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Modern Practical Medicine,July2012,Vol.24,No.7・740・扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究刘帆【摘要】目的探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用。
方法MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响；Elisa法测定肿瘤坏死因子（TNF-g/ml、50生成均有明显的促进作用，对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用，并随浓度和时间（24～72h）的增加凋亡率增加，活细胞减少；扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用，浓度越大上调越明显。
扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用，其中高剂量组与模型组差异有统计学意义（生成有关，并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关。
【关键词】扶正消瘤汤；细胞凋亡；肿瘤坏死因子；bax；bcl-2doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2012.07.009【中图分类号】R285.5；R735.7【文献标志码】A【文章编号】1671-0800(2012)07-0740-03Experimental research of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inducting apoptosis of humanhepatoma SMMC-7721cells【Abstract】Objective To investigate the effect of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inductingapoptosis of human hepatoma SMMC-7721cells.Methods The influence of Fuzheng xiaoliu decoction on the pro-liferation of human hepatoma SMMC-7721cells was determined by MTT assay.TNF-g/ml and50(TNF-现代实用医学2012年7月第24卷第7期・741・1.1细胞人肝癌细胞SMMC-7721购自北京协和医学院细胞资源中心。
肝癌细胞系
人肝癌细胞：HepG2细胞形态为上皮细胞样，模式染色体数为55；Hep G2细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤。
人肝癌细胞：SMMC-7721 免疫缺陷小鼠体内可成瘤。
人肝癌细胞：Hep3b
人低转移肝癌细胞MHCC97-L (MHCC97L)，成瘤。
人肝癌细胞，SK-HEP-1，成瘤。
在裸鼠形成与肝癌一致的大细胞，SK-HEP-1系已被鉴定为来源于内皮细胞。
人肝癌细胞，GS-HepG2，该细胞是转染的HEPG2细胞，可过表达谷氨酰胺合成酶。
没有成瘤记录。
人肝癌亚力山大细胞PLC/PRF/5主要做表面分泌抗原研究，成瘤方面没有记载。
小鼠肝癌细胞Hepa1-6
人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810
小鼠肝癌瘤株H22
人肝癌细胞HHCC
人肝癌细胞PLC/PRF/5
人肝癌细胞HB611
人肝癌细胞BEL-7402
人肝癌细胞QGY-7701
人肝癌细胞QGY-7703
人肝癌细胞BEL-7404
人肝癌细胞BEL-7405
人高转移肝癌细胞HCCLM3
人肝癌细胞Hep 3B2.1-7
人肝癌细胞SMMC-7721
人肝癌细胞Homo Spaniens cell line Hep B1.2
抗人肝癌单抗HAb18杂交瘤细胞HAb18
抗人肝癌单抗F11杂交瘤细胞+F11。
人体肝癌细胞系SMMC-7721非显带技术下的核型分析范宁;高磊;汪艳;米亚静;景晓红【摘要】Objective To analyze karyotype of human hepatoma cell lines SMMC-7721 using non-banding technique. Methods SMMC-7721 cells were cultured in vitro, followed by cell synchronization with colchicine, hy-potonic treatment and Giemsa staining, and then non-banding karyotype was analyzed. Results The majority number of karyotypes of SMMC-7721 cell lines was 60 to 70. Peaks occurred mainly in the E group, and the majority of E, F, G groups were more than half of the total number of chromosomes or even more than 60%(25/128). For the structure of chromosomes, dicentric chromosome, chromosome sharing three centromeres and ring chromosome could be found in a few cells. Conclusion The analysis of the abnormal chromosome will help us to deeply understand transforma-tion and deterioration of liver cells, which provides the genetic basis for preliminary clinical diagnosis and treatment.%目的应用非显带技术,分析人体肝癌细胞系SMMC-7721的染色体核型.方法体外培养SMMC-7721细胞,通过秋水仙素使细胞同步化,低渗、滴片、吉姆萨染色,进行非显带染色体核型分析.结果数目方面,SMMC-7721细胞系核型的众数为60~70条,峰值主要出现在E组,通过分析染色体数目在50~70个之间的较清晰的25个核型发现,E、F、G组染色体总数大多过半甚至超过60%;结构方面,分辨出双着丝粒染色体、含有3个着丝粒的染色体和环状染色体.结论上述染色体的数目异常与结构畸变,对认识肝细胞的转化、恶变以及临床的初步诊治提供了细胞遗传学基础.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2015(026)020【总页数】3页(P2967-2969)【关键词】SMMC-7721;非显带;核型分析;超二倍体【作者】范宁;高磊;汪艳;米亚静;景晓红【作者单位】西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室,陕西西安 710021;西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室,陕西西安 710021【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝癌是一种危害性较大的恶性肿瘤，过去对肝癌的研究，多采用由致癌剂诱发的肝癌动物模型，但这种动物的肝癌模型毕竟和人体肝癌的生物学特性存在着相当大的差异[1]。
