人肝癌细胞系SMMC-7721肿瘤干细胞筛选及鉴定

黄芩苷对人肝癌细胞系SMMC7721抑瘤作用的实验研究

ｍｅｌｈｄｒｍａｋｂｅｉｈｂｔｒｆｃｎｔｅｇｏｈｏＭＭＣ７２ｎｖｔ，ａｄｈｄｓａｉｉａｌｉｎｆａｔｄｆｒｎｅｉｏ＿ａｅｒａｌｎｉｉｙｅｆｔｈｒｗｆＳ／ｍｏｅｏｔ７１ｉｉｏｎａｔｔｔｌｓｇｉｃｎｉｅｅｃｎｃｎ— ｒｓｃｙｉ
３１０；４００
① ４～．０１ｇｍ黄芩苷组对Ｓ００５３２５ｍ／ｌＭＭＣ７２７１肿瘤细胞生长均具有明显抑制作用，与细胞组对照比差异有显著性（Ｐ＜．５或Ｐ＜．１。０５～．６ｇｌ黄芩苷组肿瘤生长抑制率与其他浓度组比差异有显著性（０叭）与顺铂００００）．００２５ｍ／ｍＰ＜、，
摘要：目的研究黄芩苷对人肝癌细胞系ＳＭ７２的生长抑制作用并初步探计其作用机制。方法采用ＭＩ法检测ＭＣ７１ｒ１ＴＩ
黄芩苷对人肝癌ＳＭＭＣ７１细胞株增殖的抑制作用，采用流式细胞技术检测其对Ｓ７２并ＭＭＣ７１细胞周期的影响。结果７２
维普资讯
பைடு நூலகம்
时珍国医国药２００８年第１第６期９卷
ＬＳＩＥＥＩＩＥＡＤＭＴＲＡＭＤＣＥＥＲＨ２０Ｏ．９Ｎ．ＩＺＮＭＤＣＮＮＡＥＩＥＩＡＲＳＡＣ０８ＶＬ１Ｏ６ＨＨ
中图分类号：２５５文献标识码：Ｒ８．Ａ
文章编号：０８００（０８０ — ２＿２１０－８５２０）６１２（４）

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响

ｖｖｉｏ：Ｈｕｎｌｅａｃｒｗａｒｎｐａｔｄｓｂｕａｅｕｌｎｍｉｅ，ｔｅｉｉｅｎｏｔｒｕｓ：ｃｎｒｌｇｏｐａｄｔａｉｏｍａｉｒｃｎｅｓｔａｓｌｎｅｕｃｔｎｏｓｙｉｃｖｈｎｄｖｄｄｉｔｗｏｇｏｐｏｔｒｕｈｄ — ｏｎｌｍｉｅｇｏｐ．ＶＥＧＦｐｏｅｎｌｖｌｉｅｕｗａｅｅｍｉｅｙＥＳＩＭＶＤＳａｃｌｔｄｂｍｍｕｏｉｔｃｅｓｒ．ＲｅｕｔｄｒｕｒｔｉｅｅｎｓｒｍｓｄｔｒｎｄｂＬＡ．Ｗａｃｕａｅｙｉｌｎｈｓｏｈｍｉｔｙｓｌｓ
ｉｇｈｅｓｏｈｉｏｉｅｓｌｔｎｉｃｅｓｄｆｍ０ｇｍｏ４０ｇｍｌｈｌｔｅＶＧｈｇｄｆｍ（３２ｎ．ＴｅｄｎｉｆＴａｄｍｄｏｕｉｎｒａｅｒ／ｌｔ０／ｉｈＥＦｃａｅｒ￣ｌｏｏｗｅｎｏ８．１±
ｉｈｂｔｄｂｈｉｏｄｎｈｎｉｉｏｒｗａｕｌｔｈｎｒａｅｏｅｄｎｉｆｔａｉｏｄｏｕｉｎｎｉｉｙｔａｄｍｉｅａｄｔｅｉｈｂｔｎｇｅｇｄａｙｗｈｔｅｉｃｅｆｔｅｓｔｏｌｄｍｉｅｓｌｔ．ｅｌｉｒｌｉｓｈｙｈｏ
８３）ｇｍｏ（３５．２ｐ／ｌｔ３．９±１．８ｐ／１ｏｃｕｉｎＴｅａｔｎｉｇｎｃｏｕａｅａｏｅｌＭＭＣ一７２ａｅ０９）ｇｍ．ＣｎｌｓｈｉｇｏｅｉｆＨｍＨｐｔＣｌＳｏｎａｎｍａ７１Ｃｂｎ

