2 基因组DNA的提取与分离

实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。

三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。

2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。

3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。

4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。

5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。

6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。

7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。

8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。

（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。

210.-20°C的冰箱保存。

基因组dna提取实验报告基因组 DNA 提取实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取高质量的基因组DNA，以便进行后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。

通过本次实验，掌握基因组 DNA 提取的基本原理和操作方法，了解影响 DNA 提取质量的因素，并对提取的 DNA 进行质量检测和分析。

二、实验原理基因组DNA 提取的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜，使细胞内的物质释放出来，然后通过蛋白酶 K 消化蛋白质，去除 RNA 等杂质，再利用酚/氯仿等有机溶剂抽提，将蛋白质、多糖等杂质去除，最后通过乙醇沉淀或异丙醇沉淀得到纯净的基因组 DNA。

三、实验材料与试剂（一）实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）2、植物叶片3、细菌培养物（二）实验试剂1、细胞裂解液（含 TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS 等）2、蛋白酶 K3、酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）4、无水乙醇5、 70%乙醇6、 RNA 酶 A7、 3M 醋酸钠（pH 52）8、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、紫外分光光度计5、电泳仪及电泳槽四、实验步骤（一）动物组织基因组 DNA 提取1、取约 01g 新鲜的动物组织，放入 15ml 离心管中，加入 1ml 细胞裂解液，用剪刀将组织剪碎，然后在冰上放置 10min。

2、向离心管中加入20μl 蛋白酶 K（20mg/ml），充分混匀，在 55℃水浴锅中孵育过夜，直至组织完全消化。

3、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管10min，使溶液充分混匀。

4、 12000rpm 离心 10min，将上清液转移到新的离心管中。

5、重复步骤 3 和 4 一次。

6、向上清液中加入 1/10 体积的 3M 醋酸钠（pH 52）和 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。

基因分离的主要方法与步骤
基因分离的主要方法与步骤如下：
1. 细胞破碎：将含有DNA的细胞完全破碎，可以通过物理方法（如超声波破碎、冻融法）或化学方法（如洗涤法、高渗溶解法）实现。

2. DNA的分离：DNA被大量的细胞组分包围，这些组分需要被去除以将DNA纯化。

一个常见的DNA分离方法是酚/氯仿抽提法。

先用酚和氯仿的混合液沉淀蛋白质和其他杂质物质，然后通过离心去除上清液中的DNA。

3. 脱盐：提取出的DNA通常含有大量的盐类，需要通过脱盐处理来除去这些盐类，否则这些盐类可能会影响下一步操作，如PCR扩增。

4. 纯化：DNA提取后需要进行纯化以消除污染和杂质。

可以通过醇沉淀（如乙醇、异丙醇），离子交换柱层析、凝胶过滤等方法实现。

5. 基因组DNA的制备：从细胞中获得DNA有各种物理、化学和酶法。

无论所采用的方法或DNA来源如何，所有步骤都经过选择和优化，以获得最大数量、质量和完整性的基因组DNA。

由于DNA是细胞质的一部分，被细胞核和或细胞膜包围，因此在核酸纯化之前，细胞碎片、脂质和蛋白质的消除分为三个重要步骤：细胞膜/细胞壁的破裂、DNA的分离和沉淀，以及最后溶解DNA。

以上是一般的基因分离步骤，实验中具体的步骤和方法则需要根据基因来源和研究目标来选择。

基因组DNA提取的流程
1. 样本选择：选择适合提取基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。

确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。

2. 细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。

可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。

3. DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。

4. 去除杂质：通过离心、过滤或沉淀等方法去除蛋白质、RNA 等杂质。

5. 纯化DNA：使用吸附剂、洗涤剂或沉淀剂等方法去除剩余的杂质，得到纯化的基因组DNA。

6. 检测与定量：通过电泳、荧光光谱等技术检测提取的DNA质量和浓度，确保提取的DNA满足后续实验的要求。

以上是基因组DNA提取的一般流程，具体操作可能会因实验条件、样本类型和目标DNA的不同而有所差异。

实验二CTAB小样法提取植物基因组DNA【原理】CTAB是一种阳离子去污剂，溶于热水、乙醇、三氯甲烷，易溶于异丙醇水溶液，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶，当降低溶液盐浓度到一定程度时，从溶液中沉淀，通过离心可将CTAB-核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。

