痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达研究
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解剖科学进展ProgressofAnatomicalSciences2010Jan,16(1):89.91,93脊髓损伤后骨骼肌变化及预后的研究进展刘卉芳,刘德明+(南昌大学医学院人体解剖学教研室,江西南昌330006)【摘要】脊髓损伤是脊柱骨折严重的并发症。
由于椎体的移位或碎片骨突出于椎管内,使脊髓产生不同程度的损伤。
在脊髓损伤之后,其效应器之一,骨骼肌将不可避免的发生一些相应的变化:凋亡、萎缩、运动单位的改变;肌肉兴奋性、收缩能力的改变;肌球蛋白重链的表达以及3—磷酸甘油脱氢酶活性的改变等,这些变化影响脊髓损伤的预后及患者的生活质量。
目前针对脊髓损伤后骨骼肌变化的研究方法主要是从运动训练及电刺激这两方面。
【中图分类号】1{338.2"1【文献标识码】A【文章编号】1006-2947(2010)01-0089-03ChangesandprognosisofskeletalmuscleafterspinalcordinjuryLIUHui-fang,LIUDe—-ming"(Dt!pImⅫ蚍ofAnatomy,MedicalCollegeofNanchangUniversity,JiansxiNanchang330006China)【Abstract】Spinalcordinjuryisaseriouscomplicationofspinalfracture.Duetothedisplacementofvertebralorbonefragmentsinsertedintothespinalcanaltherearedifferentlevelsofspinalcordinjury.Afterthespinalcordinjury,manyclIangeswilloccurinskeletalmu∞le,such棚apoptosis,atrophy,motorunitnumber,irritability,contractility,expressionofmyosinheavychainaswellastheactivityof3-phosphoglyeeratedehydrogenase.Thesechan移affecttheprognosisofspinalcordinjnryandqualityofpatients’life.Currentstudyonch肌g∞inskeletalmuscleafterspinalcordinjurymainlyfocusesonsportstrainingandelectricalstimulation.脊髓损伤后机体会发生一系列的改变,大部分是由于直接损伤造成,另外神经活动的减少、骨骼肌萎缩、肌无力等也起一部分作用。
针刺康复疗法影响脑性瘫痪模型大鼠大脑病变组织生长相关蛋白43和突触小泡蛋白的表达侯玉晋;康豪鹏【摘要】背景:针刺联合康复治疗是目前脑性瘫痪最有效的治疗方法,生长相关蛋白43和突触小泡蛋白是神经发育以及突触密度的特征性标记物,参与神经细胞的生长、修复、再生以及突触重塑。
<br> 目的:观察针刺联合康复疗法对脑性瘫痪大鼠大脑病变组织生长相关蛋白43和突触小泡蛋白表达的影响,探讨针刺联合康复疗法治疗脑性瘫痪的机制。
<br> 方法:将125只大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、康复组、针刺组、针刺康复组。
后4组均建立脑性瘫痪模型,假手术组和模型组不予治疗处理,康复组进行康复训练,针刺组给予针刺治疗,针刺康复组给予康复训练和针刺治疗。
<br> 结果与结论:①运动功能:针刺康复组模后第3-5周的运动功能评分优于模型组、康复组和针刺组(P<0.05);②生长相关蛋白43和突触小泡蛋白的表达:免疫组织化学染色显示,与模型组相比,康复组、针刺组和针刺康复组在第2-4周时大鼠大脑病变组织生长相关蛋白43的表达,建模后4,5周突触小泡蛋白的表达均升高(P<0.05),其中针刺康复组均升高最明显(P<0.05)。
③结果表明,针刺联合康复疗法促进脑性瘫痪大鼠大脑病变组织生长相关蛋白43和突触小泡蛋白的表达,以此发挥神经保护作用。
