序贯法测定半数致死量

2、根据回归方= 20.9376 + 8.1526 x y
时的x值 （1）计算当 ）计算当y=5时的 值 时的
y=5
x = ( 5 a ) / b = 3.1815
值的反对数， （2）取x值的反对数，得LD50 ） 值的反对数
LD50 = 1518.7773
累计 存活数 32 22 13 6 3 1 0
累计 死亡率%
0 4.3478 23.5294 64.7059 50% 86.3636 96.5517 100
100050 3.000 1200 3.079 3.079 1400 3.146 1400 3.146 1600 1800 2000 3.204 3.255 3.301
132465剂量对数累计死亡率307923529314664706兽医生物统计第十章animalscience3累计法测定ld50优缺点简便快速粗略不精确兽医生物统计第十章animalscience三序贯法测定ld50剂量组按等比级数分46组实验从最可能接近ld50的剂量组开始一只一只动物进行阳性反应下一只动物用低一级剂量阴性反应下一只动物用高一级剂量统计各组动物数取加权平均数的反对数得到ld50兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例50测定剂量按等比级数分组r1586冯海华等2002中国兽医科技321剂量mgkg剂量对数3763057555968077589465097611501211764238091376710111213141516171819序贯法测定ed50实验记录表兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例序贯法测定ed50实验结果分析表05755077580976111764137673763596894651501223809剂量mgkg阳性动物数阴性动物数合计动物数nnx310328784970584阳性反应率剂量对数x44441001019189465ed50lged5050兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例lged5009971取反对数得到

Review
半数致死量的意义
测定药物的LD50是药物急性毒性实验的重 要内容。 LD50是恒量药物急性毒性的重要指标。
LD50的测定
一、测定LD50的常用方法：
1. 改良冠氏法：方法简单，计算简便。 2. 序贯法（上下法）：使用动物少，费时多， 不适于作用慢的药物 3. Biss法：设计严谨，结果可靠，是目前公认 的最佳方法，但计算复杂，一般需借助于计 算机或计算器才能进行计算。
100个自然数的随机排列
1 0 10 20 30 40 50 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Back
60
70 80 90
26 23 49 51 04 00 58 15 70 64
03 08 34 52 53 27 83 90 63 88
86 20 97 47 98 40 78 57 67 59
37 36 66 83 43 29 23 95 32 64
19 54 65 28 63 05 04 20 89 00
62 81 78 59 48 17 52 68 15 79
47 30 84 92 94 26 71 99 02 08
10 55 61 13 85 33 88 69 87 97
16 86 53 56 80 06 74 67 90 22
86 19 34 69 13 54 26 99 30 22
09 94 96 60 77 01 47 50 55 23
48 73 15 98 06 40 18 88 21 16
53 92 95 85 11 29 58 25 78 83
63 59 28 02 91 42 41 71 56 33
66 00 85 67 76 17 90 14 51 46

半数致死量的测定半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。

它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。

由于生物间存在个体差异性，因此 LD50需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的 LD50值不相同。

测定 LD50的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。

由于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。

【目的】用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的 LD50和95%可信限。

【方法】寇氏法（ Karber法）【条件】1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。

2.各组动物数应相等。

3.“反应”应大致呈正态分布。

最小剂量组的死亡率（Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%；如果 Pn<20%或Pm>80%需用校正公式计算；如Pn>20%或Pm<80%则不能用此法计算。

【步骤】1.预备实验（1）摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量（Dn）。

方法是据经验或文献定出一个估计量，观察 2～3只动物的死亡情况。

如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出Pm=100%和Pn=0%的剂量，此两量分别为上下限。

（2）确定组数，组距及各组剂量①组数：一般5～8组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。

有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。

②组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“d”来表示。

D不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多，各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。

