流行性乙型脑炎病毒的电子显微镜研究

年国家开放大学电大《医学免疫学与微生物学》形成性考核答案医学免疫学与微生物学一、填空选择题（共12道试卷，共100分。

）1.(请在填空中输入正确选项“A、B、C、D、E”即可；输入文字作答无效。

)1．正常菌群在机体抵抗力降低时可改变寄居部位转化为____B____) 2．细菌致病性主要取决于细菌的_C____和侵入的数量。

3．痢疾杆菌黏附细胞依靠___A__菌毛。

4.具有传递遗传物质的细菌特殊结构是___D___。

5.携带噬菌体可发生__C___变异。

A.普通菌毛B.条件致病菌C.毒力D.性菌毛2.(请在填空中输入正确选项“A、B、C、D、E”即可；输入文字作答无效。

)1.细胞型微生物包括__C___和病毒。

2.噬菌体是一类侵袭细菌、真菌或其他微生物的____B_____3.质粒中，与耐药性有关的细菌结构是___D____。

4.滥用抗生素可导致__C__发生耐药性变异。

A.真菌B.病毒C.细菌D.R质粒3.(请在填空中输入正确选项“A、B、C、D、E”即可；输入文字作答无效。

)1.包膜病毒体的释放方式主要是______B______2.裸露病毒体的释放方式是______C____3.裸露病毒体即由____A___构成。

4.对脂溶剂敏感的病毒体是____D___病毒体。

A.核衣壳B.出芽C.细胞裂解D.包膜4.(请在填空中输入正确选项“A、B、C、D、E”即可；输入文字作答无效。

)1.细菌特殊构造中，具有抗吞噬作用的是___B____。

2.可黏附细胞的是____A___。

3.G－菌细胞壁组成与内毒素有关的是__C__。

4.G＋菌细胞壁的特有结构是___D____A.菌毛B.荚膜C.脂多糖D.磷壁酸5.(请在填空中输入正确选项“A、B、C、D、E”即可；输入文字作答无效。

)1.细菌的测量单位是__A___。

2.病毒的测量单位是____B。

3.机体抵御病原菌入侵的第一道防线是____C___4.机体抵御病原菌入侵的第二道防线是____D_____。

病毒结构的电子显微镜分析病毒是一种微小而具有高度传染性和致命性的病原体。

对病毒的研究和了解不仅有助于我们更好地认识和防治疾病，还可以为人类迎战病毒威胁提供有力的科学依据。

在病毒研究中，电子显微镜技术是一种非常有效的工具，因其高分辨率和高灵敏度而被广泛应用。

本文将从病毒结构的角度探讨电子显微镜在病毒研究中的应用和意义。

一、病毒结构概述病毒是一种极小的病原体，一般直径在20-300纳米之间。

病毒由蛋白质壳体和核酸组成，有的还有外壳膜。

壳体由一种或多种蛋白质分子组成的对称结构组成，它能保护核酸免受环境中的损坏和降解。

本文重点介绍病毒的壳体结构。

二、电子显微镜技术在病毒研究中的应用电子显微镜是一种高分辨率的显微镜，能够在极高的放大倍数下观察样品的微观结构。

在病毒研究中，电子显微镜技术被广泛应用，特别是在病毒结构的研究中。

病毒壳体结构的解析一般需要结合电子显微镜和其他生物物理学和生物化学手段，如X光衍射、核磁共振、质谱等。

采用电子显微镜技术可以快速获得高分辨率的病毒结构图像，并确定病毒的对称性、壳体構造和大致尺寸，为病毒的功能和机理探讨提供了基础。

三、病毒结构解析的方法与技术电子显微镜图像处理技术是病毒结构解析的关键。

最常见的方法是采用冷冻电镜技术。

在冻结过程中，病毒衍射的信息被保留下来，可以通过桥接多个图像来重建出三维病毒结构。

另一种方法是使用单颗粒电子显微镜技术，它不需要在高真空和强辐射下成像，在明显降低样品的损伤和辐射损伤的同时可以获得高分辨率的图像。

这种方法通常需要更高的数据采集量和更多的计算，但能够在更低基线信噪比下提高图像分辨率和立体视图精度，对于不对称病毒或不规则结构的病毒研究更为适用。

四、病毒结构的进一步研究以及应用前景除了了解病毒的结构，还能够在结构上概括该病毒的分类、感染和传播机制，以及疫苗设计和病毒抵抗性等方面的问题。

最近的一项研究发现了一种新型冠状病毒的结构，这为科学家们了解新型冠状病毒的感染方式和抗病性机制奠定了基础。

