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盐酸普鲁卡因半数致死量_LD50的测定

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实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定

实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定

DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大，注射量要准。
DJY
9
思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
10
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的鲁卡因半数致死量(LD50)的测定

药物半数致死量(LD50)的测定

药物半数致死量(LD50)的测定
药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量（LD50） 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C＝∑（R·logD）
R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值；
N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只，腹腔注射第一个剂量即2.2％普鲁 卡因0.1ml/10g，若第一只小鼠用药后未出现死亡， 下一只动物则用高一剂量，如出现死亡，下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时，动物死亡用 “＋”表示，未死亡用“－”表示。若在同一剂量中 连续出现“－”两次，则下一次实验结束，最后一 只动物不做实验，但在表格中占一个，用E表示。

普鲁卡因LD50测定

普鲁卡因LD50测定

注：P138示例及P137-138 四、五剂量公式中：
X1、X2、X3 － 剂量的对数值，从小到大 P1、P2、P3 －各剂量组的死亡率 Y1、Y2、Y3 － 各剂量组死亡率转换成的概
率单位，可查表获得。
YK － 50％死亡率时的概率单位。 WC － 权重系数（查表获得） W － 权重＝ WC×n i －剂量间比值的对数
剂距 1：0.85
剂量
(mg/kg)
对数剂量 (x)
动物 数
(n)
死亡数
死亡率P (%)
概率单位 (y)
1 128
10 0
0
2 160
10 1
10
3 200
10 7
70%
4 250 5 312
10 9 10 10
90% 100%
(独立小组完成或汇集全班数据，可增加实验动物 数量，最好每组10只以上，可减小误差）
4、结果计算：
用对数剂量（x = log D）与概率单位 （y）进行直线回归（y = a + bx），以预
期0。
具体可参见书P28-29示例，按简化概率 单位法将各数值填入下表中，套用五剂量组 公式计算（手动计算）：
1、LD50 2、SX50(lgLD50的标准误) 3、95％可信限 4、直线斜率b
• 现用Casio-fx-180P计算器处理实验数据： • INV KAC，Mode 2 • 输入x按XDYD，输入y按DATA • INV A （a） • INV B (b) • INV r (r) • 5 INV x，INV 10x (LD50)
• 【注意事项】 • 1．测定LD50前，要进行预实验，摸索接近
实验 十
普鲁卡因注射液 半数致死量(LD50)的测定

盐酸普鲁卡因半数致死量的测定

盐酸普鲁卡因半数致死量的测定

药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。

【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。

由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。

在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。

LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。

此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。

【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。

2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。

3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。

【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。

方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。

2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。

计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r =（G-1）√D m/D n再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1⨯r; D3=D2⨯r; D4=D3⨯r; D5=D4⨯r; ……DG=DG-1⨯r。

LD50实验

LD50实验

实验三普鲁卡因半数致死量（LD50）的测定和计算【目的】通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。

【材料】1、器材：鼠笼，天平，1ml注射器。

2、药品：2%盐酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。

3、动物：小鼠（体重17～25克，雌雄均可，应注明性别）。

【方法和步骤】1、探索剂量范围：取小鼠8-10只，以2只为一组，选择剂量间距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在105～150mg/kg范围内）。

本步骤可由教研室预先进行。

2、正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1：0.7或1：0.8），各剂量组动物数为10只，分别用苦味酸标记。

动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。

最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。

实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组（10只小鼠），或每组各作每一剂量组的2只小鼠，务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药物所致的死亡，得到较理想的结果。

中剂量组：200mg/kg，2%浓度换算成体积为：0.1ml/10g，相邻剂量之间比例为1：0.85常态，故观察30分钟内的死亡率。

4、计算LD50及其95%可信限：LD50计算方法有多种，这里介绍最常用的加权直线回归法（Bliss法）。

此法虽计算步骤稍繁，但结果较精确，实际应用时可借助于计算机。

首先，用较大的剂量间距确定致死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量按等比方式设计，相邻两个剂量间距比例在0.65-0.85之间，给药后观察7-14天内动物一般情况和死亡数，根据死亡率计算LD50。