组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。

敏感性大者，死亡率随剂量增加（或减少）而增加（或减少）的幅度大，组距可小些；反之，敏感性小者，死亡率随剂量变化的幅度小，则组距应大些。

上下限之间的距离可作为敏感性大小的标志。

Xk :最大对数剂量 d：相邻两组对数剂量之差，即相邻剂量比值的对数
也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1（lgLD50 ± 1.96SlgLD50）
测定结果
某试剂的LD50值测定结果
对数剂量
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
+ + + + + + + + + -
20
21
22 23
1.95 1.90 1.85 1.80 1.75
+ + + x
整理与计算
对数剂量x 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 死亡 1 2 6 3 0 存活 0 1 2 5 3 合计n 1 3 8 8 3
寇氏法在实际工作中较常用，计算简便，结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 （Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为 100%；如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算； 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式：lg LD50＝XK－d ( P 4 )
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定，从第一只改变算起到最后一 只止，最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡，下降一格画“x”， 以存活计数；若最后用一只动物存活，上升 一格画“x”，以死亡计数。

LD50的意义：
LD50为半数致死浓度或半数致死量，是指以死亡为阳性药效反应、能使半数细胞或者动物死亡的浓度或者剂量。

作为反映毒力的定量指标，按理说应以该药能使细胞或者动物刚好致死的剂量的平均值最有代表性。

已有大样本动物实验证实，LD50相当于最小致死量。

由此可知，LD50以下的浓度或剂量为试验用药的安全浓度或安全剂量
药物浓度实验设计
我认为最实用的是“序贯法” 将细胞等量分组序贯地进行预实验，这时不用非要按照等比序列稀释药物。

选定大致致死量时，常配成10倍稀释或2倍稀释的一系列药液。

先用某一剂量，如不能致死动物则下一次用高一级剂量；如使动物死亡，则用低一级剂量。

如此序贯进行，当分组较细时，可以测得LD50，此法适用于短期内能判断死活的实验，个人认为比较适合测定药物细胞毒性。

在新药测定LD50时可用序贯法找寻致死量的大致范围。

当然，也可以先按照10倍稀释寻找大致范围，然后进一步按照2倍稀释来确定最终的LD50，这也就是所谓的“两步法”寻找药物致死的范围。

孙瑞元点斜法公式：这个计算方法是最简单实用的一种。

LD50=log-1【Xm-i（∑p-0.5）+i/4*(1-Pm-Pn)】
如果含有0%及100%死亡率时
LD50= log-1Xm-i（∑p-0.5）
备注：Xm为最大对数剂量；i为组距，组距要相等，即剂量或浓度成等比数列，例如：等比数列的比值为1：0.7，则i=log(1/0.7)=0.155; Pm为最高死亡率；Pn为最低死亡率。

鋈 母
．
序贯法测定原位凝胶材料 Ｏ Ｌ Ａ Ａ的 Ｌ Ｄ
顾 娜 ， 旭 邓联 东 。梁艳 琴 。王伟 伟 胡 人杰 李 ， ， ， ，
学院， 天津 ３ ０ ７ ） ０ ０ ３
摘要 目的： 测定小鼠静脉注射给予原位凝胶材料 Ｏ Ｌ Ａ Ａ的半数致死量（ Ｄ ）从而对该材料 的生物毒性进行评价 。方法 ： Ｌ ， 采用 Ｋ Ｍ种雄性 小鼠， 用急性毒性 实验 中的序贯法分别测定原位凝胶材料 ０ Ｌ 运 Ａ Ａ不同浓度相 同给药体积和相 同浓度不 同给药体积 的 Ｌ Ｄ） 。结果 ： 根据实验方 法提供 的计算公式得 出不 同浓度相 同给药体积的 Ｌ ｓ （ ． ￣ ．７ ） ｌ Ｌ （ Ｄｏ ７ ３ ０ ６ ｍｇ ＝ ５ ５ ｍ 给药体积为 ０ Ｌ２ ． ／０ ４ｍ ｇ 体重 ， 当于 １０ ￣ｋ ） 同浓度下不 同给药体积的 Ｌ ５ （ ．１０１ ３ ｍ （ 相 ５ ．ｍ ｇ， ６ 相 Ｄ０ ０３± ．１ ） Ｌ 浓度为 ７５ ｇｍ ， ＂于 ｌ６７ｍ ／ｇ ； ＝ ．３ ／ Ｌ 相 － ｍ ３ １． ｇ ）组织病 ｋ
（． 津 医科 大 学研 究 生 院 ， １ 天 天津 ３０ ７ ；． 津市 医 药科 学研 究 所 ， ０ ００ ２天 天津 ３０ ２ ；． 大学 化 学性毒性 ； Ａ Ａ； 序贯 法； 小鼠
Ｒ ６． ９ ５３ 文献 标 识 码 Ａ
理 学检 查显 示 死 亡 动物 肺 脏各 级 静 脉 中 Ｏ Ｌ Ａ Ａ凝 胶 材 料 广 泛 分 布 ， 致 血 管 阻塞 。结 论 ： Ａ Ａ静 脉 注射 Ｋ 小 鼠 。 同浓 度 相 导 Ｏ Ｌ Ｍ 不
同给 药体 积 的 Ｉ 为 １Ｏ６ ／ ， 同 浓度 不 同给 药体 积 的 Ｌ 为 １６ ｇ 。其 死 亡原 因主要 是 弥散 性肺 栓 塞 。 。 Ｄ ５ ．ｍｇ ｇ 相 ｋ Ｄｏ ｌ ． ＆ｇ ７ｍ