%RESULTS AND CONCLUSION:(1) Motor function: The motor function scores were better in the acupuncture + rehabilitation group than in the model, acupuncture, and rehabilitation groups (P< 0.05). (2) Growth associated protein-43 and synaptophysin expression: immunohistochemical staining revealed that compared with the model group, growth associated protein-43 expression at 2-4 weeks andsynaptophysin expression at 4 and 5 weeks were higher in the acupuncture and acupuncture + rehabilitation groups(P<0.05); the increase in above expression was most significant in the acupuncture + rehabilitation group (P<0.05). (3) Results confirmed that acupuncture combined with rehabilitation promoted growth associated protein-43 and synaptophysin expression in rats with cerebral palsy and exerted neuroprotective effect.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2016(020)027【总页数】7页(P3999-4005)【关键词】实验动物;神经损伤与修复动物模型;针刺;康复训练;针康法;针刺治疗;脑性瘫痪;大鼠;生长相关蛋白43;突触小泡蛋白;运动功能【作者】侯玉晋;康豪鹏【作者单位】河南中医学院第二附属医院儿童脑病康复科,河南省郑州市450002;河南电力医院内一科,河南省郑州市450052【正文语种】中文【中图分类】R318文题释义:脑性瘫痪:是自受孕开始至婴儿期非进行性脑损伤和发育缺陷所导致的综合征,是因非进行性损伤引起的各种运动功能障碍为主的一种综合征,病变部位在大脑,经常累及四肢,伴有智力障碍、精神行为异常、听视觉及语言障碍等。
《肌球蛋白V持续运动特性的动力学研究》篇一一、引言肌球蛋白V(Myosin V)是一种分子马达蛋白,其运动特性在细胞内物质运输和细胞活动中扮演着重要角色。
了解其持续运动特性的动力学机制,对于理解细胞内物质运输和细胞运动等生物学过程具有重要意义。
本文旨在通过对肌球蛋白V持续运动特性的动力学研究,深入探讨其运动机制及影响因素。
二、文献综述肌球蛋白V作为一种分子马达蛋白,其运动特性在过去的几十年里受到了广泛关注。
早期研究表明,肌球蛋白V具有持续运动的能力,能够在细胞内沿着微管或肌动蛋白纤维进行定向运动。
随着研究的深入,人们发现肌球蛋白V的运动特性与其分子结构、化学环境以及与其他分子的相互作用密切相关。
目前,关于肌球蛋白V持续运动特性的动力学研究已经取得了一定的进展。
研究表明,肌球蛋白V的运动过程受到多种因素的影响,包括能量供应、环境pH值、温度等。
此外,与其他分子的相互作用也对肌球蛋白V的运动产生重要影响。
这些研究成果为进一步探讨肌球蛋白V的运动机制提供了基础。
三、研究方法本研究采用生物化学和分子生物学方法,结合动力学实验和计算机模拟技术,对肌球蛋白V持续运动特性的动力学进行研究。
具体方法包括:1. 制备肌球蛋白V样品,并对其进行纯化和活性检测;2. 设计不同条件下的动力学实验,包括改变能量供应、环境pH值、温度等;3. 利用计算机模拟技术,模拟肌球蛋白V的运动过程;4. 分析实验数据和模拟结果,探讨肌球蛋白V持续运动特性的动力学机制。
四、实验结果与分析1. 能量供应对肌球蛋白V运动特性的影响实验结果表明,在能量供应充足的情况下,肌球蛋白V的持续运动能力更强。
随着能量供应的减少,肌球蛋白V的运动速度和持续时间均会受到影响。
这表明能量供应是维持肌球蛋白V持续运动的重要因素之一。
2. 环境pH值对肌球蛋白V运动特性的影响实验发现,环境pH值对肌球蛋白V的运动特性具有显著影响。
在酸性环境下,肌球蛋白V的运动能力较弱;而在中性或碱性环境下,其运动能力得到显著提高。
运动疲劳对大鼠骨骼肌纤维GLUT4mRNA 和蛋白表达的影响作者:龚云王超来源:《首都体育学院学报》2017年第02期摘要:探讨运动疲劳引起大鼠骨骼肌纤维GLUT4mRNA和蛋白表达的变化及其可能机制。
方法:Wistar大鼠40只,隨机选取10只为正常对照组(D组),其余采用多级递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,留其成功的20只为疲劳组(P组);测试力竭运动后2组大鼠血糖、血尿素氮、血乳酸、血清胰岛素含量,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法测定股四头肌细胞GLUT4mRNA的表达,运用免疫组化法观测该部GLUT4蛋白的表达。
