肌球蛋白磷酸化的研究进展

ROCK抑制剂在眼科基础及临床应用研究进展蒙青青;刘苏【摘要】ROCK抑制剂治疗青光眼的有效性在临床观察中已得到证实,一些动物及细胞实验中亦发现其对糖尿病视网膜疾病、增殖性视网膜疾病、角膜内皮功能障碍及角膜新生血管有良好的治疗作用.此外,ROCK抑制剂在部分基础研究中也显示出良好的神经保护作用.随着ROCK抑制剂的应用价值日益凸显,其在眼科领域将会有更为广阔的发展空间和应用前景.【期刊名称】《眼科新进展》【年(卷),期】2013(033)009【总页数】4页(P894-897)【关键词】ROCK抑制剂;眼科疾病;临床应用【作者】蒙青青;刘苏【作者单位】400010重庆市,重庆医科大学第二附属医院眼科;400010重庆市,重庆医科大学第二附属医院眼科【正文语种】中文近年来，随着对 Rho/ROCK(Rho-associated coiled coil-forming protein kinase，Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶或Rho kinase，Rho激酶)通路的生物学功能了解的不断加深，新的ROCK抑制剂不断被发现，且ROCK抑制剂在治疗青光眼临床观察中表现出良好的治疗效果，因此许多学者对Rho/ROCK通路及ROCK抑制剂在眼科领域中的作用进行了广泛而深入的研究。

本文就近年来ROCK抑制剂在眼科基础及临床应用研究现状进行综述如下。

1 ROCK及其抑制剂介绍ROCK属于丝/苏氨酸蛋白激酶，分为ROCKⅠ和ROCKⅡ2种亚型，两者有非常高的同源性，氨基酸序列65%相同，激酶区相似性92%，但相对组织分布不同，表明其功能有一定差异，ROCKⅡ主要在大脑表达，而ROCKⅠ主要在非神经元组织表达，包括心脏、肺、骨骼肌等［1-2］。

ROCK主要分布于细胞的胞浆，具有调整细胞骨架成分运动的作用，此外在细胞核也有分布，可能参与基因的表达调控［3］。

ROCK是Rho家族蛋白的主要底物。

人Rho家族包含3个成员:RhoA、RhoB及RhoC，均为小分子单体GTP结合蛋白。

世界最新医学信息文摘2019年第19卷第98期 125·综述· cGMP依赖性蛋白激酶I在肿瘤中的研究进展张毅峰，陆肖枫*（苏州市第九人民医院，江苏 苏州）摘要：cGMP依赖性蛋白激酶I（cGMP-dependent protein kinases I, PKGI）参与结肠癌、乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生、发展过程。

然而，因PKGI存在两种亚型，即PKGIα和PKGIβ，且其在不同肿瘤组织中呈现抗肿瘤或促肿瘤的不同效应，为深入研究PKGI在肿瘤发病机制中的作用构成了极大困扰。

本文依托cGMP/PKGI信号通路，综述PKGI在肿瘤研究中的最新进展，为进一步阐释PKGI（PKGIα和PKGIβ）在肿瘤发病机制中的作用提供参考，同时为靶向cGMP/PKGI信号通路的抗肿瘤药物研发提供理论依据。

关键词：肿瘤；cGMP依赖的蛋白激酶I（PKGI）；抗肿瘤中图分类号：R73文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.98.055本文引用格式：张毅峰，陆肖枫. cGMP依赖性蛋白激酶I在肿瘤中的研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘, 2019, 19(98): 125-127, 131.Adances in Study of cGMP-dependent Protein Kinases I in CancersZHANG Yi-feng, LU Xiao-feng*(Suzhou Ninth People's Hospital, Suzhou Jiangsu)ABSTRACT: cGMP-dependent protein kinase I (PKGI) is involved in the development and progression of colon cancer, breast can-cer, ovarian cancer and other cancers. However, there are two subtypes of PKGI (PKGIα and PKGIβ), exhibiting different biological effects of anti-cancer or cancer-promoting in different tumors, which causes great difficulty in finding the deep mechanisms of PKGI (PKGIα and PKGIβ) in the pathogenesis of cancers. This article relies on cGMP/PKGI signal pathway, reviewing the latest advances about PKGI in cancer research, which can furnish a reference for further explanation of the role of PKGI in cancer pathogenesis and provide a theoretical basis for development of anti-cancer drugs targeted cGMP/PKGI signal pathway.KEY WORDS: Cancer; PKGI; Anticancer0引言环鸟苷-3，5-单磷酸（cGMP）依赖性蛋白激酶又称蛋白激酶G（cGMP-dependent protein kinases，PKG），属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族，广泛存在于真核细胞中[1]。