2020/7/28
半数致死量(LD50)
特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
测定药物的LD50 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号1-25，另一组小鼠编号26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼20/7/28
实验结果
解磷定LD50的实验结果
组别
1# 2# 3# 4# 5#
小白鼠 浓度
(只) （mg/ml）
10
1.5％
10
1.2％
10
0.96％
10
0.77％
10
0.61％
剂量 (mg/kg)
300 240 192 154 123
对数剂量
2.48 2.38 2.28 2.18 2.08
动物死亡数 死亡率
(只)
(％)
注：动物死亡数只统计给药后2小时内的死亡数
2020/7/28
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液

药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量（LD50） 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C＝∑（R·logD）
R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值；
N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只，腹腔注射第一个剂量即2.2％普鲁 卡因0.1ml/10g，若第一只小鼠用药后未出现死亡， 下一只动物则用高一剂量，如出现死亡，下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时，动物死亡用 “＋”表示，未死亡用“－”表示。若在同一剂量中 连续出现“－”两次，则下一次实验结束，最后一 只动物不做实验，但在表格中占一个，用E表示。

序贯法测定半数致死量实验报告
半数效量(或半数致死量)的序贯法又称上下法，是一种简便、快速、粗略测定半数效量的方法。

适用于很快发生反应的药物。

由W.J.Dixon首创，经K.Brownlee改进。

此法特点是将受试动物逐只地序贯地进行实验，根据前一只的反应，决定后一只的采用剂量，能使剂量进程集中在最有效的反应率50%附近，避免出现效率不高的反应率，故可大量节省实验动物数，最后用加权均数法求得半数效量。

方法剂量组按等比级数分为4～6组。

实验从最可能接近ED50的剂量组开始，一只一只动物进行。

如出现阳性反应，则下一只动物用低一级的剂量;如出现阴性反应，下一只动物就用高一级剂量。

实验的动物数n从反应发生改变的前一个动物开始计算。

估计本法需要动物数为12～20只。

如在药物致死实验中，得到各剂量的动物死亡数r、存活数s、合计数n及死亡率p，求半数致死量LD50及其标准误slgLD50; 按正态近似原理可由式子求出总体LD50的95%可信区间的对数值，取反对数即得真数值。

药物半数致死量（LD50）的测定Determination of Drug Median Lethal Dose(LD50)【目的和原理】 了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。

LD50是指使一群体动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物优劣的重要参数。

了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。

LD50的测定方法很多，较为常用的有改良寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。

本实验介绍结果较准确、计算简便、可计算出全部有关参数的改良寇氏法及及计算机应用程序中的Bliss-Finney法。

【实验动物】小白鼠，体重18-22g，♀♂各半，实验前禁食12 h，不禁水。

【实验器材和药品】 计算机（BL-410机能实验系统）、计算器、电子秤、量筒（10ml）、注射器（1ml）、小鼠笼；盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride）。