医学微生物学期末考试模拟试卷〔来源：**医学院医学微生物教学资源网〕医学微生物学期末考试模拟试卷一一、选择题 (每题1分, 共30分)【A型题】1. 流行性乙型脑炎的传播媒介是A. 三带喙库蚊B. 伊蚊C. 蜱D. 虱E. 蚤2.肝炎病毒中核酸类型属于DNA的是A. HAVB. HBVC. HCVD. HDVE. HEV3.易发生整合感染的病毒是A. 流行性感冒病毒B. 轮状病毒C. 巨细胞病毒D. 鼻病毒E. 冠状病毒4. 可直接测量病毒体大小的方法是A. 光学显微镜观察B. 电子显微镜观察C. *线衍射法D. 超速离心法E. 超过滤法5. 决定病毒体感染细胞的关键物质是A. 刺突B. 衣壳C. 包膜D.核酸E. 核蛋白6. 干扰素的本质是A. 病毒抗原B. 受病毒抗原刺激后产生的抗体C. 病毒基因编码的蛋白D. 抗病毒化学制剂E. 受病毒感染后细胞产生的蛋白质7. 抗病毒中和抗体的作用是A. 激活补体杀伤靶细胞B. 降解病毒核酸C. 病毒失去血凝性D. 病毒失去感染性E. 病毒失去免疫原性8. 内毒素是以下哪种细菌的主要致病物质A. 金黄色葡萄球菌B.肺炎链球菌C.乙型溶血性链球菌D. 淋病奈瑟菌E. 脑膜炎奈瑟菌9. 病毒的致病机制不包括A. 杀细胞性感染B. 整合感染C. 稳定状态感染D. 侵袭感染E.免疫病理作用10. 病毒抗原检测可采用以下哪种方法A. 核酸杂交B. PCRC. ELISAD. 血凝试验E. PFU11. 现已用于临床预防病毒性传染病的人工主动免疫制剂是A. 基因工程疫苗B. 抗独特型疫苗C. DNA疫苗D. 抗病毒血清E. DNA重组疫苗12. 肠道致病菌与非致病菌的初步鉴别试验选用A. 吲哚试验B. 尿素分解试验C. 乳糖发酵试验D. H2S试验E. 胆汁溶菌试验13.异染颗粒是以下哪一种细菌所具有的特性A. 破伤风梭菌B. 布氏杆菌C. 白喉棒状杆菌D. 结核分枝杆菌E. 脑膜炎奈瑟菌14. 以下细菌中属条件致病菌的是A. 金黄色葡萄球菌B. 伤寒沙门菌C. 霍乱弧菌D. 绿脓杆菌〔铜绿假单胞菌〕E. 结核分枝杆菌15. 对于厌氧芽胞杆菌，下述不恰当的描述是A. 属于梭状芽胞杆菌属B. 均为革兰阳性杆菌C. 均通过伤口感染D. 可引起特有的临床病症E. 广泛分布于自然界的土壤中16. 破伤风梭菌的致病机制是A. 破伤风梭菌通过血液侵入中枢神经系统大量增殖致病B. 破伤风梭菌产生内毒素引起休克C. 破伤风痉挛毒素侵入中枢神经系统致病D. 破伤风溶血毒素侵入中枢神经系统致病E. 破伤风梭菌引起败血症17. 使用白喉抗毒素，不恰当的描述是A. 使用前一定要做皮试B. 是人工主动免疫制剂C. 可用于紧急预防D. 可用于治疗E. 用于治疗必须早期足量18. 以下肠道杆菌中具有胞内寄生特点的是A. 大肠杆菌B. 痢疾杆菌C. 伤寒杆菌D. 变形杆菌E. 克雷伯菌19. 致病性葡萄球菌的重要鉴定依据不包括A. 金黄色色素B. 血平板上溶血C. 凝固酶阳性D. 耐热核酸酶阳性E. 发酵菊糖20. 药敏试验和菌种保存多项选择用细菌生长曲线中哪一期的细菌A. 缓慢期B. 对数生长期C. 稳定期D. 衰亡期E. 适应期21. 受体菌通过直接摄取供体菌游离DNA，从而获得新的遗传性状称为A. 转化B. 转导C. 接合D. 溶原性转换E. 原生质体融合22. 破坏物体上热原质的最正确温度和时间是A. 160℃，45minB. 180℃，45minC. 250℃，45minD. 121℃，45minE.200℃，45min23. 紫外线杀菌的最正确波长是A. 100~200nmB. 150~250nmC. 200~300nmD. 265~266nmE. 160~170nm24. 以下属于非细胞型微生物的是A. 细菌B. 放线菌C. 噬菌体D. 立克次体E. 真菌25. 细菌的分解代谢产物是指A. 吲哚B. 抗生素C. 色素D. 维生素E. 毒素26．对外界抵抗力最强的细菌构造A．细胞壁 B．荚膜 C．芽胞 D．核质 E．细胞膜27．变异最易出现在A．缓慢期 B．对数期 C．稳定期 D．衰亡期 E．以上均可28．I型细菌特性A．需用低渗含血清培养基 B．抗原性不变 C．对青霉素敏感 D．呈高度多形性 E．以上均错29．关于外毒素A．性质稳定，耐热 B．毒性较强 C．无抗原性 D．主要由革兰阴性菌产生，少数革兰阳性菌也可产生 E．以上均对30．吞噬细胞吞噬细菌后，后果A．引起组织损伤 B．杀死细菌 C．不能杀死细菌 D．引起细菌体内扩散 E．以上均对二、名词解释〔每个5分，共30分〕1．L型细菌 2．质粒3．败血症4．消毒5．Spore 6．SPA三、填空题〔每空0.5分，共15分〕1.HSV-1的潜伏部位是____，HSV-2的潜伏部位是____。

