水体卫生细菌学检验.

水质大肠杆菌检测标准
根据国家标准《自来水卫生标准》（GB 5749-2006），以下是关于水质大肠杆菌检测的标准：
1. 生活饮用水中每升水样不得检出大肠杆菌。

矿泉水、天然矿泉水、纯净水、瓶装饮用水、桶装饮用水等也适用此标准。

2. 饮用水中若发生大肠杆菌超标，应采取相应措施，进行处理和消毒后方可使用。

3. 大肠杆菌是评价饮用水卫生指标的重要细菌指标之一，它的检测结果能够反映水样是否受到了粪便污染。

4. 大肠杆菌的检测方法通常采用培养方法，通过培养样品中的大肠杆菌并观察生长情况来判断水样是否存在细菌。

5. 大肠杆菌的检测应严格遵循操作规程，确保结果的准确性和可靠性。

除了以上国家标准，不同地区和国家可能有不同的水质大肠杆菌检测标准，具体的标准应根据当地的相关法规和标准来执行。

水中细菌总数的检测1. 实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2. 菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3. 培养基与试剂2.1营养琼脂成分2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后,加热溶解，调整pH为7.4~7.6, 分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。

），经103.43 kPa（ 121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4. 仪器和材料仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。

材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

5. 样品采集自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。

纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。

地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

6. 检验步骤生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样, 注入火菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45 C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。

河水泥水中细菌的检查实验报告
实验目的：
通过对河水和泥水中细菌的检查，了解水体的卫生状况，为水质监测提供参考依据。

实验原理：
采用培养基平板计数法，将水样分别接种在含有营养物质的培养基上，利用细菌的生长繁殖特性，通过计数细菌的数量来评估水质的卫生状况。

实验步骤：
1.准备培养基：将营养琼脂培养基加热至液态状态，倒入培养皿中，待凝固后备用。

2.采集水样：在河水和泥水中分别采集适量的水样，避免污染。

3.接种培养基：用无菌的铂丝或吸管，将水样分别接种在培养基上，用铂丝在培养基表面划线，以便于计数。

4.培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，以适宜的温度和湿度进行培养。

5.计数：在培养好的细菌菌落中，用计数板或显微镜进行计数，得出细菌数量。

实验结果：
经过培养和计数，河水中细菌数量为100 CFU/mL，泥水中细菌数量为1000 CFU/mL。

实验结论：
河水和泥水中细菌数量均超过了国家卫生标准规定的限值，说明水质存在一定的卫生问题，需要加强水质监测和治理。

实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。

二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。

3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。

由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。

由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。

如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。

大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。

检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。

它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。

取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。

取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。

注意手指不得触及瓶口内部。

在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。

如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。

2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。

3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。

水质细菌总数的测定
x
《水质细菌总数的测定》
一、实验目的
通过测定水质中的细菌总数，对水质进行评价和分析；
二、实验原理
细菌总数的测定，采用兰伯特液体培养基（LB），利用LB培养基对不同浓度的水样进行营养相关发酵，在给定的温度条件下培养，待发酵后有生长的细菌菌落可用视觉检验出来，经计数即可确定样中细菌含量，从而得出水质中的细菌总数。

三、实验材料(耗材)
蒸馏水
LB培养基
紫外灯
比色皿
小瓶或蒸馏瓶
四、实验步骤
1. 将水样放入小瓶或蒸馏瓶中，用蒸馏水稀释至不同浓度水样；
2. 将LB培养基加入瓶中，搅拌均匀，使水样充分接触培养基；
3. 置于 37℃恒温箱培养，一般24-48小时即可；
4. 放至紫外灯下观察，可见菌落发生；
5. 细菌总数的测定采用比色皿法，有效的细菌数量=累加比色皿
中计数的细菌数量；
6. 对培养液中的细菌进行形态学观察，检验其计数是否准确。

五、安全注意事项
1. 本实验中使用的蒸馏水、LB培养基均为无毒无害，但建议在实验中注意安全防护；
2. 加热时要特别注意，避免出现烫伤；
3. 在使用紫外灯时，要注意身体保护，不要让紫外线直射眼睛；
4. 加热时应离火源远一些，防止烫伤；
5. 使用比色皿必须放置到无菌区进行操作，以防菌落受到外界污染；
6. 实验过程中，使用的器具要清洁，以防影响实验结果。

水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。

然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。

其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。

高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。

因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。

以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。

该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。

这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。

2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。

该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。

通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。

这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。

3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。

该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。

最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。

PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。

同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。

4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。

水环境污染细菌检验细菌能在各种不同的自然环境中生长。

地表水、地下水，甚至雨水和雪水都含有多种细菌。

当水体受到人畜粪便、生活污水或某些工农业废水污染时，细菌大量增强。

因此，水的细菌学检验，特殊是肠道细菌的检验，在卫生学上具有重要的意义。

但是，挺直检验水中各种病原菌，办法较复杂，有的难度大，且结果也不能保证肯定平安。

所以，在实际工作中，常常以检验细菌总数，特殊是检验作为粪便污染的指示细菌，如总、粪大肠菌群、粪链球菌、肠道病毒等，来间接推断水的卫生学质量。

1．水样采集采集细菌学检验用水样，必需严格根据无菌操作要求举行；防止在运送过程中被污染，并应快速举行检验。

普通从采样到检验不宜超过2h；在10℃以下冷藏保存不得超过6 h。

采集江、河、湖、库等水样，可将采样瓶沉入水面下10～15cm处，瓶口朝水流上游方向，使水样灌入瓶内。

需要采集一定深度的水样时，用采水器采集。

采集自来水样，首先用酒精灯灼烧水龙头灭菌或用体积分数为70％的酒精消毒，然后放水3 min，再采集约为采样瓶容积的80％左右的水量。

2．细菌总数的测定细菌总数是指1 mL水样在养分琼脂培养基中，于37℃经24 h培养后，所生长的细菌菌落(CFU)的总数，它是推断饮用水、水源水、地表水等污染程度的标记。