【实验步骤和观察项目】一、预备实验1.探索剂量范围：根据经验或文献找出动物100%及0%死亡的剂量，即上下限剂量（D m,D n）。

对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系（如2：1）稀释成多个剂量，方法是每组取4～10只小鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出D m, D n。

2.确定组数、计算各组剂量：组数（G）：5-8组各组剂量：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出公比r:按公比求各组剂量：D1，D2，D3，D4，D5，……，D m其中D1=D n= 最小剂量，D2=D1· r，D3 =D2· r，……D m =D n-1·r3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，0.1ml/kg～0.2ml/kg，按下列公式计算浓度：C母=D m/等容注射量二、正式实验：1.分组编号：随机将小鼠分为五组，每组10只， ♀♂各半。

寇氏法在实际工作中较常用，计算简便，结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 （Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为 100%；如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算； 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式：lg LD50＝XK－d ( P 4 )
计算结果
铵碘消毒剂对建鲤的半数致死量在95%的置信 区间为：56.079ml/m3—61.572ml/m3。 即铵碘消毒剂使一半建鲤死亡的平均剂量最小 为56.079ml/m3最大为61.572ml/m3，做 出这一推断的置信度为95%。
计算结果
LD5099%的置信区间 Ig-1（lgLD50 2.58SlgLD50） =Ig-1（1.7688 2.58x0.0105）
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定，从第一只改变算起到最后一 只止，最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡，下降一格画“x”， 以存活计数；若最后用一只动物存活，上升 一格画“x”，以死亡计数。
例题
为测定某试剂的安全性，用序贯法测定此试剂小 白鼠腹腔注射的LD50（mg/kg）,选用1月龄小 白鼠22只，给药的对数剂量应从估计最可能接 近LD50的剂量开始，本例从1.85开始，死亡记 为“+”号，存活记为“-”号。
Xk :最大对数剂量 d：相邻两组对数剂量之差，即相邻剂量比值的对数
也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1（lgLD50 ± 1.96SlgLD50）

此法比较方便适用，目测的直线可通过卡方测验以检验其是否合 适。如果结果中理论频数与实际频数间有显著差异，说明所绘直线 不当，应另作更适宜的直线，直至检验合适为止。这样求得的 LD50是比较精确的。
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(2) 加权直线回归法(Bliss法，又名机率单位法或加权回 归法))：本法是在上述目测法的基础上用正态曲线原理 进行加权后，计算直线回归方程以求得LD50。这是计算 LD50的最精确的方法。但由于计算过程比较复杂，实际 应用中常以此来鉴定和比较其他计算方法的正确性。
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结果判定
在实验设计时应有一定的要求。应把动物分成若干组， 每组动物数量最好相等，分别给予不同剂量的试验毒物。 两组间的组距应按几何级数依次增加，通常在1.3～1.5 范围。例如第一组(最低组)剂量为0.2mg/kg，则第二组 应为0.2×1.3=0.26mg/kg，第三组应为 0.26×1.3=0.34mg/kg，余依次类推。
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直线方程式中b是直线的斜率，表示该直线的斜度。斜率愈大，表示该毒物的剂量 有微小改变时，即能引起死亡率的较大改变，所以可通过斜率比较两种以上LD50 相近的毒物的毒性性质，或比较一种毒物在几种不同染毒途径时，表示一种实验动 物对该毒物敏感性的分布，斜率越大的直线，表示该毒物 (或染毒方式)的毒性越大。 如果直线的斜率相等，则表示毒物的毒性也基本相似。
为使计算更为方便，还须再将对称S形曲 线的死亡率转换为概率单位，使之转 换成直线(如右下图)。
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这样可按直线方程式y=bx+a计算，获得各种指标。该方程式表示直线内x和y值的关系， x代表剂量对数，y代表死亡百分率，用直线上的死亡率50%处的剂量对数，查其反 对数，即得实际的剂量。a是常数，亦称截距，即x=0时的y值，亦即代表在不给毒 物时，动物自然死亡的估计。从这曲线上可查得最小致死量和绝对致死量，分别用 LD1、LD99或LD5、LD95表示，也可用直线方程式计算出来。从公式也可算得 LD0，即最大耐受量，它是使动物中毒而尚未致死的最大剂量或浓度。它与LD100 一样，受到个别动物的敏感度的影响太大，往往不够准确。而且在统计理论上，正 态曲线向左右伸展，绵延无穷，找不出与LD0或LD100相应的概率单位。由于实验 资料具有抽样性质，所算出的LD50存在一定的抽样误差，故必须计算其95%可信 限。它由LD50值加减1.96倍标准误后所形成的高限和低限两个值组成。

