白花蛇舌草体外诱导人肝癌HEPG2细胞凋亡的初步研究

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡王海侠;郑新勇;郜尽【摘要】Objective To screen the potential effective components in Pulsatilla chinensis for treatment for liver cancer, and explore the anti-cancer mechanism. Methods Pulchinenoside was isolated from Pulsatilla chinensis, human liver cancer cell line HepG2 was served as target cell, and the inhibiting effects of pulchinenoside on HepG2 cells were evaluated by MTT assay. Cell cycle arrest was determined by flow cytometry, cell apoptosis was detected by DNA fragmentation method, and Caspase 3 activity was measured. The possible responsible signal pathway for cell apoptosis was explored. Results Pulchinenoside B4 significantly inhibited proliferation of HepG2 cells, and the maximum inhibitory rate was 71.5%. Cell cycle analysis indicated that 83. 2% of cells were arrested at G2 phase at most. Flow cytometry revealed that cell apoptosis was dependent of time of incubation with 40 mg/mL pulchinenoside B4, cell apoptosis rate increased from nearly 0 to 14. 3% at most with time increase from 0 to 48 h, and DNA fragmentation occurred. Further study indicated that pulchinenoside B4 significantly upregulated Caspase 3 activity in HepG2 cells. Conclusion Pulchinenoside B4 regulates the cell cycle of liver cancer cells, causes cell cycle arrest at G2/M, and induces cell apoptosis, which is a potential chemical for the treatment of liver cancer.%目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制.方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA 片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制.结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5％；通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2％的细胞被阻滞在G,期；用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3％,并且发生了DNA片段化；进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高.结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(031)010【总页数】5页(P1481-1485)【关键词】白头翁皂苷B4;肝癌细胞;细胞周期阻滞;凋亡;流式细胞仪;半胱氨酸蛋白酶3【作者】王海侠;郑新勇;郜尽【作者单位】安徽科技学院理学院,凤阳 233100;巢湖市公安局刑侦支队,巢湖238000;上海交通大学药学院,上海 200240【正文语种】中文【中图分类】R285;R979白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel的干燥根，具有清热解毒、凉血止痢之功效［1］，数百年来一直被用于治疗阿米巴原虫感染等疾病。

临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2019年第6卷第28期2019Vol.6No.28198白花蛇舌草的抗肿瘤机制分析进展以及在血液病中的应用探析边文山（齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006）【摘要】白花蛇舌草即为茜草科下属的一年生草本类植物，其其余名称即为鹤舌草、白花十字草等，其特性较寒、味道偏苦，具备清热去毒、消炎镇痛、利尿清肿等相关功效，大多运用到对各类痈疖、癌症等病症施予治疗。

【关键词】血液病；白花蛇舌草；研究；抗肿瘤；效果【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.28.198.02当代有研究人员指出了，白花蛇舌草具备提升非特异性抗氧化等相关功能，在临床中，其被运用到对各类炎症与癌症施予治疗，且对于许多耐药类肿瘤细胞具备较优的功效。

白花蛇舌草可以借助对讯号通路实施干预、阻碍能量代谢、引导肿瘤细胞产生凋亡、阻碍肿瘤血管产生等各类机制以凸显出抗癌的功效。

但是，虽然对白花蛇舌草相应的抗癌功效具备许多报告，然而，都没有总体且全方位地探究其构成、靶点、癌症间的关联性。

1各类抗肿瘤机制1.1 引导细胞产生凋亡细胞本身的凋亡即为程序性死亡细胞的一种方法，被数个基因调节的自行凋亡进程，其与肿瘤本身的产生、进展等紧密联结。

白花蛇舌草对于白血病中的K562型细胞、CEM型细胞等各类细胞本身的发育都能够凸显出阻碍与引导凋亡等功效。

白花蛇舌草注射液（HDI）借助线粒体膜中的电位转变以调整HL-60、K562型细胞中的各类凋亡诱导因子本身的分散，进而阻碍细胞产生增殖。

1.2 生成超氧化物超氧化物即为内含超氧离子的各类化合物，其即为氧气分子中的单电子型还原物体。

超氧离子即为一个自由基、一个氧原子伴随一个非成对电子，其与氧气分子一致，体现为顺磁性。

有研究人员指出了，白花蛇舌草可以引导急性髓样白血病中的HL60型细胞生成过多的超氧化物，使得癌细胞中的氧气得以爆破，最后，激发凋亡讯号网络，让癌细胞产生凋亡。

白花蛇舌草的药理作用和临床应用研究进展[ 11-05-12 11:02:00 ] 作者：王锦燕编辑：studa20【关键词】白花蛇舌草；药理作用；临床应用；综述白花蛇舌草具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛等功效,为临床常用药。