最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。

植物细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA）称为总DNA。

高等植物的DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。

苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相。

因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

上清液中加入异丙醇或乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得植物总DNA溶液。

【实验器具、药品试剂】水浴锅，研钵，微量移液器，枪头，离心管，台式离心机，液氮，恒温箱，标签纸，紫外分光光度计，磁力搅拌机，剪刀，记号笔等。

2% CTAB抽提缓冲溶液（100 ml 1 M Tris HCl pH 8.0，280 ml 5 M NaCl，40 ml 0.5 M EDTA，20 g of CTAB，定容至1 L），异丙醇, 氯仿-异戊醇（24：1）等。

【实验步骤】(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

(2) 取少量叶片（0.2 g~0.3g）置于研钵中，加入700 μl预热的2%CTAB抽提缓冲液磨至细粉状；(4) 将磨碎液倒入1.5或者2.0 ml的灭菌离心管中；(5) 65℃水浴，每隔10 min轻轻摇动，30-35 min后取出（或更长时间）；（破碎细胞）(6）冷却至室温后，加入等体积氯仿-异戊醇（24：1），充分颠倒混匀3~5 min；（抽提去蛋白）(7) 12 000 rpm离心5 min；(8) 用移液器轻轻地吸取上清夜至2.0ml灭菌离心管，注意不要将乳白色中间层吸走；(9) 重复(6)～（8）两次；其间，将600 μl的异丙醇（预先置于-20℃冰箱中）加入另一批1.5ml 灭菌空离心管中；(10) 在第三次抽提后上清夜转入含有异丙醇的1.5ml离心管内，将离心管轻轻上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合，然后静置于冰上（或者低温冰箱）30分钟或者更长时间（可过夜），一般可见DNA絮状漂浮物；（沉淀核酸）(11) 2 500 rpm离心2 min后，可见白色DNA丸状物附着于管壁底部，倾斜管口倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管斜立于铺开的纸巾上沥去液体；(12) 加入800 μL的70%乙醇，用手指轻弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；(13) 放置20 min或者更长时间，使DNA块状物中的不纯物溶解；(14) 5 000 rpm离心2 min后，倒掉液体；(15) 可重复（12）-（14）步以进一步洗涤DNA；(16) 自然风干或电风扇吹干DNA，过分干燥DNA稍后较难溶解；(17) 加入50~200 μL 1×TE缓冲液，置于4℃直至DNA充分溶解，其间可用手指轻弹管尖以促进DNA溶解（切勿剧烈震荡！！）；(18) 将充分溶解的DNA置于-20℃保存、备用。

基因组dna的提取原理基因组DNA的提取原理。

基因组DNA的提取是生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。

DNA提取的目的是为了进一步的分子生物学研究，如PCR扩增、测序、重组等实验。

下面将介绍基因组DNA提取的原理及步骤。

1. 样本的准备。

在进行基因组DNA提取之前，首先需要准备样本。

样本可以是细胞、组织或血液等。

对于细胞和组织样本，通常需要将其打碎以释放细胞内的DNA。

而对于血液样本，则需要进行红细胞溶解，以获得含有DNA的白细胞。

2. 细胞裂解。

细胞裂解是DNA提取的第一步，其目的是破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的DNA。

通常可以使用裂解酶或裂解缓冲液来实现细胞裂解。

在裂解过程中，可以加入蛋白酶来降解蛋白质，以减少对DNA的污染。

3. 蛋白质沉淀。

裂解后的细胞溶液中可能含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行蛋白质沉淀。

通常可以加入盐和酒精来沉淀蛋白质，然后通过离心将沉淀的蛋白质去除，留下含有DNA的上清液。

4. DNA沉淀。

为了获得纯净的DNA，需要将其从上清液中沉淀出来。

可以通过加入乙醇或异丙醇来沉淀DNA，然后通过离心将沉淀的DNA收集起来。

5. DNA纯化。

最后一步是对沉淀得到的DNA进行纯化。

可以使用乙醚或异丙醇来去除残留的盐和其他杂质，然后用适当的缓冲液溶解DNA，得到纯净的基因组DNA。

通过以上步骤，就可以从生物样本中提取出纯净的基因组DNA。

这些DNA可以用于后续的分子生物学实验，如PCR扩增、基因测序、重组等。

基因组DNA的提取原理并不复杂，但需要严格控制实验条件，以确保提取得到的DNA质量和纯度。

人类基因组dna的提取实验报告
人类基因组DNA的提取实验报告
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础性技术之一。