结果:力竭运动后即刻,实验组大鼠血糖、血清胰岛素含量均显著低于(P关键词:运动疲劳;骨骼肌纤维;GLUT4mRNA和蛋白表达;RT-PCR;免疫组化;大鼠中图分类号:G 804.2 文章编号:1009-783X(2017)02-0182-06 文献标志码:A在运动性疲劳外周机制的研究中,骨骼肌糖代谢是重要的聚焦点,其主要限速步骤是葡萄糖运载体4(GLUT4)介导的葡萄糖跨膜转运。
有研究显示,GLUT4的表达从根本上决定了其转运葡萄糖的能力;而这种葡萄糖转运能力的高低,又直接影响骨骼肌纤维糖氧化供能的底物水平。
巫菲等研究表明,慢性心力衰竭可致大鼠骨骼肌GLIT4mRNA表达显著降低。
龚豪杰等的研究显示:2周低氧及低氧训练均能引起野生小鼠骨骼肌GLUT4表达的增多;1 h不同强度跑台运动后,野生小鼠骨骼肌GLUT4基因表达量显著增加。
唐艳婕等研究结果显示,游泳训练使T2DM大鼠腓肠肌GLUT4蛋白表达增强。
杨晓冰的研究认为,运动可以提高胞膜内GLUT4转运速率,且能够增加大鼠骨骼肌细胞内GLUT4的含量,并促进骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取和利用。
运动性疲劳能量衰竭学说认为,运动疲劳时骨骼肌纤维葡萄糖几近耗竭、ATP 生成减少,运动能力下降而不能维持预定的运动强度。
造成这种结果的原因是否与骨骼肌纤维GLUT4的表达有关,相关报道尚不多见。
脑瘫康胶囊对痉挛性脑瘫大鼠模型细胞因子及肌张力的影响韩群英;荆志伟;荆志丽;孟庆法;王新歧【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2005(012)008【摘要】目的通过观察脑瘫康胶囊对痉挛性脑瘫大鼠模型血清一氧化氮合酶(NOS)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)含量及肌张力的影响,探讨脑瘫康胶囊治疗痉挛性脑瘫的作用机理.方法痉挛性脑瘫大鼠模型随机分为脑瘫康高剂量组、脑瘫康低剂量组、力奥来素组、模型对照组、假手术组5组.造模成功后均评定肌张力,药物连续灌胃5 d,再评定肌张力,测定血清NOS、TNF-α含量.结果脑瘫康高剂量组血清NOS、TNF-α含量降低,与模型组相比差异有显著意义(P<0.01),与力奥来素组相比差异有意义(P<0.05);脑瘫康低剂量组血清NOS、TNF-α含量的降低与模型组相比差异显著(P<0.05),与力奥来素组相比无显著性差异(P>0.05);脑瘫康高、低剂量组肌张力的降低与模型组相比差异有显著意义(P<0.01、P<0.05),与力奥来素组比较差异无显著性(P>0.05).结论脑瘫康胶囊可以抑制脑损伤后炎性细胞的释放,减轻免疫损伤,缓解肌肉痉挛,降低肌张力.【总页数】3页(P31-33)【作者】韩群英;荆志伟;荆志丽;孟庆法;王新歧【作者单位】河南省中医中风病工程技术研究中心,河南,郑州,450008;中国中医研究院,北京,100700;河南省人民医院,河南,郑州,450003;永城市中医院,河南,永城,476600;北京中医药大学,北京,100029【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.强骨康疏胶囊对去卵巢骨质疏松症模型大鼠细胞因子的影响 [J], 刘冬梅;袁林;苏林冲;冯佳;代玉芳;向导;向阳2.选择性脊神经后根切断术联合生物反馈综合治疗对痉挛性脑瘫患儿脑功能及肌张力的影响 [J], 涂博3.中药浴联合康复干预对痉挛性脑瘫患儿运动功能及肌张力的影响 [J], 张璞;侯江红;单海军4.康复训练与A型肉毒毒素对痉挛性脑瘫患儿肌张力恢复及日常生活能力的影响[J], 张姝妤5.基于真实世界的痉瘫康胶囊治疗小儿痉挛性脑瘫研究 [J], 王兴;庞芳;张玲因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
脑卒中后肢体痉挛大鼠模型制备方法谢志强; 谢莉娜; 郭斌; 刘未艾; 王彭汉; 黄麟荇; 岳增辉【期刊名称】《《中国中医药现代远程教育》》【年(卷),期】2019(017)005【总页数】3页(P103-105)【关键词】脑卒中; 肢体痉挛; 模型; 实验研究; 中风; 动物实验【作者】谢志强; 谢莉娜; 郭斌; 刘未艾; 王彭汉; 黄麟荇; 岳增辉【作者单位】湖南中医药大学针灸推拿学院湖南长沙410208【正文语种】中文脑卒中,是一种突发起病的脑血液循环障碍性疾病。
是当今三大主要死亡原因之一,同时也是目前第一致残疾病。
我国为脑卒中高发国家,脑卒中平均年发病率在城市为 219/10万,在农村为 185/10万,其致残率相当高[1]。
这种高致残率与卒中后的并发症——肢体痉挛密切相关。
其严重影响患者的生活质量,同时给患者带来躯体上和精神上的痛苦,对患者融入社会造成障碍而且增加了家庭和社会的负担。
脑卒中后的肢体痉挛成为当今研究的热点。
目前制备脑卒中后肢体痉挛模型,多以大脑中动脉线栓塞为主。
本实验在线栓法的基础上往内囊注射 NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,N-甲基-D-天冬氨酸受体),拟建立一种痉挛症状稳定的脑卒中肢体痉挛大鼠动物模型。