pEGFP-N2-ECM1重组质粒的构建及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

Ｂｍ、Ｎｒｅ购于美国ＭＢ公司；ａＨＩＤＡＭａｋｒＩ质粒小量
ＳＭＭＣ７２一７１肝癌细胞系。方法
术构建ｐＧＰＮ一Ｃ真核表达载体，ＥＦ — ２ＥＭ１经酶切、测序鉴定正
确后，脂质体转染Ｓ用ＭＭＣ７２一７１细胞，４８药物筛选稳定Ｇ１转染的细胞系。荧光显微镜检测融合蛋白表达，ＴＰＲ技Ｒ —Ｃ术检测ＥＭ１因表达。结果构建的重组质粒经双酶切Ｃ基及测序分析鉴定，结果证实ｐＧＰＮ．ＣＥＦ — ２ＥＭ１构建成功；筛选
了ｐＧＰＮ－ＣＥＦ —２ＥＭ１的真核表达载体，在肝癌Ｓ并ＭＭＣ７２－７１
细胞中稳定表达，为研究ＥＭ１在肝癌进展中的作用奠定了Ｃ
实验基础。
公司；胰酶购于江苏碧云天公司；高糖Ｈｃｏｅ公司；４８购于美国ＲｓｅｙｌｎＧ１ｏｈ公司、培养板购于Ｃｒｉｇ公司；Ｒｖｒ反转６孔ｏｎｎｅｅｔＡ录试剂盒购于Ｆｒｎａ公司。ＬｅｍｅｔｓＢ—Ｋｎａａ琼脂培养
安徽医科大学学报
Ａｔｎｖｒｔｔｄｉｌｎｕ２１ｅ；７２ｃＵｉｓａｉＭｅｉｎｉＡｈｉ０２Ｆｂ４（）ａｅｉｓｃａｓ
・１３・３
ｐＧＰＮ－ＣＥＦ —２ＥＭ１重组质粒的构建及其在人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７２一１中的表达７
生物学功能提供依据。
１材料与方法
Ｂｍ及保护性碱基，ａＨＩ并保持ＥＭ１阅读框正确；Ｃ所有引物由上海生工生物技术有限公司合成。扩增

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC_7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

Modern Practical Medicine,July2012,Vol.24,No.7・740・扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究刘帆【摘要】目的探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用。

方法MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响；Elisa法测定肿瘤坏死因子（TNF-g/ml、50生成均有明显的促进作用，对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用，并随浓度和时间（24～72h）的增加凋亡率增加，活细胞减少；扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用，浓度越大上调越明显。

扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用，其中高剂量组与模型组差异有统计学意义（生成有关，并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关。

【关键词】扶正消瘤汤；细胞凋亡；肿瘤坏死因子；bax；bcl-2doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2012.07.009【中图分类号】R285.5；R735.7【文献标志码】A【文章编号】1671-0800(2012)07-0740-03Experimental research of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inducting apoptosis of humanhepatoma SMMC-7721cells【Abstract】Objective To investigate the effect of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inductingapoptosis of human hepatoma SMMC-7721cells.Methods The influence of Fuzheng xiaoliu decoction on the pro-liferation of human hepatoma SMMC-7721cells was determined by MTT assay.TNF-g/ml and50(TNF-现代实用医学2012年7月第24卷第7期・741・1.1细胞人肝癌细胞SMMC-7721购自北京协和医学院细胞资源中心。