大学病原生物学考试练习题及答案131.[单选题]正常情况下应无菌的部位的( )A)肠道B)尿道C)外耳道D)腹腔答案:D解析:2.[单选题]下列说法正确的是A)被猫等抓伤后进行简单包扎即可B)被狗咬伤后观察狗的状态，狗一直健康无恙就不需要打疫苗C)狂犬病一旦发病100%死亡D)狂犬病病毒进入人体后会立即出现头痛、不安、流涎、惊恐等症状答案:C解析:3.[单选题]风湿热与下列哪种细菌有关( )A)链球菌B)金黄色葡萄球菌C)脑膜炎球菌D)淋球菌答案:A解析:4.[单选题]溶血性链球菌主要引起的炎症是A)脓肿B)出血性肺炎C)假膜性炎D)纤维炎答案:A解析:5.[单选题]免疫防御功能有缺陷可表现为( )A)免疫缺陷病B)超敏反应C)恶性肿瘤D)自身免疫病6.[单选题]结核菌素试验结果：阳性结果是指硬结、红肿直径 mm之间A)1-5B)10-15C)5-15D)15-25答案:C解析:7.[单选题]病人，男，38岁。

因腹泻7小时于9月份入院。

病人7小时前开始腹泻，为黄色水样便，量较多，20次，曾呕吐胃内容物2次，无发热、腹痛及里急后重。

病前1天曾进食过海鲜。

病人最可能的诊断是A)霍乱B)急性细菌性痢疾C)沙门菌食物中毒D)葡萄球菌食物中毒答案:A解析:8.[单选题]免疫系统的组成是A.中枢免疫器官和外周免疫器官A)中枢免疫器官、免疫细胞和黏膜免疫系统B)T淋巴细胞和B淋巴细胞C)免疫器官、免疫细胞和免疫分子D)胸腺和骨髓答案:C解析:9.[单选题]繁殖速度最慢的是 A.链球菌A)大肠杆菌B)破伤风杆菌C)葡萄球菌D)结核杆菌答案:D解析:10.[单选题]下列属于非细胞型微生物的是( )A)衣原体B)螺旋体C)病毒D)细菌11.[单选题]属于II行超敏反应的疾病是：( )A)支气管哮喘B)过敏性鼻炎C)输血反应D)传染性超敏反应答案:C解析:12.[单选题]不属于细菌特殊结构的是A)鞭毛B)芽胞C)菌毛D)细胞浆答案:D解析:13.[单选题]乙肝大三阳时，决定传染性的是哪项？A)HBsAgB)HBeAgC)抗-HBcD)抗-HBs答案:B解析:C抗-HBe14.[单选题]引起原发性非典型性肺炎的病原体是( )A)肺炎衣原体B)肺炎支原体C)肺炎链球菌D)钩端螺旋体答案:B解析:15.[单选题]患者张某，持续发热8天，平均39·5摄氏度，食欲减退。

一、引言流行性乙型脑炎（Epidemic Encephalitis B，简称乙脑）是由乙型脑炎病毒引起的急性中枢神经系统感染性疾病，主要影响儿童和青少年。

乙脑的病死率较高，且预后较差。

因此，早期诊断和治疗对于提高患者生存率和降低后遗症具有重要意义。

本实验报告旨在通过实验室检测，对乙脑进行诊断。

二、实验材料与方法1. 实验材料（1）乙脑病毒抗原、抗体及核酸检测试剂盒；（2）乙脑病毒分离培养用的细胞株；（3）乙脑病毒感染患者血清、脑脊液样本；（4）乙脑病毒感染动物模型。