1 材料与方法1.1 实验动物 20只 SD雄性大鼠,体质量 280~320 g,购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
饲养于湖南中医药大学动物实验中心。
分为线栓法和线栓+内囊注射 NMDA受体法 2组,每组各 10只大鼠。
1.2 线栓法采用改良 Zea Longa线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞肢体痉挛大鼠模型。
10%水合氯醛 3 mL/kg腹腔注射麻醉。
将麻醉后的大鼠固定在手术台上,备皮消毒后,沿颈部正中偏右切口,分离右侧颈动脉和迷走神经后,分别在颈总动脉远心端、颈内动脉近心端、颈外动脉近心端备线,然后分别结扎颈外动脉近心端、颈总动脉远心端,动脉夹夹闭颈内动脉。
骨骼肌肌球蛋白Ⅱ的研究进展
朱道立;陈佩林;王康乐
【期刊名称】《生物学教学》
【年(卷),期】2010(035)011
【摘要】骨骼肌肌球蛋白Ⅱ是一种多功能蛋白,主要功能是为肌肉收缩提供能量.本文阐述骨骼肌肌球蛋白II的结构、分类、编码基因和功能.
【总页数】3页(P8-10)
【作者】朱道立;陈佩林;王康乐
【作者单位】南通大学生命科学学院,江苏,226019;南通大学生命科学学院,江苏,226019;南通大学生命科学学院,江苏,226019
【正文语种】中文
【相关文献】
1.轻揉推拿法对兔骨骼肌急性钝挫伤后肌球蛋白重链和胶原表达的影响 [J], 张婵娟;成羿;董学亮
2.小鼠骨骼肌肌球蛋白重链生物信息学特性比较 [J], 史银斌;孙丽君;奚耕思
3.骨骼肌生长因子、肌球蛋白及骨骼肌胶原与骨骼肌的损伤与修复 [J], 冯剑;
4.骨骼肌生长因子、肌球蛋白及骨骼肌胶原与骨骼肌的损伤与修复 [J], 冯剑
5.痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达研究 [J], 史姗姗;卢淑卿;刘师宇;刘东海;庞伟
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大鼠脊髓源性痉挛模型的建立和评价王杰;敖丽娟;李咏梅;王文丽;陈茉弦【期刊名称】《中国康复医学杂志》【年(卷),期】2011(026)006【摘要】@@ 脊髓损伤患者经常遭受继发的病损,其中痉挛就是其中之一,据报道50%-60%的脊髓损伤患者会出现痉挛[1-2].痉挛,特别是严重的异常痉挛模式的存在,使患者行走困难、平衡障碍、生活不能自理等,并使患者的生存质量受到严重影响,也给患者家属带来了很大痛苦,已成为临床亟待解决的难题和国际医学研究的热点[4].过去的研究认为脊髓源性痉挛是以多突触通路的抑制性影响减弱或消失引起的反射亢进,所以大部分的治疗措施的目标就是降低过强的反射,但是患者依然遭受着痉挛的痛苦[5-8].为深入研究痉挛的病理生理变化和治疗痉挛的作用机制,建立一种可靠的动物模型已成为当务之急.【总页数】3页(P585-587)【作者】王杰;敖丽娟;李咏梅;王文丽;陈茉弦【作者单位】昆明医学院第二附属医院康复医学科,昆明,650000;昆明医学院第二附属医院康复医学科,昆明,650000;昆明医学院第二附属医院康复医学科,昆明,650000;昆明医学院第二附属医院康复医学科,昆明,650000;昆明医学院第二附属医院康复医学科,昆明,650000【正文语种】中文【相关文献】1.完全性骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠模型的建立及尿流动力学分析 [J], 许明;张泓;刘继生;张健;尹秀婷;张雨辰2.大鼠牵张性脊髓损伤动物模型的建立和评价 [J], 刘雷;裴福兴;杨效宁;李起鸿3.大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞体外机械拉伸损伤模型的建立与评价 [J], 马祥;祁月红;卫建峰;李燕则;毕竞;吕磊;郭永清4.大鼠脊髓全横断损伤后神经源性膀胱模型的建立及评估 [J], 元小红;贺丰;江泽辉;赵赫;叶超;伍绍明;于海川;李春根5.大鼠脊髓损伤模型建立及神经源性肠功能障碍的初步评价 [J], 韩芸峰;王振宇;于涛因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
彳用用贸&乡磔志2019年.第34卷.第6期•基础研克•痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达研究史姗姗2卢淑卿'刘师宇,刘东海,庞伟摘要目的:探讨痉挛型瘫痪大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白水平。
方法:将50只5d龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分成假手术组和模型组,每组25只。