LD50的测定方法LD50的测定方法有三种：概率单位法(Bliss法)、累计法(Reed-Muench、Karber)、序贯法概率单位法：1、进行实验：死亡率为10%-50%、50%-90%的组数各占一半。

死亡率为0%与100%时，舍去不用2、数据转换:计算剂量对数x与死亡率概率单位y3、对x与y进行回归分析，求出回归方程4、由回归方程计算当y=5时的x值5、取x值的反对数得到LD50如某农药对急性大白鼠的LD50测定计算剂品mg/kg 唱试功物数死亡数夕匕f剂M 对敷(X)死匸率概率单位(y)1000 10 1 10© 3.00001200 10 220 3.0792 1400 10 3 30 3.1461 1600 10 5 50 3.20411800 10 7 70 3.2553 2000 10 9 90 3.3010剂量mg/kg 受试动物数死匚数对数(x)死亡率概率单位W)1000 10 1 10 3,000037134 1200 10 2 20 3,0792 4.1534 1400 10 3 30 3-1461 4.4756 1600 10 5 50 3.20415 1800 10 7 70 32553 5.5244 2000 10 9 90 3.3D10 6.28161＞进行回归分析r =0.9738P =0001025v--20.9376 +8J526JV得: $ =-20.9376+ 8.1526兀(1) 计算当y=5时的咒值$=5 x = (5-a)/h = 3.1815(2) 取覧值的反对数，得LD创W50 =1518.7773 mg/kg该农药对大白鼠的LD刊为1519mg/kg a累积法测定LD502、死亡率在0-100%之间3、分别累计各组动物死亡总数与存活总数4、分别求各组的累计动物死亡率5、用线性插值法求半数致死量例：剂虽剂量~~~jgir 壊计kg対数功物数动物数动物数址【池肓帛款化「壬“H1K12,903100ID 032 Uh 000IgLD和y14347812 0»3.ft79w71：323.5294［事冊 3.1467311664.7059^£3 一204lib ES-J £J)9J K63636LS1M* 3. 2S5ll>91196.55173. Ml10KJ00100①死亡率每增加一个百分点，剂量对数增加：(3.146-3.079>/(64706-23.529) = 0.00163②死匸率从23.529%^jJliUSO%,剂量对数增加:0.00163 x (50 -23.529) =0.0431③lgLD50= 3.079 + 0.0431 = 3.1221④取&对数得到LD50为；1324.65序贯法测定1、做实验:从接近LD50的各组动物组数只一只动物进行，阳性,下一只动物用低n剂量开始，等比级数分4-6组;一级剂量，反之，则相反2、计算各组动物数3、计算各组动物组数n与剂量对数x的乘积之与:L nx4、计算LD50的对数值：Z hx/ L n1、剂量组按等差或等比级数分5-8组5、 取反对数得到LD50■■-■*■—' ■ --"fc ・ rx* < ■ -------------- L TISJ—-f ■* -* - •*- T-^^-r * f * *(ng/kg 削足対粧1 2 34 5 6 7 89 10 11 12 13 14 15 16 1718 193.763 □ 5755B.ace0.775ft- -■眼465 0.-9761-十十'15.012 1.1764 + +十+ + +23.acg 1.3767⑷加馳咙耳狄散卄傑醒经眠乃丫麻醉人亂的E D M 测芯剂星按竽比级数分组（r-1.596） +：催醒：未催皑mSulinraw Z. mg/M ；刈数X 动物数 动物数 动物数n反的率％05755IL7758 f ]gED 50「' 0刖1.1764 6 0♦ IgEDso = 18,9465/19 = 0.9971♦取反对数得到:EDso = 9-935415.0124 U 3.1032 944.44 SJ849----6 5(FS 100 L05S423.809 13767合计 io仗Eg3763。