一、实验背景肝癌，作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国居高不下。
近年来，随着生物技术和分子生物学研究的不断深入，肝癌的发病机制和治疗策略得到了新的认识。
本实验旨在通过体外细胞培养和分子生物学技术，研究肝癌的发生、发展及治疗策略，为临床肝癌的诊断和治疗提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料- 人肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721）- 人正常肝细胞系（LO2）- 胶原酶、胰蛋白酶- DMEM培养基、胎牛血清- 实验试剂：RNA提取试剂盒、PCR试剂盒、Western blot试剂等- 仪器：细胞培养箱、荧光显微镜、PCR仪、凝胶成像系统等2. 实验方法（1）细胞培养将人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721以及人正常肝细胞系LO2分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
每隔2天更换一次培养基。
（2）细胞增殖实验采用CCK-8法检测细胞增殖情况。
将细胞以1×10^4个/孔的密度接种于96孔板，每组设6个复孔。
培养24小时后，每孔加入10μl CCK-8试剂，继续培养4小时。
用酶标仪测定各孔的吸光度（OD）值。
（3）RNA提取及PCR检测采用RNA提取试剂盒提取细胞总RNA，利用PCR技术检测目的基因的表达。
以β-actin为内参基因。
（4）Western blot检测提取细胞蛋白，进行SDS-PAGE电泳，转膜，封闭，一抗孵育，二抗孵育，ECL显影。
三、实验结果1. 细胞增殖实验与正常肝细胞系LO2相比，肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖速度明显加快（P<0.05）。
2. PCR检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌基因（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌基因（如p53、PTEN等）的表达显著下调。
3. Western blot检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌蛋白（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌蛋白（如p53、PTEN等）的表达显著下调。
实验常用人肝癌细胞株怎么选？肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年来发病率急剧上升的恶性肿瘤之一。
肝癌细胞系广泛应用于各类肝癌的研究。
肝癌细胞系的基因组与健康人细胞系的基因组不同。
常见的人肝癌细胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一种细胞系都有自己的特点，但是，SMMC-7721,MHCC97-H、MHCC9-L等被证实污染后，已经退出实验舞台，由于它们具有与原代肝癌细胞相似的生物学特性，无生物学改变、特性稳定、无限制传代，为肝癌研究提供了理想的体外模型，成为除动物实验外肝癌疾病研究的又一热门替代物。
以下是小编整理的实验室常用人肝癌细胞株，如果您正在为选择哪一款肝癌细胞而困惑的话，此文兴许会对您有帮助。
1. HepG2 人肝癌细胞HepG2细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。
该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。
目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。
HepG2细胞系基因组和表观基因组相关文献的结果统计显示，HepG2肝癌细胞系的基因组序列创造出更高的基因组特征。
充分整合了包括CN、SNPs、SNV等在内的HepG2细胞系的全基因组特征和基因序列，为其他类似细胞系的全基因组鉴定奠定了基础。
朱利安娜等人发现β-肌酸对人白细胞的杀伤作用比人肝癌细胞更为明显。
单萜类化合物的肝毒性高于HepG2/C3A细胞，优于白细胞。
体内研究表明β-肌力相关的致癌和致畸效应需要进一步的实验证实,Arunraj等人发现，复合纳米凝胶对HepG2细胞系具有细胞毒性，Dox几丁质PLA CNG系统可能是一种有前途的肝癌抗癌药物传递系统。
γ射线对人肝癌细胞SMMC7721和HepG2灭活效果的研究目的:肝细胞肝癌在肿瘤导致死亡的疾病中排名世界第三,特别是在发展中国家,发病率还呈上升的趋势。
手术治疗是根治肝癌的最有效的手段,但是仅有10%-30%的患者在诊断出肝癌时有手术指征。
肝癌患者进行肝切除术或者肝移植手术时常常会伴随着大量失血,往往需要输血,异体输血存在着很多弊端,比如不良输血反应,免疫抑制以及疾病传播等,而特别是对于肿瘤患者来讲,可能还会引起肿瘤的复发,因此推荐肝癌患者进行自体输血。
但是肝癌患者自体输血一直以来又存在着争议,有学者担心血中可能存在的肝癌细胞有可能会引起肿瘤的血行转移。
故本实验通过研究γ射线对人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响,来探究γ射线对肝癌患者的自体血液中残留的肿瘤细胞的灭活效果,寻找合适的辐照剂量,为肝癌患者的自体输血的安全应用提供依据。
方法:1)人肝癌细胞株SMMC7721和HepG2的体外培养。
2)用不同剂量的γ射线处理HCC(Hepatoma carcinoma cell)后,用CCK8(cell counting kit-8)实验检测细胞的增殖能力,吸光度值的大小可以反应活细胞的相对数量;划痕实验检测细胞的迁移能力,细胞移动的距离可以代表迁移能力;Transwell实验以及MPP-9蛋白表达量检测来反应细胞的侵袭能力,穿过的细胞越多,MMP-9蛋白的表达越多,细胞的侵袭能力越强;annexin V/PI染色(流式细胞术)和P53凋亡蛋白的表达量测定来检测细胞的凋亡情况。
3)用SPSS17.0软件统计分析实验结果,P<0.05表示差异有统计学意义。
结果:1)γ射线处理细胞后,细胞失去了正常形态,出现了细胞变形,漂浮,细胞膜不完整,胞质内有空泡,细胞碎裂等一系列变化;2)γ射线处理后24h,48h,72h,细胞的增殖能力都明显受到抑制,细胞活力跟培养时间和γ射线剂量成反比,随着培养时间和剂量增加,细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.01);3)γ射线对细胞的迁移能力有抑制作用,24h划痕实验结果显示,随着剂量增加,细胞迁移的距离减小,差异有统计学意义(P<0.01);4)γ射线对细胞的侵袭能力有抑制作用,随着剂量增加,穿过小室的细胞数量逐渐减小,差异具有统计学意义(P<0.01);Western Blot法结果显示,辐照后,MPP-9蛋白的表达量降低(P<0.01);5)γ射线会抑制细胞的克隆形成,20Gy开始,细胞没有克隆形成。