建模后大鼠20日龄时,HE染色观察锥体束病理损伤情况,Western blotting检测瘫痪侧比目鱼肌和腓肠肌中MHC-I、MHC-U b蛋白的表达。
结果:与假手术组相比,模型组大鼠患侧肢体屈曲痉挛、走路缓慢、跛行,HE染色显示仅锥体束处出现细胞坏死、核固缩;模型组比目鱼肌MHC-I蛋白表达(3.78±0.32)显著高于假手术组(0.24±0.11),/><0.001;模型组腓肠肌MHC-I蛋白表达(3.68±0.28)显著高于假手术组(2.34±0.26),P<0.001;模型组比目鱼肌MHC-II b蛋白表达(0.34±0.16)显著低于假手术组(0.77±0.21),P<0.001;模型组腓肠肌MHC-D b蛋白表达(0.32±0.18)显著低于假手术组(0.78±0.22),P<0.001o结论:痉挛状态下大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型MHC-I蛋白高表达、MHC-Ub蛋白低表达。
关键词痉挛;瘫痪;骨骼肌;肌球蛋白重链中图分类号:R442.6,R742.3,R493文献标识码:A文章编号:1001-1242(2019)-06-0631-05Expression of myosin heavy chain in skeletal muscle in rats with spastic paralysis/SHI Shanshan,LU Shuqing,LIU Shiyu,et alV/Chinese Journal of Rehabilitation Medicine,2019,34(6):631―35AbstractObjective:To investigate the protein level of myosin heavy chain subtype in skeletal muscle of spasmodic paralytic ratsMethod:Fifty Sprague-Dawley rats aged5days were randomly divided into sham operation group and model group,with25rats in each group.After the modeling,when the rats were20days,HE staining was used to observe the pathological damage at the pyramidal tract.Western blotting was used to detect the expression of MHC-I and MHC・U b proteins in the paralyzed flounder muscle and gastrocnemius muscle.Result:Compared with the sham group,the rats in the model group suffered from lateral limb flexion spasm,slow walking and claudication.The expression of MHC・I protein was significantly higher in the model group than in the sham group(0.24±0.11)(P<0.001).MHC-I protein expression in the model group was significantly higher than that in the sham group(2.34±0.26)(P<0.001).The expression of MHC-U b protein in the soleus muscle of the model group(0.34±0.16)was significantly lower than that of the sham group(0.77±0.21)(P<0.001).The expression of MHC・U b protein in the model group was significantly lower than that inthe sham group(0.78±0.22)(P<0.001).Conclusion:Skeletal muscle myosin heavy chain subtype MHC・I protein was highly expressed and MHC-U b protein was lowly expressed in rats with spastic paralysis.DOI:10.3969/j.issn」001・1242.2019.06.0021佳木斯大学康复医学院,黑龙江佳木斯市,154007;2首都医科大学附属北京康复医院;3佳木斯大学临床医学院;4佳木斯大学儿童康复神经实验室;5通讯作者;6佳木斯大学附属第三医院作者简介:史姗姗,女,硕士研究生;收稿日期:2018-08-27www.r