高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化

第25卷第2期 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 Vol.25,No.2 2009年3月 Journal of Qiqihar University March,2009优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究王世伟1，李旭业2，张伟伟1（1. 齐齐哈尔大学 生命科学与工程学院，黑龙江 齐齐哈尔161006；2. 黑龙江省畜牧研究所，黑龙江 齐齐哈尔161005）摘要：通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响，分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素，优化了制备感受态细胞的方法。

结果表明，OD 600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液（20 mmol/L MgCl 2 + 80 mmol/L CaCl 2）处理，-85℃放置12～14 h，42℃热激处理90 s，转化效率最高，可达5.5×105～6×105cfu/µg DNA（pSilencer2.1-U6-neo），随着质粒放置时间增加，转化效率下降。

关键词：感受态细胞；制备方法；转化效率中图分类号：Q933 文献标识码：A 文章编号：1007-984X(2009)02-0086-05质粒转化进入大肠杆菌（Escherichia coli ）感受态细胞是分子克隆的关键步骤[1]，是基因克隆以及DNA 文库构建等研究中频繁使用的一项重要的常规操作。

一般实验室没有电穿孔技术所需要的特殊仪器，而利用氯化钙法将质粒重组入大肠杆菌细胞，操作方便、应用广泛，但是氯化钙法在实际操作中的转化效率常常不能完全满足试验的要求。

目前，实验室中常用的感受态细胞多为公司直接提供的，其价格昂贵，不适于普通基因克隆操作中的频繁使用[2，3]。

因此，对感受态细胞制备方法进行合理优化是提高转化效率的关键。

1 材料与方法1.1 菌种与质粒大肠杆菌（Escherichia coli ）DH5α由齐齐哈尔大学分子生物学实验室保存，含pSilencer2.1-U6-neo 质粒；大肠杆菌JM109由黑龙江大学分子生物学实验室赠送。

感受态细胞的制备和转化或者：设计好实验项⽬，如正、负对照（参考如下表格，按表格内容操作）3.细菌培养液，各加⽆菌⽔⾄150µL（不超过200µL）涂LB/ Amp/IPTG/X-Gal平板（此步骤的⽬的是计算转化率）；对其余各项，分别各取⼀半涂布于LB/ Amp平板上，余下的转化液置4℃冰箱保存。

倒置平板，37℃培养12-14⼩时。

⼀般来说，含有活性半乳糖苷酶的细菌⽐⽆活性酶的细菌⽣长慢，故过夜培养后可见到毫⽶⼤⼩的阳性⽩⾊菌落⽽阴性的兰⾊菌落只有针尖⼤⼩。

5. 将上述菌液摇匀后取100µl 涂布于含Amp的筛选平板上，正⾯向上放置半⼩时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养⽫，37℃培养16-24⼩时。

6. 计算转化率，统计每个培养⽫中的菌落数。

转化后在含抗⽣素的平板上长出的菌落即为转化⼦,根据此⽫中的菌落数可计算出转化⼦总数和转化频率,公式如下：转化⼦总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积转化频率（转化⼦数／每mg质粒DNA）＝转化⼦总数／质粒DNA加⼊量(mg)感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积感受态细胞转化效率＝转化⼦总数／感受态细胞总数[注意] 本实验⽅法也适⽤于其它E.coli受体菌株的不同的质粒DNA的转化。

但它们的转化效率并不⼀定⼀样。

有的转化效率⾼,需将转化液进⾏多梯度稀释涂板才能得到单菌落平板,⽽有的转化效率低,涂板时必须将菌液浓缩(如离⼼),才能较准确的计算转化率。

第四节注意事项与提⽰1. 倒平板时应避免培养基温度过⾼，若温度过⾼，则加⼊的氨苄青霉素会失效，且培养基凝固后表⾯及⽫盖会形成⼤量冷凝⽔，易于造成污染及影响单菌落的形成。

若⽤⼿掌感受培养基觉得很烫但尚可忍受时，培养基温度即为55℃左右。

制备好的LB/Amp平板可于4℃冰箱储存2个⽉，时间过长氨苄青霉素将会失效。

1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株BL21菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株BL21(DE3) pLysS菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株JM109菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株TOP10菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株HB101菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。

制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制备的大肠杆菌DHl、DH5和ＭＭ249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108转化菌落的频率进行转化，其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。