药物半数致死量(LD50)的测定

药物半数致死量(LD50)的测定
因的作用。
对照原则
例二：家兔失血性休克及其抢救
空白对照组 单纯失血组 失血+抢救组 失血+右旋糖酐组 失血+NaHCO3组 失血+山莨菪碱组
两组比较证明休克 是由于失血引起。 两组比较证明休克 恢复是抢救的结果。
组间比较分析何种 抢救措施更好。
实验设计的三大原则
对照
医学科 学研究
随机 重复
随机分配：实验对象分配到各 组的机会均等。
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
药物半数致死量 （LD50）的测定
实验要求
▪掌握测定药物LD50和ED50的药理学 意义和方法（改进寇氏法） ▪熟悉序贯法的特点、实验方法和计 算方法
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
3.实验设计
医学科 学研究
实验设计也称为科研构思，是针对 题意为验证假说所形成的基本思路和设 想。要掌握三要素和三原则。
实验对象 处理因素 观察指标
对照原则 随机原则 重复原则
实验设计的三大要素
医学科 学研究
1.实验对象 (相似性、特殊性、标准化、
规格化、 经济性原则)
1)人 2)动物
①合适、经济。
②品种、纯度。
③年龄、性别、体重、健康状况。

普鲁卡因半数致死量LD的测定

•Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无
严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。
•改良寇试法简便而计算较为精确。
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。
2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程
• 4.LD50的95%可信区间
• Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
传统计算方法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤：
•
启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
进入半数有效量选项。
•
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数 据。
• •
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入
一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
分组方式：
组号 鼠号 1* 1 5 4 3 2 …… 2* 2 1 5 4 3 3* 3 2 1 5 4 4* 4 3 2 1 5 5* 5 4 3 2 1
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求
• 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。
• 3.各组动物数相等或相近。
• 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最
好再80%~120%范围内。
• 计算LD50
• 1. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率
100%： • LD50=lg-1（Xm-i（Σp-0.5）） • p ——各组动物死亡率 • Xm——最大剂量的对数 • i ------相邻两组对数剂量差值

普鲁卡因LD50的测定

适用班级：授课时间：指导教师：普鲁卡因LD50的测定【目的要求】通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。

【实验用品】仪器：注射器、针头、鼠笼、天平动物：小鼠体重17～25g（♂♀各半，应注明性别，实验前禁食12h，不禁水）药品：2%普鲁卡因溶液【方法】（1）探索剂量范围取小鼠8～10只，2只为一组，分成4～5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡剂量的所在范围（参考剂量164mg/kg，最大剂量250mg/kg）。

（2）进行正式实验在预初实验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用3～5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间呈1：0.8或1：0.7）。

尽可能使半数组的死亡率都在50%以上，另半数组的死亡率都在50%以下。

各组的动物数应相等或相差无几，每组10只，动物的体重和性别要分层随机均匀分配。

完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。

最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。

（3）统计实验结果给药后经过一定时间，清点各组的死亡小鼠数。

用改良寇氏法计算普鲁卡因的LD50。

（4）课堂实验将结果用改良寇氏法计算LD50。

取小鼠50只，随机分成5组，按表中剂量分组给药，腹腔注射2%盐酸普鲁卡因，观察并记录表中项目，小鼠注射1～2min出现中枢兴奋，后转为抑制，最后死亡。

不死者一般在15～20min内恢复正常，故观察30min内死亡即可，将结果列入实验表1。

实验表1 普鲁卡因急性毒性实验数据表【结果分析】用改进寇氏法计算LD50。

【计算方法】LD50=lg-1［X m-i（∑P-0.5）］式中X m为最大剂量的对数值;i为相邻两组对数剂量的差值(大剂量组减小剂量组);P为各组动物的死亡率(以小数表示);∑P为各组动物死亡率的总和(P1+P2+P3+．．．．．．) LD50的标准误;S lg LD50=i√（∑P-∑P2）/（n-1）式中S为标准误；lg LD50为LD50的对数值；∑P2为各组动物死亡率平方之和；n为每组的动物数。