三氧化二砷诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及对OPN表达的影响

ｏｕｎｈｐｔｃｌ］ｒｃｒｉｏ．ＭｅｈｄＴｅｈｍａｅａｏｅｌｌｒｃｒｉｏｅｌｌｅＳｆｈｍａｅａｏｅｌａａｃｎｍａｕｔｏｓｈｕｎｈｐｔｃｌａａｃｎｍａｃｌｉＭＭＣ７２ｒｕｔｒｄｕｎ－７１ｗｅｅｃｌｅｕ
将一定浓度梯度的Ａ。与人ｓ０
肝癌细胞株ＳＭＣ７２孵育后，Ｍ－７１采用Ｍｒ法、ｒｒ荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡变化，转录聚合酶逆链反应（ＴＰＲ）Ｒ．Ｃ检测肝癌细胞株中骨桥蛋白基因（ＰＮ表达水平。结果Ａ，ＯＮｍＲＡ）ｓＯ作用后ＳＭＭＣ７２－７１细胞生长明显受抑，且呈时间一浓度依赖性；荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变；在流式细胞仪上可见 “ 凋亡峰 ” 细胞周期阻滞于Ｇ／，Ｍ期；细胞ＯＮｍＮＰＲＡ表达阳性，ＰＲＯＮｍＮＡ表达水平明显下调。结论有效抑制肝癌细胞株生长；其机制可能为诱导细胞凋亡、调ＯＮｍＲＡ表达。下ＰＮ［关键词］三氧化二砷；肝癌细胞，凋亡；骨桥蛋白；肿瘤转移Ａ，体外能ｓＯ
ｃｒｉｏａＳＭＭＣ－７ｅＩａｃｎｍ７２１ｃｌ
ＺＵＹｈ，ＵＪ — ｅ，ＨＯａＹｉｗｉａ
Ｈｎ－ｉ，，ｏｇｘａｌ
－ａｊｎｉ
（ａｔｇＵｉｒｔ，ａｔｎ２０１ＰＲＣｉａ１ＮｎｎｎｖｓｙＮｎｏｇ２６０，．．ｈｎ）ｏｅｉ

苦参碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

宁夏医学院附属医院，宁夏银川７００）５０４摘要：目的研究不同浓度的苦参碱对人肝癌ＳＭＭＣ７２一７１细胞诱导凋亡的作用。方法将不同浓度的苦参碱作用于培
号：０４３１四氮噻唑蓝（２０００；ＭＴＴ）美国Ｓｇ：ｉｍａ公司
物浓度的增加及作用时间的延长而加强（＜０Ｏ１。光学Ｐ．０）
２１实验分组．
实验组分加药组和对照组两组，加
药组分别加入苦参碱浓度为２０，．２６０．１４０，．４和８０．５ｍｍｏ・，浓度设８个复孔，照组加等量的培ｌＬ每对养基，混匀后放人５Ｃ养箱中培养。Ｏ培２２四氮噻唑蓝（．ＭＴＴ）比色法取４个９６孔培养板，对数生长期Ｓ取ＭＭＣ７２细胞，一７１每板１５孔Ａ一Ｈ中，每孔加入１０Ｌ细胞悬液，０培养２，４ｈ待细胞贴壁后，行换液和药物处理，上清液，入１０进弃加０肚．１４０，．４和８０Ｌ２０，．２６０．５ｍｍｏ・参碱，照ｌＬ苦对组加入１０肛０Ｌ的培养液，混匀。３ ℃ 、Ｈ７２置５７ｐ．Ｃ培养箱中培养。分别培养２，８７Ｏｚ４４，２和９（６ｈ每个时间段用一个９６孔培养板）培养到预定时间时，，弃上清液，各孔中加入５ｇ・Ｌ在ＭＴＴ３Ｌ，０肛继续