消化道平滑肌的生理特性有兴致分析了这次的实验讨论，不一定怎么样，还是拿来和大家分享一下一、制备小肠平滑肌标本时，为什么不对家兔实施麻醉？若是采用麻醉法，应该是采取家兔耳缘静脉注射乌拉坦进行全麻。

而乌拉坦是一种易逆型胆碱酯酶抑制剂，以类似于乙酰胆碱的方式与胆碱酯酶结合，发生酯链断裂，形成氨甲酰化胆碱酯酶，较长时间占有酶，使其失去水解乙酰胆碱的活性，造成乙酰胆碱的累积，而影响实验动物正常的神经传导起麻醉作用。

从其作用机制看，乌拉坦也会影响到肠道平滑肌中的乙酰胆碱的生物学作用，而影响到小肠平滑肌的生理特性，而干扰实验结果的真实性。

二、制备小肠平滑肌标本时，为什么要取小肠上段，尤其是十二指肠段的平滑肌？小肠各段的自律性不同，上段较高，下端较低。

小肠各段分节运动的频率不同，小肠上部频率较高，下部较低。

电生理研究指出，小肠分节运动的梯度现象与其平滑肌的基本电节律有关。

小肠平滑肌的基本电节律的起步点位于十二指肠近胆管入口处的纵行细胞上，从十二指肠到回肠末端，基本电节律的频率逐渐下降。

近端小肠的蠕动速度也大于远端。

所以本实验尽量取小肠上段以利于观察到明显的阳性结果。

三、钙离子在小肠平滑肌收缩活动中起何作用？在介导平滑肌收缩反应中起核心作用。

外来刺激作用于细胞膜，引发细胞内游离钙离子浓度升高，启动平滑肌兴奋一收缩偶联过程。

钙离子参与平滑肌细胞兴奋收缩偶联的不同阶段。

电机械偶联外来刺激通过信号分子或牵张作用使细胞膜受体活化，细胞膜去极化，改变离子通透性，引起膜电位改变，诱发动作电位或慢波电位改变，导致平滑肌细胞收缩。

动作电位和/或慢波是否可启动收缩，主要取决于Ca2+通过电压依赖性钙离子通道的内流。

药物机械藕联该过程引起平滑肌收缩时，不伴有细胞膜电位变化，而是通过膜受体活化后，引起细胞内贮存C扩十释放人胞浆，导致【Ca2+】i增加。

调节平滑肌收缩的相关蛋白及其相互作用平滑肌细胞中构成收缩装置的有细肌丝、粗肌丝及中间肌丝3种肌丝。

APJ／Apelin系统心血管保护作用的研究进展血管紧张素1型受体相关蛋白是新近发现的一种血管内皮源性肽，Apelin是它的内源性配体。

APJ/Apelin系统广泛分布于机体的心血管系统及神经内分泌等组织器官，参与高血压、冠心病、心力衰竭及心房纤颤等多种心血管疾病的病理生理过程。

本文就APJ/Apelin对心血管系统做一综述。

标签：Apelin/APJ系统；心血管保护作用；心血管疾病血管紧张素1型受体相关蛋白（APJ，又命名为AGTRL1）是加拿大学者O′Dowd等[1]1993年发现的G蛋白耦联大家族中的一种跨膜蛋白。

