小鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)自身抗体检测试剂盒使用说
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小鼠肌钙蛋白(Tn)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T10ng/L - 400ng/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中肌钙蛋白(Tn)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肌钙蛋白(Tn)水平。
用纯化的小鼠肌钙蛋白(Tn)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白(Tn),再与HRP 标记的肌钙蛋白(Tn)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白(Tn)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠肌钙蛋白(Tn)浓度。
1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(800ng/L)×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液200ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液100ng/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液50ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液25ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
心肌肌钙蛋白I检测试剂盒(胶体金法)【产品名称】通用名称:心肌肌钙蛋白I检测试剂盒(胶体金法)英文名称:Cardiac Troponin I Fast Test Kit【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒包装规格】包装规格:10人份/盒,25人份/盒【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒预期用途】心肌肌钙蛋白I检测试剂盒-用于临床体外定量或半定量检测人血中心肌肌钙蛋白I(cTnI,下文中“心肌肌钙蛋白I”均使用其英文缩写“cTnI”)的含量。
【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒检验原理】心肌肌钙蛋白I检测试剂盒-含有预先包被在聚酯膜上的金标记人cTnI单克隆抗体以及固定于膜上测试区(T)的人cTnI单克隆抗体,结合链亲和素-生物素放大系统,采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术,检测人血中cTnI的含量。
肌钙蛋白由I、T、C三亚基构成,它们和原肌球蛋白一起通过调节Ca2+对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。
当心肌损伤后,心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中,4~6小时后,开始在血液中升高,升高的cTnI能在血液中保持很长时间(6~10天),这样就提供了较长的检测期。
【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒主要组成成份】1.心肌肌钙蛋白I检测试剂盒:内含10条单人份或25条单人份检测卡,检测卡由试纸条外壳与试纸条构成,试纸条由样品垫、胶体金垫(喷有由胶体金标记并结合了链亲和素-生物素放大系统的cTnI单克隆抗体)、层析膜(T线包被有cTnI捕获单克隆抗体,C线包被有兔抗鼠IgG抗体)、吸水纸、衬垫构成;2.说明书一份;3.标准比色卡一张。
注:不同批的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒(胶体金法)各组分不可以互换。
【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒适用仪器】南京普朗医用设备有限公司FIA8000系列免疫定量分析仪【心肌肌钙蛋白I检测试剂盒储存条件及有效期】试剂盒于4~30℃,铝箔袋密封状态下存放,有效期为12个月;铝箔袋拆封后,有效期为1小时。
肌红蛋白(MYO)测定试剂盒(荧光免疫层析法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清、血浆或全血中肌红蛋白的含量。
1.1 包装规格10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。
1.2 主要组成成分每盒含10/20/50人份检测卡(每人份包装中含1袋干燥剂)、1个校准信息卡。
主要组成成分见表1:表12.1物理性能2.1.1 外观检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染;材料附着牢固。
2.1.2 膜条宽度膜条的宽度≥3mm。
2.1.3 移行速度液体移行速度应不低于10 mm/min。
2.2 空白检测限空白检测限应不高于10 ng/mL。
2.3 准确度回收率应在85%~115%之间。
2.4 线性在企业线性范围内[10,500]ng/mL,相关系数(r)应不低于0.99。
2.5 重复性用浓度为(25±2.5) ng/mL、(50±5) ng/mL和(450±45)ng/mL的样本重复检测15次,其变异系数(CV%)应不高于15.0%。
2.6 批间差用3个不同批号的检测卡分别检测浓度为(25±2.5)ng/mL、(150±15)ng/mL 的样本,则批间相对极差(R%)应不高于15.0%。
2.7 特异性表22.8 溯源性根据GB/T 21415-2008的有关规定,校准信息卡溯源至企业工作校准品,并与已上市产品比对赋值。
2.9 稳定性10℃~30℃保存,有效期12个月,效期后2个月内分别检测2.1~2.5、2.7项,其结果应符合各项要求。
小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒产品简介小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒实验原理小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素自身抗体(IAA)(PCT)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T12ng/L - 360ng/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中肌钙蛋白T(Tn-T)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)水平。
用纯化的小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白T(Tn-T),再与HRP标记的肌钙蛋白T(Tn-T)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白T(Tn-T)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)浓度。
试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
资料范本本资料为word版本,可以直接编辑和打印,感谢您的下载肌红蛋白测定试剂盒说明书地点:__________________时间:__________________说明:本资料适用于约定双方经过谈判,协商而共同承认,共同遵守的责任与义务,仅供参考,文档可直接下载或修改,不需要的部分可直接删除,使用时请详细阅读内容肌红蛋白(MYO)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)说明书【产品名称】通用名称:肌红蛋白(MYO)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)英文名称:Myoglobin(CLIA)【包装规格】2×30 人份/盒、2×50 人份/盒、2×100 人份/盒【预期用途】用于体外定量测定人体血清或(和)血浆中肌红蛋白的含量。
肌红蛋白(MYO)分子量为 17.8 kD,由一个多肽链和一个亚铁血红素辅基组成,由人体骨骼肌和心肌细胞合成并贮存,不存在于其它细胞。
实验证明由骨骼肌和心肌来源的两种肌红蛋白无免疫学上的差异。
肌红蛋白的主要生理功能为携带氧气供细胞呼吸。
肌红蛋白是检测急性心肌梗死(AMI) 的早期指标,具有极高的灵敏度但是特异性较差,在 AMI 早期心肌细胞受损,由于 MYO 的分子量小,可以很快从破损的细胞中释放出来,在 AMI 发病 1~3 小时后血中浓度迅速上升,6~7 小时达峰值,12 小时内几乎所有 AMI 患者 MYO 都有升高,升高幅度大于各心肌酶,因此可以作为 AMI 的早期诊断标志物。
由于 MYO 也存在于骨骼肌中,而且仅从肾脏清除,所以急性肌损伤、急性或慢性肾衰竭、严重的充血性心力衰竭、长时间休克及各种原因引起的肌病患者、肌内注射、剧烈的锻炼、某种毒素和药物摄入后,MYO 都会升高。
因此,采用血清MYO 水平作为诊断 AMI 的早期指标,仅限于没有上述相关疾病的患者。
在有急性症状的患者中,4 小时内 MYO 水平不升高,AMI 的可能性极低。
由于在AMI 后血中 MYO 很快从肾脏清除,发病 l8~30 小时内可完全恢复到正常水平。
小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T12ng/L - 360ng/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中肌钙蛋白T(Tn-T)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)水平。
用纯化的小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白T(Tn-T),再与HRP标记的肌钙蛋白T(Tn-T)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白T(Tn-T)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)浓度。