2. 实验方法（1）乙脑病毒抗原检测采用间接免疫荧光试验（IFA）检测乙脑病毒抗原。

将病毒抗原与荧光素标记的抗体结合，观察荧光颗粒的出现情况，判断乙脑病毒抗原的存在。

（2）乙脑病毒抗体检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙脑病毒抗体。

将乙脑病毒抗原包被于微孔板，加入待测血清，通过酶标记的二抗检测抗体，计算抗体滴度。

（3）乙脑病毒核酸检测采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测乙脑病毒核酸。

提取病毒核酸，通过RT-qPCR扩增病毒基因片段，定量检测病毒核酸含量。

（4）乙脑病毒分离培养将乙脑病毒感染患者血清、脑脊液样本接种于乙脑病毒敏感细胞株，观察病毒分离培养结果。

三、实验结果1. 乙脑病毒抗原检测在乙脑病毒感染患者血清、脑脊液中，均检测到乙脑病毒抗原。

2. 乙脑病毒抗体检测在乙脑病毒感染患者血清中，ELISA法检测到乙脑病毒抗体，抗体滴度较高。

3. 乙脑病毒核酸检测在乙脑病毒感染患者血清、脑脊液中，RT-qPCR法检测到乙脑病毒核酸，核酸含量较高。

4. 乙脑病毒分离培养将乙脑病毒感染患者血清、脑脊液样本接种于乙脑病毒敏感细胞株，观察到病毒分离培养阳性结果。

四、讨论本实验通过多种实验室检测方法，对乙脑进行了诊断。

结果显示，乙脑病毒抗原、抗体及核酸均呈阳性，证实了乙脑的诊断。

1. 乙脑病毒抗原检测是乙脑诊断的重要依据。

本实验中，乙脑病毒抗原检测呈阳性，说明患者体内存在乙脑病毒。

1. 了解乙脑病毒的生物学特性及其传播途径。

2. 掌握乙脑病毒检测的基本原理和方法。

3. 提高对乙脑病毒检测技术的操作技能。

二、实验原理乙脑病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是一种黄病毒科病毒，主要通过蚊子叮咬传播，引起人类和动物发生脑炎。

