数板的使用一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。

血球计数板是常用的计菌器之一。

血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。

在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。

计算公式：每毫升原液中酵母细胞个数／1mL＝每个小方格中酵母细胞平均数×400×10000×稀释倍数二、血球计数板的使用方法步骤使用血球计数板计数时，按照如下的实验步骤进行：1．镜检计数室。

在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；2．加样品。

将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。

多余培养液可用滤纸吸去；3．计数。

稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。

血球计数板及其使用方法血球计数板是一种用于细胞计数和分类的实验工具，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。

它对于研究细胞生长、增殖和凋亡等生命活动具有重要意义，也是疾病诊断和治疗的重要依据。

本文将详细介绍血球计数板的定义、原理和使用方法，并通过应用实例阐述其重要性和应用前景。

血球计数板的定义与原理血球计数板是一种用于细胞计数的实验工具，通常由一块载玻片和一块盖玻片组成。

载玻片上具有方格状沟槽，便于细胞分布和计数。

盖玻片则具有与载玻片相匹配的沟槽，可防止细胞逸出。

使用时，将样本溶液滴加在载玻片上，盖上盖玻片，然后在显微镜下观察和计数。

血球计数板的工作原理基于以下步骤：将样本溶液滴加在载玻片上；盖上盖玻片，确保没有气泡；将血球计数板置于显微镜下观察；根据方格状沟槽对细胞进行计数和分类。

血球计数板的使用方法使用血球计数板进行细胞计数和分类的步骤如下：样本处理：将待测样本溶液进行适当稀释，以便在显微镜下观察到单个细胞。

一般情况下，使用生理盐水或无血清培养液进行稀释。

仪器调试：将血球计数板放在显微镜下，调整显微镜焦距，使视野清晰。

同时，确保盖玻片与载玻片之间的密封性，以避免细胞逸出。

数据读取：在显微镜下逐个方格计数细胞。

根据细胞大小、形状和染色等特点对其进行分类。

通常情况下，血球计数板可分为白细胞计数板和红细胞计数板。

结果分析：根据计数结果，计算细胞浓度。

细胞浓度（个/mL）=方格内细胞数 /方格个数 /稀释倍数。

应用实例血球计数板在医学和生物学领域具有广泛的应用。

例如，在医学领域中，血球计数板可用于血常规检查，以监测白细胞、红细胞和血小板等血液细胞的数量和变化。

在生物学领域中，血球计数板可用于研究细胞生长、增殖和凋亡等生命活动。

例如，通过对比不同药物对肿瘤细胞生长的影响，可以为抗癌药物研发提供有力支持。

血球计数板作为细胞计数和分类的重要工具，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。

通过血球计数板的使用，可以快速、准确地获得细胞数量和类型分布，为临床诊断、疾病治疗和科学研究提供有力支持。