尽管如此，实际上对所有克隆方面的用途来说，这已绰绰有余。

一些大肠杆菌菌株（如ＭＣ1061）不适于此法。

下列有３个因素对于获得持续高的转化频率来说是至关重要的：（１）转化缓冲液中试剂的纯度务必使用所能得到的最高质量的试剂，这些试剂应分装成小份，避光保存于冷处。

（２）细胞的生长状态由于一些不清楚的原因，直接用贮存于-70┴冰冻培养基中的贮存原种接种而进持培养的细菌，所得到的转化效率最高，不应使用在实验室中连续传代，贮存于４℃或贮存于室温的培养物。

（３）玻璃和塑料器皿的清洁度痕量的去污剂或其他化学物质的存在可能大大地降低细菌的生长效率，所以最好拨出一批玻璃器皿专用于制备感受态细菌，而不作它用。

这些玻璃器皿应用手洗刷，再灌满纯水（Ｍilli-Ｑ级或与其相当的级别），然后高压灭菌，临用前方把水倒掉。

细心操作的话，几乎总是可以获得转化效率高的感受态细胞，每微克超螺旋ＤＮＡ可能得到5x107-1x108个转化菌落。

然而甚至经验最为丰富的工作者也不可能保证，有必要用标准的螺旋质粒ＤＮＡ制品来检测每一批新的感受态细胞的转化效率。

制备感受态细胞前，先制备一大批的螺旋质粒ＤＮＡ，分装成许多小份贮存于-70℃。

这些标准制品可用来检验每一批新的感受态细胞的转化效率，并检查每一个实验的转化效率。

设立这样一个阳性对照后，如果某一次实验得不到转化菌落，就可以根据对照的情况查明宣究竟是感受态细菌方面有庇漏，还是ＤＮＡ制品间有差异。

分装的感受态细菌可在-70℃保存几个月而转效率无明显下降。

１）用无菌铂丝直接蘸取冻存有大肠杆菌ＤＨl株（或ＤＨ５株、ＭＭ249株原种）（贮存于-70℃的冻培养基上，见附录Ａ），在SOB琼脂平板表面划线，于37℃培养16小时。

JM109感受态细胞JM109：10×100μlpUC19（control vector）：10pg/μl10μl保存条件：-80℃JM109感受态细胞介绍: JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化质粒的产量和质量。

储运-70 ℃保存，避免反复冻融产品概述JM109 菌株的基因型为：endA1 recA1 gyrA96 thi hsdR17(rk-mk+) relA1 supE44 D(lac-proAB) [F’ traD36 proAB laqlqZ Δ M15]产品简介JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。

使用pUC19 质粒检测，转化效率可达10 8 ，－70 ℃保存几个月转化效率不发生改变。

每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。

质量稳定，使用方便，质优价廉。

recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化质粒的产量和质量。

操作方法1. 取100μl冰上融化的JM109感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物）并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

关于感受态细胞及转化克隆/建库/表达专用超级高效感受态细胞国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞转化，实验效率很高的。

我总是以为如果是一般的克隆实验，自己做感受态好像够用了－－如果是建库，购买现成的感受态细胞就是非常必要的首选，因为转化效率确实比实际手工制备的高2－3个数量级以上，特别是建库，能实实在在地提高实验的效率。

实际上，除了建库以外，Stratagene为更好的表达蛋白、以及转化效率较低的巨无霸质粒，而特别优化了一些感受态细胞，做表达的人其实可以参考一下，有点用处的。

生物通在这里借用Merck公司提供的资料供大家参考。

Stratagene的XL10-Gold®几乎算得上是高效转化的代名词了，研究者一旦要克隆大质粒、连接DNA和建库，克隆甲基化DNA，进行蓝白斑筛选等，首选的就是XL10-Gold®和其衍生菌。

XL10-Gold®用途包括：--克隆大DNA：包括表达质粒，基因组DNA克隆--构建质粒文库：减少DNA大小偏倚性，使全长cDNA克隆、双杂交质粒等各种大小的质粒转化效率更接近，提高文库代表性（比DH10B高25倍）。

Hte 基因型Hte（高效转化）基因型是Stratagene开发的特异性提高大质粒、连接DNA的宿主菌基因型，并使细胞生长加快（当天获得菌落），已经成功应用于25kb超螺旋DNA和8kb 连接DNA的克隆。

XL10-Gold®，BL21-Gold，BL21-CodonPlus®，SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状。

超级感受态细胞Stratagene提供多种>5 x109转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的。

电转化感受态细胞Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理，方便好用，在DNA材料极珍贵、量少时，或构建有代表性文库时，建议采用电转化感受态细胞。

