半数致死量的测定..

Reed-Muench法物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。

中和试验 (Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。

中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。

如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。

中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于：1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。

2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间较长。

动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。

3.分析病毒的抗原性。

毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。

用组织细胞进行中和试验，有常量法和微量法两种，因微量法简便，结果易于判定，适于作大批量试验，所以近来得到了广泛的应用。

(一) 定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)1.病毒毒价的测定毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。

但由于剂量的递增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。

而一般在死亡率越接近50％时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。

常见的药物半数致死量(LD50)的测定1. 阿司匹林阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。

在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。

2. 青霉素青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。

需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。

3. 地高辛地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。

在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。

4. 吗啡吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。

在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。

5. 苯巴比妥苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。

在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。

需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。

因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。

同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。

当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。

6. 氯霉素氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。

然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。

7. 哌甲酯（利他林）哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。

需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。

8. 硫酸亚铁硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。

测定ld50的方法
LD50的方法是通过给试验动物（通常是小鼠或大鼠）以不同剂量的物质，然后观察其死亡率来确定该物质对生物体的毒性程度。

LD50是指半数致死量（Lethal Dose 50），即致死一半动物所需的剂量。

LD50的测定方法包括以下几种：
1.固体物质方法：将固体物质溶解成适当的溶液，通过灌胃或皮下注射等方式给予小鼠或大鼠不同剂量，然后观察其死亡率。

2.液体物质方法：将液体物质稀释成一系列不同的浓度，然后通过灌胃或静脉注射给予试验动物，观察其死亡率。

3.气体物质方法：将气体物质暴露给试验动物，通常通过密封的容器或特定装置来控制气体浓度和曝光时间，然后观察其死亡率。

4.皮肤接触方法：涂抹或注射测试物质于试验动物的皮肤上，然后观察其死亡率。

测定LD50的实验通常需要一系列的试验动物和剂量，可以通过统计方法计算出剂量-死亡率的关系曲线，从而确定LD50值。

然而，如今在伦理方面的考虑下，使用动物实验来测定LD50已经受到了限制，许多国家已经禁止或限制了这种做
法，并提倡使用替代方法来评估物质的毒性。

测定半数致死量：实验器材：鼠笼，天平，砝码，1ml注射器，伤寒杆菌（细菌浓度1%、1.18%、1.14%、1.68%、2%；苦味酸。

实验方法：第一步：试验动物选择原则：1.种属：昆明鼠2.年龄、体重3.性别：雌鼠对药物的敏感性稍大于雄鼠。

雌雄各半。

实验前禁食12小时。

第二步：探索剂量范围。

已知MLD为100mg/kg，LD100为200mg/kg第三步：均衡随机分组。

每小组取50只小鼠，称重，标号，随机分为5组，为了避免各组的实验误差，应先将雌雄鼠分开，然后分别随机分到各组，保证每组动物中雌雄小鼠数量相同，体重相近。

第四步：各组剂量计算。

用寇氏法计算LD50，各剂量组要求按等比级数排列。

经过预实验，得知最大剂量也就是死亡率为100%的剂量为200mg/kg，最小剂量也就是死亡率为0%得剂量为100mg/kg，然后按照下列公式求出各组剂量间的比值，计算出各组剂量。

第五步：给药观察和记录。

在各实验组剂量确定以后，即可给药，给药后观察动物的一般情况，并记录动物死亡时的症状和死亡时间，按新药报批要求，一般需观察7天，因为学生实验时间有限，所以我们今天只观察2个小时。

2小时后，统计各组死亡率（用小数表示）。

第六步计算方法。

经上述实验得出各组死亡率之后，按下列公式计算LD50及其标准误和可信限。

LD50=log-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm ；I ；∑P；LD50的可信限=LD50(P+0.95)=LD50±2.68LD50(P=0.99)由于整个半数致死量实验比较繁琐，所需时间比较长，所以今天同学们作实验只需从第三步做起，也就是在已知MLD和LD100的情况下，求LD50。

做完实验后请同学们思考两道题。

在做实验之前，介绍一下小鼠的捉拿、标记及腹腔注射的方法。

小鼠牙长而尖锐，如果激怒它则容易被咬伤。

所以捉拿时动作要轻缓，现用右手拎住小鼠尾巴放于粗糙面上，轻轻向后拉扯，再用左手的拇指及食指抓住其两耳之间及关颈部皮肤，然后将小鼠腹部上翻，用左手无名指和小指夹住尾巴使其固定。