原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的作用

ｏｕａｅａｏｅｌｌｎＭＭＣ－２１ＭｅｈｏＨｕｍａｐａｏｅｌｌＭＭＣ－７ｆｌｇｒｔｍｅｅａｅｏｆｈｍｎｈｐｔｍａｃｌｉｅＳ７７．ｔｄｓｎｈｅｔｍａｃｌｉＳｎｅ７２１ｏｏａｈｖｇｔｌｐｒｄ，ｉｉ
ｗｒｕｔｅｉｉｅｅｔｅｓｙｏＡ（０４，０ｍ／）ｆ４ｈｕｓｈｕｐｅｓｎｒｅｏｌｐｏｉｒｉｎｗｓｅｅｃｌｒｄｗｔｄｒｎｄｎｉｆｕｈｆｔＰ２，０６ｇＬｏ２ｏｒ，ｔｓｐｒｉａｆｅｒｆａｏａｒｅｓｏｔｃｌｌｅｔ
ｍｅｓｅｙＭＴｒａｓｙｎｐｐｏｉｓｄｔｃｅｙｆｗｃｔｍｅｒ．ｅｓｉａｈｇｏｐｗｅｅｉｖｓｉａｅｉａｕｄｂｒｓａ，ａｄａｏｔｓｓｗａｅｅｔｄｂｏｙｏｔＣＵｎｅｃｒｕｒｎｅｔｔｄｗｔＭＤＡ，ｌｙｇｈ
关键词：，癌肝细胞；原花青索；增殖：细胞凋亡
中图分类号：７５７Ｒ３．文０４－０－３１０－６Ｘ２１）９０４００
ＥｅｔｆｐｏｙｎｄｎｏｒｌｒｔｎａｄａｏｔｓｓｏｕｎｈｐｔｍａｃｌｌｅＳＭＣ－７ｆｃｓｏｒｃａｉｉｎｐｏｉａｉｎｐｐｏｉｆｈｍａｅａｏｆｅｏｅｌｉＭｎ７２１
ＢｔｔｅｓｐｒｓｏａｎｅｐｐｏｃｒｅｌａｄｗｔｔｃｅｓｇＰｏｃｍｔｔｎＰ＜．５．Ｃｎｒｔｏｏ — ｏｈｈｕｐｅｓｎｒｅｄｔｏｔｉａｅｔｉｅｉｒａｉＡｅｎｅｒｉ（００）ｏｔｓｔｃｎｉｔａｈａｔｔｅｖｅｈｈｎｎａｏａ

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

ｔｅｐｏｉｒｉｎｏｕｎｈｐｔｍａＳｈｒｌｅａｏｆｈｍａｅａｏＭＭＣ一７１ｃｌｓｄｔｒｎｄｂＴｓｙＴｆｔ７２ｅｌｗａｅｅｍｉｅｙＭＴａａ．ＮＦａｐｏｕｔｎＷａｅｓｓ－ｒｄｃｉｓｄ — ｏｔｒｎｄｂｌａＴｅｉｆｅｃｆｕｈｎｉｏｉｅｏｔｎｏｐｐｏｉｕａｅａｏＭＭＣ７２ｅｌｅｍｉｅｙＥｉ．ｈｌｎｅｏＦｚｅｇｘａｌｄｃｃｉｎａｏｔｓｓｉｈｓｎｕｕｏｎｍｎｈｐｔｍａＳ一７１ｃｌｓ
Ｔｅｒｓｌｈｗｅ０ｔ／ｄ５ｇｍｌｏｅｒｕｓｏｌｉｎｆａｔｈｂｔｅｏｈｏｈｍａｅａｏｈｕｔｓｏｄ１０￣ｍｌｅｓｇｎａ０ｇ／ｓｏｐｕｄｓｇｉｃｎｌｉｉｉｔｗｔｆｕｎｈｐｔｍａｄｇｃｉｙｎｇｈｒ
【键词】扶正消瘤汤；胞凋亡；瘤坏死因子；ａ；ｃ一关细肿ｂｘｂｌ２ｄｉ０９９．ｓ．６１００．１．７０ｏ：．６￣ｉｎ１７－８０２２０．９１３ｓ００
扶正消瘤汤对肿瘤的治疗作用
的机制可能与促进ＴＦⅡ Ｎ．生成有关，并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控ｂｘｂ１表达有关。ａ、ｃ２．
瘤汤１０ｍｌ５ｍｌ０、０剂量组在１８２～４ｈ对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７２．７１的生长有明显的抑制作用，４～２