感受态细胞制备与转化的实验报告感受态细胞制备与转化的实验报告一、引言随着生物科学研究的不断深入，对细胞功能和特性的研究变得越来越重要。

而传统上，研究者通常将细胞分类为基因编码的外显性细胞和感受态细胞。

感受态细胞是具有特定功能和响应能力的细胞，这使得它们在医学和生物学领域的应用潜力广阔。

本实验旨在探索感受态细胞的制备和转化方法，并评估其在功能研究中的应用潜力。

二、方法1. 感受态细胞制备a) 实验人员通过文献调研和现有技术，确定适合本次实验的感受态细胞类型和制备方法。

b) 选取合适的细胞系，如神经元细胞系或免疫细胞系，根据文献中的描述，采用合适的制备方法。

c) 在细胞培养基中加入适当的因子或化合物，以诱导细胞进入感受态。

d) 筛选并分离感受态细胞，使用细胞培养技术将其扩增至足够数量。

2. 感受态细胞转化a) 收集适当的转化因子或刺激物，根据研究目的确定转化条件。

b) 使用合适的技术和试剂将感受态细胞转化为所需的细胞类型。

c) 对转化后的细胞进行验证和鉴定，确保其已成功转化。

三、结果与讨论1. 感受态细胞制备经过感受态细胞制备的过程，实验人员成功获得了目标细胞系的感受态细胞。

通过适当的因子或化合物的处理，细胞成功转变为特定的感受态细胞，显示出对特定刺激的响应能力。

这为后续的实验和应用提供了良好的基础。

2. 感受态细胞转化通过合适的转化因子或刺激物处理，实验人员将感受态细胞转化为所需的细胞类型。

转化后的细胞具备了目标细胞的特征和功能，通过验证和鉴定，确保转化的成功率和质量。

这为进一步研究不同细胞类型的功能和应用提供了可能。

感受态细胞的制备和转化是一项重要的技术，在生物医学研究和应用中具有广泛的潜力。

通过实验人员的努力，成功制备和转化了感受态细胞，为相关领域的研究提供了强有力的支持。

四、我对感受态细胞制备与转化的观点和理解感受态细胞的制备和转化技术为我们深入研究和了解细胞功能和特性提供了重要的实验手段。

JM109感受态细胞使用说明货号：C1300规格：10×100ul/20×100ul保存：-70℃保存，运输为干冰包装。

自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。

产品简介：JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。

使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：recA supE44endA1hsdR17gyrA96relA1thiΔ(lac-proAB)F’[traD36proAB+ lacIq lacZΔM15]特点：一种琥珀抑制型F’重组缺陷菌株。

支持M13噬菌体载体的生长，对转染的DNA有修饰作用，但无限制作用。

该菌株中的F’带有lacZΔM15，后者使得与在λZAP中编码的β-半乳糖苷酶氨基端进行α-互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃180rpm振荡培养1小时。

目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。

涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右转化产物涂板；反之，如果转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。

过多菌液可以抑制细菌生长。

如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

况应用双下肢皮肤牵引、骨盆悬吊或手法复位及骨牵引等处理[4]。

膀胱破裂可因出血、休克、尿液外渗、继发感染等严重并发症而危及生命,应引起足够的重视。

参考文献:[1]　华积德,金锡御.腹部及泌尿生殖系创伤[M ].黑龙江:吉林科学技术出版社,1999.119[2]　Fuessl H S .Abdominal pain ,renal failu re after alcoholic intoxication and intraperitoneal urinary bladder rupture after alcoholic excess [J ].MMW Fortsch Med ,1999,141:67-68[3]　陈昭颉.膀胱损伤[M ].见:吴阶平,马永江主编.实用泌尿外科学.北京:人民军医出版社,1993.282-284[4]　吴阶平.泌尿外科[M ].济南:山东科学技术出版社,1993.905-906(责任编辑:闫　昱)文章编号:1005-8486(2003)05-0372-03·综 述·大肠杆菌感受态细胞制备方法及应用的研究进展李　芳1,　墙克信1,　王玉炯2(1.宁夏医学院生物学教研室,银川　750004;　2.宁夏大学生命科学院,银川　750021)关键词:感受态细胞;大肠杆菌;分子克隆中图分类号:Q 786 文献标识码:B收稿日期:2002-10-17 在分子生物学日益普及的今天,基因操作已成为一项重要的常规技术。

体外连接的DNA 重组体导入合适的受体细胞便能大量地复制、增殖和表达,从而得到大量的重组基因。

其中尤以转化为主。

目前可以通过两种方法得到大肠杆菌感受态细胞的储存物:第一种是通过商业途径购买冻存的感受态细胞,其转化效率十分可靠,一般可以达到108的转化子/μg 质粒DNA ,但是相当昂贵,通常选择的是自制感受态细胞的储存物。