普鲁卡因半数致死量的测定


根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物 质危险划分为五个等级
①“0”：无毒性，LD50>15 g/kg； ②“1”：实际无毒性，5 g/kg<LD50<15 g/kg； ③“2”：轻度毒性，0.5 g/kg<LD50<5 g/kg； ④“3”：中度毒性，50 mg/kg<LD50<500 mg/kg； ⑤“4”：高度毒性，LD50<50 mg/kg
• 3.标准物 • SlgLD50=i√[(Σp-Σp2)/(n-1)]
• 4.LD50的95%可信区间 • Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
Bliss法
传统计算方法
Bliss法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤： • 启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
• 1.体重相近（20±2g）。 • 2.健康，雌雄各半。 • 3.怀孕雌鼠剔除不用。Fra bibliotek随机原则
• 随机原则：是指在抽样时排除主观上有意识地 抽取调查单位，每个受试单位以概率均等的原 则，随机地分配到实验组与对照组。
【随机】
小鼠随机分组处理
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入 一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
计算LD50及其95%可信限
• 改良寇试法 • Bliss法
改良寇试法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。

药理学系存档半数致死量的测定


5号液
4ml 5号
【实验步骤】
? 正式实验
1．分组编号:取小鼠50只，随机（如何做？）分成5组，每组10只，♀♂各 半。
2．计算给药：由腹腔注射给药。（四分法） 3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列下表：
组别
1 2 3 4 5
结果记录表
剂量
动物数
（mg/10g） （只）
10 10 10 10 10
半数致死量(LD50)（ Lethal Dose， 50%）的测定
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验 长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验： 1～7d
? 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起
试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表 示。
死亡数 （只）
死亡率 （%）
小鼠的腹腔注射方法
抓好后将小鼠保持头低位
4.实验观察 30min后进行数据统计 5.计算 LD50及其 95%可信限 采用改良寇氏法计算各参数步骤：
【注意事项】
? 给药剂量准确 ? 小鼠腹腔注射 ? 分组（5组），给药从中间剂量给药
【思考题】
1. LD50和ED50定义？ 2.治疗指数的意义?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
2．确定组数、计算各组剂量：
? 组数（n）：5组
? 按公式求公比r: 1 ? n?1 D m ? 按公比求各组剂量：rD1，D2D，n …,Dn，其中D1= Dm=最大剂量、
D2= D1·r ,…，Dn= Dn-1·r, Dn 最小剂量
3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.2ml/10g，
2.了解LD50、ED50及治疗指数的意义。
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启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项， 再进入半数有效量选项。

一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关 数据。

单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
【注意事项】

给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
C母
D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
【实验材料】

实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，
实验前禁食12h,不禁水。

实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。

实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride）
【实验步骤】

预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:

盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。

LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，Dn）。
2．确定组数、计算各组剂量：

组数（n）：5组 按公式求公比r:
r
n 1
r=1.25
D D
m n
按公比求各组剂量：D1，D2，…,Dn，其中D1= Dn=最小剂量、
D2= D1·r ,…，Dn= Dn-1·r, Dm
3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.1ml/10g， 按下列公式计算浓度：

Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分 组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率， 是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐， 故现多采用计算机程序计算。

我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评 定必须采用的方法。
实验部分 【实验目的】
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。
剂量 （ml/10g）
0.12 0.11 0.10 0.091 0.082
动物数 （只）
10 10 10 10 10
死亡数 （只）
死亡率 （%）
小鼠的腹腔注射方法
抓好后将小鼠保持头低位
4.实验观察30min后进行数据统计 5.计算LD50及其95%可信限 采用Bliss法程序计算各参数步骤：
1号液 2号液 3号液 4号液 5号液
2ml
1号
2ml
2号
2ml
3号
2ml
4号
2ml
5号
【实验步骤】

正式实验
1．分组编号:取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，♀♂各半。
2．计算给药：由腹腔注射给药。
3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列 下表：
结果记录表 组别
1 2 3 4 5
药物半数致死量(LD50)的测定
药理学实验
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验
长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验：1～7d

半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够
引起试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量
的对数值表示。

测定LD50意义
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 TI=LD50/ED50