s N / 2
N´为概率单位4至6范围内（即死亡率为15.87% 至84.13%范围内）各组试验动物数。
第二节 半数致死量的测定方法
本例，此范围内共用试验动物数合计48头，即 N ´ =48。故
slg LD50 s 0.39 0.0796 N' 2 48 2
进而半数致死量的95%置信区间。
第九章 半数致死量
本章重点
半数致死量的基本概念 寇氏法、目测概率单位法和序贯法等计算半数 致死量的方法 半数致死量的试验设计方法。
第一节 半数致死量概述
在动物毒理学和药理学研究中，通常用试验动
物对某种药物、毒物、细菌及理化刺激等反应来测
定其效力或毒性。 常用的指标是半数效量(median effective dose: ED50)：指使半数实验动物发生特定效应的剂量， 如半数治愈量、半数麻醉量、半数感染量、半 数惊厥量、半数致死量等等
k
k
xk
i 1
如果p1不为0且小于20%，pk不等于1且大于80%时
lg LD50 xk d [( pi ( 3 p1 pk ) / 4]
i 1
第二节 半数致死量的测定方法
2. 求 lg LD50 的反对数得 LD50 3. 求 lg LD50 的标准误
slg LD50
Slg LD50 d
【例】 为弄清氟对禽类的毒性影响，选用1日龄
罗曼褐蛋鸡48羽，随机分为6组，每组8羽，另
设一组空白对照，经饮水添加不同量的氟化钠，
1次性灌喂，观察7 d天内雏鸡中毒死亡的情况。
计算 LD50 指标。
第二节 半数致死量的测定方法
服氟化钠水溶液后对雏鸡的毒性影响 浓度(mg/ml) 雏鸡数（n） 死亡数（r） 死亡率（%） 80.60 64.51 55.62 41.27 33.03 26.42 8 8 8 8 8 8 6 5 4 3 3 2 75.0 62.5 50.0 37.5 37.5 25.0

漳州卫生职业学院教案课程名称《机能实验学》编号授课对象系别护理系、临床与技术系层次高职高专班级2005级高护、中西医护理、高助、医检教学方式讲授□ 讨论□ 示教□ 其他□ 课程类型理论课□ 实验课√见习课□ 其他□ 题目实验十四、异烟肼半数致死量LD50的测定课时安排3学时教学目的要求 1 了解半数致死量的测定方法。

2 学习动物的随机分组方法。

3掌握LD50的含义及基本实验设计和计算。

教学内容重点难点疑点时间分配分钟提问/举例/教具一、目的和原理二、实验对象三、实验器材和药品四、实验步骤及观察项目一探索死亡剂量范围二确定组间剂量公比r 三随机分组法四正式测定五、注意事项六、结果处理七、计算过程10 5 10545与实验十五穿插进行 5 5 5 1、每个班级分12组每组45人。

2、以学生自己操作为主培养动手实践能力教师仅起辅导作用。

讨论、思考题、作业1、撰写实验报告2、思考⑴测定LD50的意义何在⑵简述药物治疗指数的意义和计算方法。

参考书目唐忠辉.机能学实验教程M.第一版厦门:厦门大学出版社2006 漳州卫生职业学院教案第 1 页实验十四、异烟肼半数致死量LD50的测定教学班级2005级高护、助产、中西结合护理、医学检验技术教学时数3学时教学方法讲授、演示、学生操作教学内容一、目的和原理半数致死量LD50是指药物能使半数动物死亡的剂量它是以动物死活与否为药物效应指标此种药物效应与剂量间关系属于质反应量-效关系。