文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

１材料与方法
１２２第一向等电聚焦胶电泳（Ｅ）．．ＩＦ自制胶条采用ｐ范围在３～１Ｈ０和５～８的两性
收稿日期：０８０ —５２０－８１
基金项目：门市科技计划项目（５２２０３２）厦门市卫生局厦３０Ｚ０６０１，资助项目（Ｋ６２和厦门大学科技创新工程基金ＷＳ００）（ＤＫＣ２０３０）ＸＪＸ０４０１资助
贺量，范成成康劲翮张剑，，，冷波石艳，，李文岗，陈清西ｈ
（．门大学生命科学学院，１厦教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室，福建厦门３１０；６０５
２福建医科大学附属厦门第一医院，．福建厦门３１０）６０４
料
肝癌细胞株ＳＭＭＣ７２－７１购自上海细胞所细胞
抑制效应，肝癌细胞Ｓ如ＭＭＣ－２，７１胃癌细胞Ｂ一７ＧＣ８３黑色素瘤细胞等．实验室已报道过文蛤抗癌多２，本
肽对胃癌细胞ＢＣ－２Ｇ８３的抑制效应ｕ．抗癌多肽对肝Ｊ
引起了肝癌细胞的凋亡，一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础．为进
关键词：；白质组；肝癌蛋质谱
中图分类号：１Ｑ５６
文献标识码：Ａ
文章编号：３－７（０８￥－８－０８４９２０）２０３４４０００
文蛤肉质鲜美，营养丰富，且有极高的药用价值．据报道文蛤具有清热利湿、化痰、散结的功效，癌、对肝肺癌、胃癌、甲状腺肿等也有明显的抑制作用．文蛤抗

肝癌细胞系

肝癌细胞系
人肝癌细胞：HepG2细胞形态为上皮细胞样，模式染色体数为55；Hep G2细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤。

人肝癌细胞：SMMC-7721 免疫缺陷小鼠体内可成瘤。

人肝癌细胞：Hep3b
人低转移肝癌细胞MHCC97-L (MHCC97L)，成瘤。

人肝癌细胞，SK-HEP-1，成瘤。

在裸鼠形成与肝癌一致的大细胞，SK-HEP-1系已被鉴定为来源于内皮细胞。

人肝癌细胞，GS-HepG2，该细胞是转染的HEPG2细胞，可过表达谷氨酰胺合成酶。

没有成瘤记录。

人肝癌亚力山大细胞PLC/PRF/5主要做表面分泌抗原研究，成瘤方面没有记载。

小鼠肝癌细胞Hepa1-6
人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810
小鼠肝癌瘤株H22
人肝癌细胞HHCC
人肝癌细胞PLC/PRF/5
人肝癌细胞HB611
人肝癌细胞BEL-7402
人肝癌细胞QGY-7701
人肝癌细胞QGY-7703
人肝癌细胞BEL-7404
人肝癌细胞BEL-7405
人高转移肝癌细胞HCCLM3
人肝癌细胞Hep 3B2.1-7
人肝癌细胞SMMC-7721
人肝癌细胞Homo Spaniens cell line Hep B1.2
抗人肝癌单抗HAb18杂交瘤细胞HAb18
抗人肝癌单抗F11杂交瘤细胞+F11。