试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒操作说明小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒操作说明小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒实验原理小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被小鼠抗核抗体(ANA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠抗核抗体(ANA)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂盒器材1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水1、标准品浓度依次为:详见说明书;2、经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。
一、产品简介 ������������������� ���������二、检测原理 ������������������� ���������三、试剂盒组分 ������������������� ���������四、储存条件 ������������������ ����������五、注意事项 ������������������ ����������六、其它实验材料 ������������������� ��������七、使用说明 �������������������� �������1、样品收集、处理及保存方法 �������������������� ��2、试剂准备 �������������������� �������3、操作步骤 �������������������� �������4、操作流程图 �������������������� �������5、操作要点提示 �������������������� �������6、结果判断 �������������������� �������八、常见问题分析及解决 ���������� ������������� 2 2 3 3 3 4 4 4 4 5 6 6 6 8目 录全国统一热线:400-600-4213 ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒用于定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中天然和重组IgE浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,如有任何疑问请与合肥兰杰柯科技有限公司联系,公司将为您提供强有力的技术支持。
仅供研究,不用于临床诊断。
二、检测原理本实验采用双抗体夹心ELISA。
用抗小鼠IgE单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品,其中的IgE会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗小鼠IgE抗体,抗小鼠IgE抗体与结合在单抗上的小鼠IgE结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有IgE,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;加终止液变黄。
小鼠牛血清白蛋白(BSA)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中牛血清白蛋白(BSA)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠牛血清白蛋白(BSA)水平。
用纯化的小鼠牛血清白蛋白(BSA)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入小鼠牛血清白蛋白(BSA),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠牛血清白蛋白(BSA)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠牛血清白蛋白(BSA)含量。
试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
人肌球蛋白轻链(MLC)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中MLC含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中MLC水平。
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入MLC抗原、生物素化的抗人MLC抗体、HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的MLC呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释100 ng/ml,50ng/ml,25ng/ml,12.5ng/ml,6.25ng/ml,3.12ng/ml,1.56ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。
如配制50ng/ml标准品:取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3.样品稀释液:1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A:1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B:1×10ml/瓶。
6.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
小鼠5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中5羟色胺(5-HT)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠5羟色胺(5-HT)水平。
用纯化的小鼠5羟色胺(5-HT)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入小鼠5羟色胺(5-HT),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠5羟色胺(5-HT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠5羟色胺(5-HT)含量。
试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
小鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)自身抗体检测试剂盒
使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相
关液体样本中 1,25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)的含量。
实验原理:
小鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)自身抗体检测试剂盒
本试剂盒应用双
抗体夹心法测定标本中大鼠
1,25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)水
平。用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依
次加入 1,25-(OH)2D3,再与 HRP 标记的 1,25-(OH)2D3 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗
体
复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在
酸
的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 1,25-(OH)2D3 呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠 1,25-二羟基维生
素
D3(1,25-(OH)2D3)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:90ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细
收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,
离心
20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次
离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存
过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000
转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保
存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马
上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标
准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从第一孔、第二
孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl,
浓度分别为 60ng/L ,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样
品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后
备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显
色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加
终止液后 15 分钟以内进行。
小鼠心肌肌球蛋白重链(MHC)自身抗体检测试剂盒
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如
未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算
时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和 11% 检测范围:2ng/L–80ng/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月