乙脑病毒检测主要包括病毒分离、血清学检测和分子生物学检测等。

本实验采用RT-PCR技术检测乙脑病毒核酸。

三、实验材料1. 乙脑病毒核酸模板：阳性对照、阴性对照、待测样本。

2. RT-PCR试剂盒：包括RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒。

3. 实验仪器：PCR仪、离心机、凝胶成像系统、电子天平等。

四、实验方法1. 样本处理（1）取待测样本，加入RNA提取试剂盒中的裂解液，充分振荡，使病毒核酸充分释放。

（2）按照试剂盒说明书进行RNA提取。

（3）将提取的RNA进行逆转录，合成cDNA。

2. RT-PCR反应（1）配制PCR反应体系，加入引物、模板、dNTPs、Taq酶等。

（2）按照PCR试剂盒说明书进行RT-PCR反应。

3. 结果分析（1）将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增条带。

（2）以阳性对照和阴性对照为标准，判断待测样本是否含有乙脑病毒核酸。

1. 阳性对照：在预期位置出现特异性扩增条带。

2. 阴性对照：无特异性扩增条带。

3. 待测样本：在预期位置出现特异性扩增条带。

六、实验讨论1. 本实验采用RT-PCR技术检测乙脑病毒核酸，具有较高的灵敏度和特异性。

2. 实验过程中，应注意以下几点：（1）严格操作，避免污染。

（2）提取RNA时，确保充分裂解病毒。

（3）逆转录反应时，严格控制温度和时间。

（4）PCR反应时，优化反应体系，提高扩增效率。

3. 乙脑病毒检测在流行病学调查、临床诊断和疫苗研发等方面具有重要意义。

七、结论本实验成功检测了乙脑病毒核酸，表明RT-PCR技术是一种高效、灵敏的乙脑病毒检测方法。

在实际应用中，应结合多种检测技术，提高乙脑病毒检测的准确性和可靠性。

中文摘要目的：流行性乙型脑炎是危害人类健康比较严重的虫媒病毒。

尽管目前乙脑的发病率有所下降，但发病区域仍呈现不断扩大的趋势。

加强乙脑的监测，就可以评估该地区乙脑的流行状况。

蚊子是JEV的主要传播媒介，对蚊子的流行性乙型脑炎病毒和虫媒病毒进行分子流行病学监测，对疾病预防具有防范意义。

方法：首先将云南省景洪县采集15份蚊虫样品研磨接种BHK-21和C6/36单层细胞，待出现细胞病变。

提取病毒RNA，并反转录cDNA进行PCR鉴定将目的基克隆到pMD18-T载体，送上海生工测序。

同时进行盖塔病毒、辛德毕斯、基孔肯雅病毒的PCR鉴定，回收并测序。

在此基础上构建了乙脑基因I型标准质粒，建立了基于SYBR Green I染料的Real-time PCR检测方法，选取Ct值制作标准曲线。

结果：乙脑PCR扩增目的基因经测序验证为乙脑基因I型，然后构建应用荧光定量PCR标准质粒。

研究建立的标准曲线能够准确定量目的基因，线性相关度很高，呈现良好的重复性，熔解曲线为单一峰型，未出现非特异性扩增。

SYBR Green I Real-time PCR与传统方法相比灵敏度要高10倍，而且与猪蓝耳病毒等，均不发生非特异性扩增，具有良好的特异性。

结论：鉴定了基因I型乙脑病毒，并构建了快速检测乙脑I型的检测方法。

通过实验初步验证了其具备良好的灵敏性和重复性，为以后乙脑的流行病学调查奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒基因I型虫媒病毒荧光定量PCR前言乙型脑炎病毒，主要引起病毒性脑炎，每年可导致10,000–15,000人死亡，然而乙型脑炎是一个被忽视的热带病。

本病容易引发中枢神经系统疾病，临床上以高热、意识障碍、呼吸衰竭等神经症状为特征，具有明显的季节性和地域性。

本病的致死率为25-30%，相当一部分为婴儿，50%可造成永久性后遗症。

乙型脑炎病毒分布区域已经广泛而且还在不断地向亚洲和大洋洲区域扩展，因此乙型脑炎病毒被认为是新发和再度出现的病原菌。

流行性乙型脑炎病毒危害评估报告流行性乙型脑炎病毒危害评估报告的部分内容如下，流行性乙型脑炎是经蚊虫媒介传播的一种人畜共患性疾病。

1935年日本的学者从病死脑炎病人的脑组织中分离到该病毒，国际上，将这种病原体命名为日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)，简称''乙脑病毒〃。

我国称为''流行性乙型脑炎〃，简称''乙脑〃。

根据《中华人民共和国传染病防治法》，流行性乙型脑炎属于乙类传染病。

(-)不同实验室操作生物安全实验室级别要求根据《名录》的要求，在实验室操作可能含有和确定含有乙型脑炎病毒感染性材料或未经培养的感染性材料以及病毒培养、动物感染实验，务必在BSL—2实验室内进行；在对灭活、无感染性材料进行操作时，确认的乙脑病毒灭活措施有效后，方可进入BSL—1实验室进行诸如ELISA, PCR等后续实验检测过程。

二、背景资料(一)一般生物学特性1、形态染色乙型脑炎病毒属于黄病毒科(Flaviviridae),黄病毒属(flavi-virus)。

电镜下病毒颗粒大致呈球形，直径40~60nm左右。

超薄切片上可看到一层外膜(膜蛋白囊膜)和一个电子密集的核心(RNA蛋白)，围绕成一个清晰的结构。

负染色体可见一些明显的突起部分分布在外膜上，由32个子粒组成的衣壳呈明显的对称二十面体。

病毒基因组为llkb左右的单股、正链RNA。

脂质双分子层中镶嵌有糖基化的包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。

在脂蛋白囊膜表面有血凝素刺突，能凝集鸡、鹅、羊等动物红细胞。

JEV抗原性稳定，人和动物感染JEV后，均产生补体结合抗体、中和抗体和血凝抑制抗体。

2、培养特性JEV能够感染多种细胞,C6/36、BHK21、Vero等细胞株和金黄色地鼠肾、猪肾、狗肾、鸡胚等原代细胞均对乙型肝炎病毒敏感，并引起典型的细胞病变。

较敏感的细胞包括金黄色地鼠肾细胞，猪肾细胞。

病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。

仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。

病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。

在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。

一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。

形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。

2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。

病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。

异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。

缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。

干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。

（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。

噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。

噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。

（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。

朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。

朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。

克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。

二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。

DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。

按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。

按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。