本次实验旨在从人类细胞中提取DNA，并通过多种方法进行检测和分析。

以下是实验的详细过程和结果。

实验材料与方法：
1.材料：人类细胞样本、细胞裂解液、蛋白酶K、异丙醇、氯仿、等渗盐溶液、乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA标准品。

2.方法：
（1）取100μl人类细胞样本，加入细胞裂解液中进行细胞破裂。

（2）加入蛋白酶K使细胞膜和蛋白质降解。

（3）加入异丙醇使DNA沉淀，离心去除上层液体。

（4）加入氯仿和等渗盐溶液，离心分离DNA纯化。

（5）加入乙醇沉淀DNA。

（6）加入TE缓冲液重溶DNA。

（7）用琼脂糖凝胶电泳法分离DNA并检测。

实验结果：
经过琼脂糖凝胶电泳分离，成功提取了人类细胞的DNA样本。

在电泳结果中，能够明显地看到DNA条带的形成，表明DNA的提取和纯化过程都比较成功。

为了进一步检测DNA的纯度和浓度，我们使用了多种方法，如吸光度测定、荧光染料检测等。

实验结果表明，提取出的DNA纯度较高，浓度也较为理想。

结论：
通过本次实验，我们成功地提取了人类细胞的DNA，并对其进行了检测和分析。

这为我们后续的研究提供了重要的基础。

同时，实验还说明了DNA提取技术的重要性和应用广泛性，不仅在分子生物学和遗传学领域有着广泛的应用，也在医学和生物工程等领域具有重要的价值。

细胞基因组DNA提取介绍细胞基因组DNA提取是生物学中一项重要的实验技术，它可以将细胞中的基因组DNA分离出来，为后续的分子生物学研究提供样本。

本文将深入探讨细胞基因组DNA提取的原理、步骤和常见的应用。

原理细胞基因组DNA提取的原理基于细胞膜和核膜的溶解，以及DNA的萃取和纯化。

细胞膜和核膜的溶解可以通过物理方法（如高温、机械打碎）或化学方法（如洗涤剂、蛋白酶）来实现。

细胞膜和核膜的溶解后，可以通过离心等方法将DNA从其他细胞组分中分离出来，再通过酒精沉淀等技术将DNA纯化。

步骤细胞基因组DNA提取一般包括以下步骤：1. 细胞收集与处理•收集待提取细胞，可以是动物组织、植物组织或细菌培养物等。

•将细胞洗涤，去除培养基或组织污染。

2. 细胞破碎与溶解•使用机械方法（如搅拌、超声波）或化学方法（如洗涤剂、蛋白酶）破碎细胞膜和核膜，释放DNA。

•添加缓冲液调节溶液的pH值和离子浓度，有利于DNA的稳定和纯化。

3. DNA纯化•利用酒精沉淀法将DNA从溶液中沉淀出来。

•使用盐溶解沉淀的DNA，去除杂质（如蛋白质、RNA）。

•使用醇提纯获得纯净的DNA。

应用细胞基因组DNA提取在生物学研究中有着广泛的应用。

以下是几个常见的应用领域：1. PCR扩增提取的细胞基因组DNA可以作为PCR扩增的起始物质，用于分析目标基因的序列、基因型或表达水平。

PCR扩增可以通过DNA模板的扩增来获得更多的DNA样本，以进行后续的测序、分型、检测等研究。

2. 基因测序细胞基因组DNA提取后，可以利用测序技术对整个基因组进行测序，以研究基因组的结构、功能和变异等。

基因测序是深入了解生物体基因组信息的关键步骤，对生物学、医学和农业等领域具有重要的意义。

3. 遗传学研究通过细胞基因组DNA提取，可以进行遗传学研究，包括基因突变的检测、遗传多态性的分析和亲缘关系的判断等。

这些研究有助于揭示遗传变异与疾病发生、物种进化和家族谱系等问题之间的关系。