1998年日本学者Tatemoto等[2]从牛胃分泌物中提取并纯化APJ的天然配体，命名为Apelin。

Apelin是一种生物活性多肽，也是一种脂肪源性激素和神经介质，在免疫炎症、心血管调节、能量代谢、神经功能和水电解质代谢等方面都起着重要作用。

近来发现，APJ/Apelin系统可参与调控高血压、心力衰竭及2型糖尿病等心血管疾病的病理生理过程[3]。

APJ/Apelin作为疾病调控靶点逐渐成为医学界共识。

1 APJ/Apelin系统1.1 APJ/Apelin系统分子结构及生物学特性人类的Apelin基因位于X染色体的q25-26.1段，相对分子量为12 876[4]。

现已纯化的Apelin包括Apelin-10、Apelin-12、Apelin-13、Apelin-36等多种具有不同生物学效应的肽段。

其中Apelin-13和Apelin-36是内源性Apelin的主要形式。

APJ基因位于染色体11q12.1段，属Gi蛋白耦联受体。

APJ的N末端氨基酸残基与Apelin相连发挥生理效应。

Kleinz等[5]发现，Apelin在血管内皮细胞有丰富表达，属于血管源性的活性肽。

另外Apelin及APJ在大鼠的中枢神经系统及心脏、脾脏、肺和哺育期的大鼠乳腺也呈高度表达[2]。

1.2 Apelin与AngⅡ-AT1系统的关系放射自显影的方法显示人和大鼠心肌的APJ受体表达与AT1受体相当，且APJ受体结构与AT1受体有35%的同源性[6]。

Rho-ROCK信号通路功能及其活性调节曹美霞;屈长青【摘要】Rho-ROCK signal plays an important role in cell differentiation, cycle progression, proliferation and apoptosis. By regulating the Rho-ROCK signal and correlation factors, the body can induce mesenchymal stem cells ( mesenchymal stem cells, MSCs) to differen-tiate into adipocytes, osteoblasts and chondroblasts. At different stages, the dysregulation of the Rho-ROCK signaling pathway is linked to cardiovascular, metabolism, neurodegenerative diseases,as well as cancer. The review is mainly explained Rho-ROCK signal pathway and various modes of regulation of Rho-ROCK activity, which would provide some new idea for studying the related diseases.%Rho-ROCK信号在细胞分化,细胞周期进展,增殖和凋亡中发挥着重要的作用. 机体通过调节Rho-ROCK信号及其相关性因子可以诱导间充质干细胞( mesenchymal stem cells,MSCs)分化为脂肪细胞,成骨细胞,成软骨细胞等. 不同阶段ROCK信号通路的失调与心血管、代谢、神经退行性疾病、以及癌症的发生有关. 主要阐述Rho-ROCK信号通路功能及调节Rho-ROCK活性的各种模式,为研究与之相关疾病提供思路.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】5页(P81-85)【关键词】关键字Rho;Rho激酶;ROCK;分化【作者】曹美霞;屈长青【作者单位】抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心,阜阳236041;安徽大学生命科学学院,合肥230601;抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心,阜阳236041【正文语种】中文【中图分类】Q26小GTPases的特点之一是能通过构象改变使GDP结合非活性状态转化为GTP结合的活性状态。