现就其药理作用和临床应用研究的新进展做一简要概述。

1 药理作用1.1 抗肿瘤作用谭氏等[1]的研究表明,白花蛇舌草的乙醇提取物对结肠癌、黑素瘤和乳腺癌细胞株显示一定活性,特别是对乳腺癌细胞株活性更强。

袁氏等[2]以不同剂量的白花蛇舌草在裸鼠胶质瘤间质注射,观察实体瘤的瘤重及组织细胞形态的变化,结果其对裸鼠肿瘤生长有明显的抑制作用。

于氏等[3]研究表明,白花蛇舌草提取物对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402的生长有明显的抑制作用,并能抑制细胞集落的形成,没有逆转Bel-7402多药耐药性的作用。

实验还确定了白花蛇舌草的安全剂量范围是100～1 000 g/L,在安全剂量范围内对机体正常细胞无毒性作用。

为临床上治疗多药耐药肿瘤提供了一种新的药物。

于氏等[4]从细胞代谢和形态学变化的角度初步论证了白花蛇舌草提取物的抑瘤机制。

白花蛇舌草作用后的肿瘤细胞,DNA复制受到抑制,细胞的活力受到不同程度的损伤,达到有效抑制Bel-7402细胞分裂的作用。

高氏等[5]研究表明,白花蛇舌草可以促使细胞中储存的钙离子释放,引起钙离子耗竭,同时诱导胞外钙离子的内流,以升高胞内游离钙的浓度。

提示白花蛇舌草的抗癌作用在于诱导癌细胞进入凋亡程序。

1.2 增强免疫系统功能王氏等[6]的实验研究表明,白花蛇舌草总黄酮具有增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能,能够促进免疫功能低下的小鼠由ConA或LPS诱导的脾细胞的增殖反应,并提高小鼠血清IL-2和IFN-γ的含量,促进免疫功能低下小鼠脾脏IgM抗体形成,并升高抗肿瘤药物所致的小鼠白细胞减少。

1.3 抗菌消炎作用蒋氏等[7]的研究表明,白花蛇舌草醇提物对大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌都有明显的抑制作用。

白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究目的：应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制实验，观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。

方法：通过体外培养的方法培养人结肠癌HT-29细胞株和结肠癌HCTI16细胞株，对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。

结果：白花蛇舌草提取物对HT-29、HCTI16细胞株的影响为：3mg/ml浓度时抑制率分别为（25.64±1.36）%、（27.36±1.87）%；5mg/ml浓度时抑制率（37.25±2.01）%、（39.01±1.65）%；7mg/ml 浓度时抑制率（49.87±1.68）%、（51.22±2.33）%，其抑制率均优于对照组（P＜0.05）。

结论：白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的增值，具有显著的抗肿瘤效果。

标签：白花蛇舌草；提取物；结肠癌HT-29细胞株；结肠癌HCTI16细胞株；凋亡作用肿瘤在患病人群中的致残率及致死率居高不下，是较为难治的一类疾病。

西医对于肿瘤的治疗常采用切除手术治疗以及放化疗治疗等，但治疗费用昂贵，且对机体损害极大[1]。

中医药及其提取物属于天然药材，具有极高的生物活性，且中药临床应用的不良反应相对较小。

为了观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性，本研究通过体外实验的方法观察其对结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的抑制率。

1 仪器与材料1.1 仪器低温离心机（SIGMA公司生产，型号2-16PK）、酶标仪（上海赛默飞世尔公司生产，型号MK3）、显微镜（日本尼康公司生产，型号ECLIPSE TS-100）。

1.2 材料白花蛇舌草由医院药房提供。

RPMI1640培养基（上海博生生物科技有限公司生产，LM-R1641/500）；噻唑蓝（MTT）干粉（北京索莱宝科技有限公司生产，M8180-1）；（上海国源生物技术有限公司，9002-07-7）、胎牛血清（上海玉博生物科技有限公司，16000-044）。