我国《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)中规定，每毫升生活饮用水中细菌总数不得超过100个。

其主要测定程序如下： (1)对所用器皿、培养基等根据办法要求举行灭菌。

(2)以无菌操作办法用1 mL灭菌吸管吸取混合匀称的水样(或稀释水样)注入灭菌平皿中，倾注约15mL已熔化并冷却到45℃左右的养分琼脂培养基，并旋摇平皿使其混合匀称。

每个水样应做两份，还应另用一个平皿只倾注养分琼脂培养基作空白对比。

待养分琼脂培养基冷却凝固后，翻转平皿，置于37℃恒温箱内培养24 h，然后举行菌落计数。

(3)用肉眼或借助放大镜观看，对平皿中的菌落举行计数，求出1 mL水样中的平均菌落数。

水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。

），经103.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4.仪器和材料4.1仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。

4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。

5.2纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。

5.3地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

水中细菌总数的检测之吉白夕凡创作一、二、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性.二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中, 于37℃经24h培养后, 所生长的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染水平的主要卫生指标.我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染, 但不能说明污染的来源.因此必需结合总年夜肠菌群数来判断水污染的来源和平安水平.本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数.由于水中细菌种类繁多, 它们对营养和其他生长条件的要求分歧很年夜, 不成能找到一种培养基在一种条件下, 使水中所有的细菌均能生长繁殖, 因此, 以一定的培养基平板上生长出来的菌落, 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.目前一般是采纳普通牛肉膏卵白胨琼脂培养基.平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数.此法经常使用于某些制品和生物制品检定以及食品、水源的污染水平的检定等.缺点：手续较繁, 而且测定值常受各种因素的影响.生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤ 3个年夜肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和资料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间.2、消鸩酒精、消毒水.3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处置好备用）4、培养基卵白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备方法：依照实际的需要量, 按上述配方称取各成份混合后, 加热溶解, 调整pH为, , 分装于玻璃容器中, 用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min, 倒制成平板后贮存于冷处备用.5、水样：自来水、中水.四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上）, 每小组2-4个平板.（二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭, 再用酒精灯火焰灭菌, 翻开龙头放水1-2分钟, 用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2、纯洁水取样：用消鸩酒精棉擦拭纯水机出口后, 先放走部份水, 再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样, 先将灭菌的带玻璃塞瓶, 瓶口向下浸入水中, 然后翻转过来,除去玻璃塞, 水即流入瓶中, 盛满后, 将瓶塞盖好, 再从水中取出, 最好立即检查, 否则需放入冰箱中保管.（三）、接种培养：（要求无菌把持）用无菌吸管吸取1毫升水样, 加入平板中（每个水样平行做两个平板）, 用无菌涂布器涂抹均匀, 在培养皿正面标注清楚后, 置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后, 统计细菌菌落的总数.（四）、菌落记数：菌落计数及陈说方法作平皿菌落计数时, 可用眼睛直接观察, 需要时用放年夜镜检查以防遗漏.在记下各平皿的菌落数后, 应求出同稀释度的平均菌落数, 供下一步计算时应用.在求同稀释度的平均数时, 若其中一个平皿有较年夜片状菌落发生时, 则不宜采纳, 而应以无片状菌落发生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半, 而其余一半中菌落数分布又很均匀, 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五、实验注意事项六、实验陈说内容；1、记录实验方法和步伐.2、列表说明检测结果.（1）自来水（2）饮用水3、思考题：（1）从自来水的细菌总数结果来看, 是否合乎饮用水的标准？（2）你所测的水样污秽水平。

实验二水质的细菌学检测1水中细菌总数的检测H的和原理水屮细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。

山于重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。

本试验采用标准平皿法対水样中细菌作计数,这是一•种测定水中好氧的和兼性厌氧的界养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在, 此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样屮所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样屮真正存在的活细菌的数目。

细期总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中，37C、24小吋培养后所生长的菌落数。

一•般规定，1毫升口来水中总菌数不得超过100个。

材料和器皿（1）培养基①营养琼脂培养基②2216E培养基：蛋白腺5.0克酵母膏1.0克FeP04 0. 01 克琼脂1&0克陈海水1000毫升pH 7. 6〜7. 8（2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养I1IL,盛有90ml及9mL灭菌蒸懈水的锥形瓶和试管。

方法和步骤（1）采集水样。

（2）吸取10ml水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三角瓶屮，混匀成10-1稀禅液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。

（3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2. 10-3. 10-4o（4）根据水样的洁净程度，污染严重者选KX 10-2. 10-3. 10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿lmlo稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30?/F0NT>300个之间。

（5）注入彻底融化，然后冷却到45°C的营养琼脂培养基（用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样）约1亦1,立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化。

水中细菌总数的检测一、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。

我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。

因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。

本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和材料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。

2、消毒酒精、消毒水。

3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）4、培养基蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸馏水1000ml 制备方法：按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。

5、水样：自来水、中水。

四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。

（二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。