ehabi.c om.c n631Chinese Journal of R ehabilitation Medicine,Jun.2019,Vol.34,No.6Author's address The Rehabilitation Medical College of Jiamusi University,Jiamusi,Heilongjiang,154007 Key word spastic;paralysis;skeletal muscle;myosin heavy chain脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)简称脑瘫,由发育不成熟的大脑(产前、产时或产后)先天性发育缺陷(畸形、宫内感染)或获得性(早产、低出生体重、窒息、缺氧缺血性脑病、核黄疸、外伤、感染)等非进行性脑损伤所致叫在脑性瘫痪的分型里,痉挛型脑瘫所占比例最多,并且儿童不像成人会有更多的主诉和极高的配合度,在评测肌力以及肌张力时难免会产生主观误差,所以定性定量的指标更为需要,研究痉挛型瘫痪大鼠痉挛肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达,未来可以作为评测肌张力程度的一个指标或参考。
哺乳动物骨骼肌的收缩特征由肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型决定,肌纤维类型可以通过运动负荷、血液灌注、神经支配或能量代谢改变使MHC亚型发生相互转换而改变本研究从分子水平探讨痉挛状态下大鼠骨骼肌肌球蛋白重链亚型的蛋白表达水平,为基础研究和临床康复提供启示。
1材料与方法1.1实验动物及分组足月新生5d龄清洁级SD大鼠50只,哈尔滨医科大学动物实验中心提供,许可证号:SCXK(黑) 2013-001o雌雄不计,体重9—12g,饲养于佳木斯大学动物实验饲养中心。
将大鼠随机分为假手术组和模型组。
1.2主要仪器和试剂ST-5ND-B脑立体定位仪:成都仪器厂。
微量进样器:上海高鸽工贸有限公司。
DYCZ-24DN型蛋白凝胶电泳仪、DYCZ-40D型转印电泳仪:北京六一仪器厂。
RM2235型切片机:德国LEICA公司。
无水乙醇:天津市凯通化学试剂有限公司。
MHCI、MHC-II b、|3-actin抗体:沈阳WANLEIBIO公司。
羊抗兔IgG-HRP:中国BEYOTIME公司。
PVDF膜:美国MILLIPORE公司。
1.3动物模型制备1.3.1痉挛型瘫痪大鼠模型的制备:通过脑立体定位仪向大鼠头颅锥体束定位注射无水乙醇,锥体束的定位参照大鼠脑立体定位图谱叫选定术中大鼠颅骨的定位坐标数值为:对耳线后1500pm,矢状缝左侧500ym,腹侧11500pm。
模型组注射2.5卩1无水乙醇,假手术组注射2.5山生理盐水。
1.3.2手术结果:制备模型过程中,由于定位坐标数值十分精确,但大鼠之间存在个体差异,操作过程中难免有各种原因导致的失误和误差。
术后假手术组死亡6只,存活19只,模型组死亡7只,存活18只。
1.3.3临床表现:分别于7d龄和20d龄观察两组大鼠的临床表现。
1.4HE染色灌注取脑后取锥体束进行石蜡包埋、染色。
两组大鼠分别于20d龄在提取完肌肉组织后做心脏灌注,断头取脑,蒸懈水冲洗,4%多聚甲醛溶液固定后,常规石蜡包埋,4pn厚度切片。
石蜡组织切片常规脱蜡,二甲苯I、II、皿,每次10min;100%、95%.75%梯度酒精水化,每次5min;双蒸水洗片2次,每次2min;苏木素染色5min,流水冲洗lmin;1%盐酸乙醇分化3s,流水冲洗lmin;置伊红液中2min,流水冲洗3min;酒精由低至高梯度脱水,二甲苯透明,干燥后中性树脂封片。
光镜下拍照观察。
1.5Western blotting20d龄时,两组分别提取右侧下肢的比目鱼肌和腓肠肌,放入液氮中冻存,留待Western blotting 检测。
称取20mg组织并加入180g l的裂解液,用研磨机将组织研碎后,静置30min(4°C),12000rpm离心10min(4°C),取上清液。
用BCA法检测蛋白质的浓度,加入5xSDS-PAGE蛋白上样缓冲液后放入95°C 的水浴锅中水浴10min充分变性后恢复至室温。
将样本于SDS-PAGE凝胶电泳,电泳至漠酚蓝离胶板最下端lcm处停止。
并按照marker和目的蛋白的分子量来切胶。
转膜:将PVDF膜裁剪合适的大小,用甲醇浸润15s,按照阴极-纤维层-滤纸-胶-PVDF 膜-滤纸-纤维层-阳极顺序制作“三明治”,恒流270mA进行电转。
转膜完毕后放入5%脱脂奶粉封闭1.5h(37°C)0一抗孵育4弋过夜。
TBST5min/遍,洗3遍。
二抗室温孵育lh。
TBST5min/遍,洗3遍,ECL曝光。
申筒斤贸区乡%£2019年.第34卷.第6期1.6统计学分析数据采用SPSS17.0统计软件进行处理。