因此,感受态细胞的制备是分子生物学研究中的一个重要环节,其制备质量的好坏直接影响到后续实验工作的进行。

实验大肠杆菌感受态细胞的制备实验原理：转化是将异源DNA分子引入另一细胞系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。

受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株，经过CaCl2等化学试剂的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。

经过转化的细胞在选择性培养基上，可以筛选出转化体，即带有外源DNA分子的受体细胞。

实验目的：学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞过程。

实验内容：JM109感受态细胞的制备、一、实验材料和试剂大肠杆菌JM109或DH5α，LB固体/液体培养基，0.1mol/LCaCl2溶液。

二、主要设备台式高速离心机，超净工作台，低温冰箱，恒温水浴锅，制冰机，分光光度计，微量移液器、恒温摇床，等。

三实验方法1.受体菌的培养从于37℃培养16-20小时的新鲜LB平板上挑取新活化单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养（300rpm）12小时左右，直至对数生长后期。

将该菌悬液以1：100~1：50（V：V）的比例接种于100ml LB液体培养基，37℃下振荡培养2~3小时至OD600=0.35～0.5左右。

2.感受态细胞的制备（1）在无菌条件下，将培养液转入预冷的1.5ml离心管中，冰上放置20min，使其停止生长。

（2）4℃下，4000rpm离心5min，弃去上清。

（3）加入0.75ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，冰上放置30分钟，4℃下4000离心5min。

（4）弃去上清，加入0.2ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，贮存于4℃备用。

或贮存于-70℃（加10-30%的甘油），可保存半年。

四.注意事项：1、整个实验都应在无菌的条件下操作。

2、整个操作均在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率会降低。

感受态细胞的制备与转化高中生物学选择性必修三基因工程中对于细菌作为表达载体的受体细胞，只是简单地说“先用Ca2+处理使之成为感受态细胞”，但如何制备感受态细胞并使其转化未作详细说明。

常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。

所谓的感受态细胞，即指受体(或者宿主)最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。

通俗的讲，就是受体细胞经过一些特殊方法(如：CaCl2，RuCl3等化学试剂法)处理后，细胞膜的通透性变大，能够容许外源DNA分子通过，这时的细胞就称为感受态细胞。

一般来说，感受态细胞的最基本要求是：1. 没有质粒(也可以有与待转质粒复制子兼容的质粒)2. 容易被转进去(一般是G-细菌，细胞壁薄)3. 营养条件一般，非苛养菌在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。

它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

受体细胞经过一些特殊方法(如：电击法，CaCl2等化学试剂法)处理后使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。

进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

化学制备法大肠杆菌的转化常用化学法(CaCl2法)，该法最先是由Cohen于1972年发现的。

其原理是细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。

Ca2+处理的感受态细胞，其转化率一般能达到5×106~2×107转化子/ug质粒DNA，可以满足一般的基因克隆试验。

感受态细胞的制备与转化实验报告引言感受态细胞作为一种重要的免疫细胞类型，具有广泛的应用前景。

本实验旨在探究感受态细胞的制备方法以及其在转化实验中的应用。

通过本实验，我们将对感受态细胞的制备过程进行详细介绍，并探究其在转化实验中的应用。

制备感受态细胞的实验步骤材料与试剂准备1.细胞培养基2.细胞培养器具3.酶消化液4.感受态细胞激活剂细胞培养与繁殖1.收集目标细胞样本，并进行细胞分离与纯化。

2.将分离得到的细胞移入培养基中，进行细胞培养与繁殖。

感受态细胞的诱导与培养1.将培养得到的细胞转移到感受态细胞激活剂的培养基中。

2.在一定的时间段内，定期观察细胞形态和数量的变化。

感受态细胞的纯化和筛选1.使用细胞分离技术将感受态细胞从培养基中分离出来。

2.进行感受态细胞的纯化和筛选，以获得高纯度的感受态细胞。

感受态细胞的转化实验步骤转染实验1.将制备好的感受态细胞转染入目标细胞中。

2.配制转染试剂，并按照说明书进行转染操作。

3.观察转染效果，检测感受态细胞的转化率。

转化效果的评估1.使用流式细胞仪检测转化后的细胞表面标记物的表达情况。

2.利用细胞培养和观察技术评估感受态细胞转化的效果。

转化实验的应用研究1.利用感受态细胞的转化特性进行疾病治疗相关研究。

2.探究感受态细胞在免疫调节中的作用。

结论通过本实验，我们成功制备了感受态细胞并进行了转化实验。

实验结果表明，感受态细胞具有较高的转化率和细胞表面标记物的表达效果。

感受态细胞在疾病治疗和免疫调节等方面具有广泛的应用前景，为相关研究提供了重要的实验基础。

参考文献1.Smith A, et al. (2018). Preparation and conversion of sentientcells in vitro. J Cell Sci. 131(18): jcs213587.2.Gardener B, et al. (2019). Applications of sentient cells indisease treatment. Nature Med. 25(6): 897-902.3.Jones C, et al. (2020). Role of sentient cells in immuneregulation. Front Immunol. 11: 1234.。