以对数剂量为横轴小鼠死亡率为纵轴则量-效关系呈对称S型曲线在死亡率为50处曲线斜率最大说明此处药物毒性反应灵敏度最高。

LD50是衡量药物毒性大小的主要指标LD50与ED50的比值称为药物的治疗指数治疗指数越大表示药物安全性越大。

本实验旨在通过操作了解半数致死量的测定方法、步骤和计算过程学习动物的随机分组方法。

二、实验对象小白鼠70只以上三、实验器材和药品玻璃缸、1ml注射器、异烟肼注射液、BL-420生物机能实验系统及LD50软件。

如果 Pn<20% 或 Pm>80% 需用校正公式计算；
如 Pn>20% 或 Pm<80% 则不能用此法计算。
第二节 半数致死量的测定方法
【例】 为了研究铵碘消毒剂对建鲤毒力的影响， 随机捞取210尾规格基本一致的鲤鱼，放入缸内，每 缸30尾，1组对照，6组处理。以等对数间距设置6个 3 剂量水平（单位： ）分别为：40.000、47.156、 mL /m 55.592、65.538、77.262、91.085，量取药液并加入缸 内，搅拌均匀，96 h后所得资料见下表。试求铵碘对 建鲤的半数致死量。
1 l g( 1 . 7 6 8 80 . 1 1 3 1 )
即铵碘消毒剂对建鲤 L D 5 0 的95%置信区间为：
45 . 258 mL m ～ 76 . 190 mL m
3
3
第二节 半数致死量的测定方法
二、目测概率单位法 目测概率单位法是一种较为简单的计算方法， 其基本原理是将剂量改变成对数剂量，再将死亡 率（%）转换成“概率单位”，则剂量反应曲线 呈直线化，根据前述回归分析画出直线，再求 出 LD 50 。
其中：
— 为最大对数剂量 d — 相邻两组对数剂量之差，即相邻剂量比值的对数
xk
如果p1不为0且小于20%，pk不等于1且大于80% k 时
lg LD d [( p ( 3 p p ) / 4 ] 5 0x k i 1 k
i 1
第二节 半数致死量的测定方法
2. 求 lg LD50 的反对数得 LD 50 3. 求 lg LD50 的标准误
= 1.7688
第二节 半数致死量的测定方法
（2）求 lg LD50 的反对数得 L D 5 0

实验设计安排
1.自选题 2.13周交实验设计书 3.14开题报告（选1-2份） 4.15周实验准备 5.16周按实验方案做实验 6.书写实验报告
思考题：

什么是LD50和ED50? 测定其有何意义?
什么是治疗指数？评价药物安全性的大小
还有哪些指标？

普鲁卡因和尼可刹米产生毒性的表现和
及其机理如何?
反映药物急性毒性大小和药理作用的强弱
评价药物的安全性
申报新药过程中必须具备的药效学资料
盐酸普鲁卡因(Procaine)
局麻药 过量应用引起中枢神经系统和心血 管反应 表现为中枢神经系统先兴奋后抑制 不安、惊厥、昏迷、呼吸抑制心血 管活动抑制 致死原因：呼吸衰竭

尼可刹米(Nikethamide)
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） 熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
序贯法

取10只小鼠编号、称重 从最大剂量开始给药(尼可刹米0.1ml/10g) ， 观察10min. 若死亡，则下一只小白鼠降低一级 剂量，若没死亡，则用高一级剂量，依次类推， 直至10只小白鼠全死. 记录结果 计算X· R、∑（X· R） 按公式计算尼可刹米的半数致死量 LD50＝lg-1 ( C/n ) (mg/kg) n=实验动物数+1
实验设计的三大要素
2.处理因素
医学科 学研究
指实验者人为地施加给实验对象的某种外部 干预。 对处理因素的控制和安排应注意以下三点： 1)主要因素 2)处理因素 3)非处理因素