54第23卷 第1期 2021 年 1 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23 No. 1 Jan .，202140 ( 5 )：631-637.[ 32 ]VICARIO M，ANA M GONZ ÁLEZ-CASTRO，CRISTINA MART ÍNEZ，et al. Increased humoral immunity in the jejunum of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome associated with clinical manifestations[ J ] . Gut，2014，64 ( 9 )：1379-1388.[ 33 ]LIU D R，XU X J，YAO S K. Increased intestinal mucosal leptin levels in patients with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome[ J ] .World Journal of Gastroenterology，2018，24 ( 1 )：46-57.[ 34 ] 占道伟，孙建华，罗开涛，等.针刺治疗腹泻型肠易激综合征及其对患者血清5-羟色胺的影响[ J ] .中国针灸，2014，34 ( 2 )：135-138.[ 35 ] 王艳杰，张立德，柴纪严，等.针刺眼针穴区与非穴区对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠P 物质及神经激肽Ⅰ型受体表达的影响[ J ] .中华中医药杂志，2014，29 ( 2 )：426-429.[ 36 ] 张狄，吴华军，李鹏，等.温和灸大肠俞募穴治腹泻型肠易激综合征临床观察[ J ] .浙江中西医结合杂志，2016，26 ( 12 )：1096-1098.[ 37 ] 付勇，章海凤，熊俊，等.热敏灸治疗腹泻型肠易激综合征不同灸位的临床疗效观察[ J ] .中华中医药杂志，2014，29 ( 2 )：517-519.[ 38 ]苏强，冯丽丽，钱薇，等.腧穴热敏化悬灸辅助治疗腹泻型肠易激综合征效果观察[ J ] .山东医药，2017，57 ( 10 )：49-51.[ 39 ] 石学慧，罗杰坤，谭涛.电针治疗腹泻型肠易激综合征的临床观察[ J ] .新中医，2010，42 ( 5 )：72-74.[ 40 ] 冉国平，刘嘉颖，杨大业，等.电针足三里对肠易激综合征腹泻型大鼠炎性损伤的机制研究[ J ] .中国中西医结合杂志，2019，39 ( 3 )：342-346.[ 41 ] 洪珍梅，王樟连，陈晓军.穴位埋线治疗腹泻型肠易激综合征疗效观察[ J ] .中国针灸，2011，31 ( 4 )：311-313.[ 42 ] 杨敏，周利，徐派的，等.针灸治疗腹泻型肠易激综合征的临床研究[ J ] .上海针灸杂志，2018，37 ( 11 )：1246-1249.[ 43 ] 朱海涛，郑雪松，彭力.热敏灸联合头针治疗腹泻型肠易激综合征90例疗效观察[ J ] .河北中医，2018，40 ( 3 )：446-448，466.[ 44 ] 韩秀芬.参苓白术散加味结合针刺治疗脾虚湿盛证腹泻型肠易激综合征的临床疗效观察[ J ] .中国实用医药，2019，14 ( 5 )：147-149.[ 45 ] 邹春阳.参术健脾汤联合隔姜灸治疗腹泻型肠易激综合征脾虚湿阻证临床观察[ J ] .四川中医，2016，34 ( 6 )：161-163.[ 46 ] 李娜，王海洋.雷火灸联合复合乳酸菌治疗腹泻型肠易激综合征25例临床观察[ J ] .中国民族民间医药，2019，28 ( 12 )：89-92.[ 47 ] 王陆军，于岩瀑，高树中，等.脐疗对腹泻型肠易激综合征模型大鼠影响的实验研究[ J ] .中国中医基础医学杂志，2016，22 ( 6 )：774-776.基于干预信号通路探索白花蛇舌草抗癌作用机制王淑1，孙萍2，曹广尚2，王信2，李娜1，魏永利2，郭功玲2，马传江2，杨培民2（1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011）基金项目：国家自然科学基金（81773950，81274052）；山东省自然科学基金（ZR2015HL116）；山东省中医药科技发展计划（2017-083）作者简介：王淑（1996-），女，山东济南人，硕士研究生，研究方向：靶向制剂、药物新剂型、新技术研究。

国内白花蛇舌草抗肝癌的分子作用机制的研究现状王艳杰;王扬;李明珠;李冀【摘要】本文在总结近十几年国内主要文献的基础上，从白花蛇舌草抗肿瘤作用的基因表达、细胞凋亡、热休克蛋白70等方面，较为详细的综述白花蛇舌草抗肝癌作用分子机制，目的是为更好地帮助广大科研工作者进行后续的研究，避免重复的实验研究。

【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】3页(P161-163)【关键词】白花蛇舌草;基因表达;肝癌;分子机制;抗肿瘤【作者】王艳杰;王扬;李明珠;李冀【作者单位】黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R735.7白花蛇舌草是茜草科耳草属全草类药用植物。

关于它的文献报道十分广泛。

1979年～1990年的文献报道，主要是集中在免疫以及抗炎机制方面［1－3］，1990年～2000年的文献报道大多数都与白花蛇舌草化学成分、药理活性、临床应用有关，而药理活性主要集中在免疫活性与抗癌活性，其它方面很少报道［4－5］，因此2000年以前，白花蛇舌草抗肿瘤作用的实验研究方面的报道没有实质性的突破，报道的白花蛇舌草多以复方形式参与各种临床肿瘤和各种炎症的治疗，如治疗小儿肺炎、阑尾炎、毒蛇咬伤、盆腔炎、附件炎，治疗子宫颈癌、胃癌、肝癌等［6］。

2000年以来，白花蛇舌草的体内外实验性研究成果不断的更新，尤其是关于其抗肝癌的分子机制方面有了很大的突破，现就目前的研究成果进行以下综述，为广大的科研工作者提供便利的参考。

1 抗肝癌作用与基因表达王顺启等［7］用白花蛇舌草(终浓度为0.8 g/L)体外作用人肝癌细胞SMMC－7721，36h后利用基因文库分析差异基因的表达，结果表明白花蛇舌草主要下调基因为三个大的类群:细胞分裂增殖相关基因，线粒体相关基因及肿瘤免疫相关基因。