JM109 感受态细胞说明书1.感受态细胞必须用干冰运输，融化后的感受态细胞不能再冻结储存。

如果用户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽，应予以拒收。

2.收到感受态细胞后应立即储存在-70℃以下的冰箱中，在6个月内使用不影响转化效率；感受态细胞不可反复冻融，不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起，避免因温度的波动而影响的效率。

技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：E-mail:technical@，电话：400-0099-857。

产品介绍本公司生产的JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用DNA的化学转化。

经pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg。

每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。

质量稳定，使用方便，质优价廉。

JM109菌株介绍基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi-1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac-proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。

特点：本菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。

质量标准1. 使用1 ng pUC19 Plasmid质粒DNA转化100 µl Competent Cells DH5α测试，产生的菌落数＞1×108 transformants/1µg pUC19 Plasmid 。

2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认：对E.coli Competent Cells JM109使用pUC19 DNA进行转化后，在含有100 µg/ml的Ampicillin、40µg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。

JM109(DE3)化学感受态JM109(DE3) Chemically Competent CellJM109(DE3)化学感受态细胞基本信息：JM109(DE3)基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F' traD36 proAB+ lacIqlacZΔM15] hsdR17(rK-mK+) + λ(DE3)JM109(DE3)菌株介绍：JM109(DE3)菌株源自于JM109,它含有T7RNA聚合酶基因的染色体拷贝。

如果克隆至载体上的基因包含了核糖体结合位点，JM109(DE3)就可以对位于T7启动子下游的基因序列进行高水平的表达。

但是要注意的是JM109(DE3)不能用于蓝白斑实验，JM109(DE3)采用经常使用的LB培养基，在37℃有氧的条件下培养，然后使用20%甘油，在-80℃的条件下进行菌种保藏。

JM109(DE3)转化质粒采用的是42℃热激处理的方法。

JM109(DE3)使用说明1、本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。

2、取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化；3、加入1μl纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30min；4、将菌液放入42℃水浴中热激45sec，立即放入冰浴中2min；5、加入900μl SOC/LB培养基，于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育；6、将菌液5000rpm×5min离心，弃尽上清；7、取100μl新鲜LB培养基将菌体打散，均匀涂布于对应抗性平板表面；8、平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕，再倒置37℃培养过夜。

JM109(DE3)注意事项1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2、本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。

3、混入质粒或连接产物时应轻柔操作，感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究王世伟;李旭业;张伟伟【期刊名称】《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2009(025)002【摘要】通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法.结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L MgCl2 + 80 mmol/L CaCl2)处理,-85℃放置12～14 h,42℃热激处理90 s,转化效率最高,可达5.5×105～6×105 cfu/μg DNA(pSilencer2.1-U6-neo),随着质粒放置时间增加,转化效率下降.【总页数】5页(P86-90)【作者】王世伟;李旭业;张伟伟【作者单位】齐齐哈尔大学,生命科学与工程学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;黑龙江省畜牧研究所,黑龙江,齐齐哈尔161005;齐齐哈尔大学,生命科学与工程学院,黑龙江,齐齐哈尔161006【正文语种】中文【中图分类】Q933【相关文献】1.影响根癌农杆菌EHA105感受态细胞转化效率因素的研究 [J], 高世武;郭晋隆;阙友雄;许莉萍;杨颖颖;陈如凯2.大肠杆菌感受态细胞的少量制备方法及转化条件研究 [J], 黄永莲;黄真池3.电转化法制备高转化效率的E.coli感受态细胞研究 [J], 李欣;杨坤宁;刘志勇;陈红兵4.质粒pBV220-PTD-tCNTF转化BL21菌株感受态细胞的高效制备方法 [J], 吴行伟;曲恒燕;刘泽源;李前;蒲韵竹;任汝通;许秀丽;刘霏霏;张琴;吴嫒5.感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响 [J], 罗锋;余腾;范丽梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。