人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展诊断学理论与实践2005年第4卷第l期人cTnl抗原性及测定标准化的研究进展洪理泉.郑佐娅(上海第二医科大学医学检验重点实验室,上海200023)关键词:心肌型肌钙蛋白;抗原性;标准化中图分类号:R392,11:R331.31文献标识码:C文章编号:1671?2870(2005)01?0083?03上个世纪90年代起.心肌肌钙蛋白(cTn)用于临床诊断心肌损伤.由于心肌肌钙蛋白I(cTnI)~检出微小心肌损害,现已成为心肌细胞损伤敏感度和特异度最强的标志物之一,是快速诊断急性心肌梗死(AMI)和急性冠脉综合征(acutecoronarysyndromes.ACS),协助ACS危险分级和反映其预后的主要生化标志.大量临床研究表明cTnI在诊断心肌损伤时有高度的特异度及灵敏度.是诊断心肌损伤的”金标准”.cTnl的生物学特性肌钙蛋白(Tn)由TnI,TnT和TnC3个亚单位组成,其中TnI是抑制性亚单位.可抑制肌球蛋白与肌动蛋白组合,阻止肌肉收缩:TnT是与原肌球蛋白结合的亚单位;TnC是与钙离子结合的受体.TnI有3种亚型:分子量分别为24ku的cTnI,20ku的快骨骼肌(tTnI)和慢骨骼肌肌钙蛋白I(sTnI).cTnI与sTnI的氨基酸序列有40%的异源性.cTnI氨基端有31个氨基酸是sTnI所不具有的.主要区别在l,2,3位外显子.cTnI的l,2,3位外显子较长,可编码N端的47个氨基酸.而sTnI的l,2,3外显子短,只能编码N端21个氨基酸.较cTnI短26个氨基酸.5,6,7外显子在cTnI和sTnI具高度同源性.人cTnI由基因TNNI3编码,TNNI3位于19ql3.4.全长6.2kb,其编码的cTnI为209个氨基酸多肽.相对分子量为24ku.淋巴细胞增殖活性(PI)为9.87.cTnI在心肌细胞中有2种存在形式,其大部分以结构蛋白的形式存在于心房肌和心室肌细胞中.3%的cTnI游离于心肌细胞的胞质内,在心肌细胞膜完整状态下.cTnI不能透过细胞膜进入血循环.心肌损伤时.游离部分先释放入血.4～6h就能检测到cTnI的异常,并可维持5～7d,当心肌损伤时,外周血中90%以上的cTnI,仍然以cTnI—cTnC复合物形式存在.游离的cTnI较少.人cTnI基因是在心肌特异表达的,Bodor等运用cTnI特异的单抗,对不同来源的人肌肉组织冰冻切片进行免疫组化染色,同时用免疫荧光法测定组织匀浆中的cTnI水平.实验结果表明,正常胎儿和成人的骨骼肌组织及所有的多肌炎和假肥大型肌营养不良症患者的组织中都没有cTnI表达.cTn1分子的抗原性Ferrieres等【lJ曾用68条能覆盖cTnI全长序列的多肽做?综述?抗原表位识别及二级结构推断实验,l6种鼠抗人cTnI单克隆抗体至少能分别识别肽段中1个表位,说明抗cTnI单抗识别抗原表位并不依赖蛋白的3级结构,同时用抗cTnI多克隆抗体作对比试验发现cTnI大部分序列都具抗原性,且以N.端,C.端抗原性最强.用精确的2级结构推断方法显示.cTnI是包含5个螺旋的蛋白质,5个螺旋为:A42～77aa,B90～135aa,C145～l59aa,D168～176aa和El82～197aa.of螺旋间由短的无序序列隔开,N.端第1个无序序列有抗原性.其他无序序列均无抗原性.D螺旋无抗体识别表位即无抗原性.由下列抗原表位识别表(见表1)显示抗原表位主要集中在N.端:抗原表位分析及2级结构推断表明cTnI不是球蛋白.而是一种更为延伸的构象,这使分子中大部分氨基酸序列均能被免疫系统识别,即大部分序列都有抗原性.表1抗cTnl单克隆抗体识别表位单克隆抗体(实验室命名)识别序列抗原表位位置(aa)Filatov等171用游离的cTnI和Tn复合体分别去免疫小鼠.得到l6株抗游离cTnI单抗和l5株抗Tn复合体中cTnI的单抗,用重叠的,能覆盖cTnI全长序列的人丁合成l0肽.并采用斑点技术来研究抗原表位识别位点,在总共3l株单抗中.28株单抗能与人工合成的l0肽相互作用.表明其可识别线性表位.用游离的cTnI免疫小鼠得到的l6株单抗优先识别cTnI的N.端和C.端,用Tn复合体免疫小鼠得到的l5株单抗中9株识别cTnI的N一端,可见抗原表位主要集中在N.端.比较得出既能识别游离cTnI又能识别Tn复合体中cTnI的l3株单抗识别的抗原表位位置为:l6～20aa,25～29aa,25～33aa,34～37aa,4l～49aa,56～6laa,87～92aa,87～9laa,102～l09aa,l33～l39aa,l68～l75aa,l89～l95aa和l90～196aa处.血清中cTnI的N.端,C.端均易被蛋向酶水解,稳定性差.研究发现血清中cTnI的存在形式绝大部分是cTnI.TnC复合物,而游离的eTnI及eTnI.TnC.TnT复合物只有很少一?84?部分.Modana等【引用切除C端的cTnI片段来研究其抗原免疫反应性.把在大肠杆菌中重组表达的cTnI(rcTnI)用CNBr切除C.端56个氨基酸残基得到cTnI153(1—153),用末端蛋白水解酶ASP-N切除rcTnI得到cTnI88(6～93),StratusII@TnI免疫测定发现cTnI88抗原免疫反应性>cTnIl53>rcTnI, cTnI153与全长cTnI有相似的免疫学特点.可与TnCl:l结合.也可与TnC,TnT结合成三联体.TnC增强cTnIl53抗原性.但对cTnI88抗原性影响较小,cTnI153.TnC抗原性> cTnI88.TnC及cTnI.TnC.TnT对cTnIl53.TnC抗原性无影响.表明TnT不干扰抗cTnI单克隆抗体识别cTnI153.游离的cTnI153,cTnI88在血清中降解很快.与TnC结合后TnC保护cTnI153不被降解.但对cTnI88保护作用较小,为确定cTnIl53,cTnI88免疫反应性差别的原因.重组表达cTnI80 (1—80),发现cTnI80与cTnI88抗原免疫反应性相同,可见cTnI153,cTnI88抗原性的差别并非取决于N一端的前6个氨基酸残基的有无.事实上cTnI片段及cTnI—TnC复合物的抗原性主要取决于片段大小及是否含有抑制区域(127～1491, 抑制区域对蛋白水解有很强的抑制作用.与TnC结合后大大增强cTnI的稳定性.在cTnI蛋白质的功能域中,抑制区也是最重要的功能区.其能在无Ca+存在的情况下.与构成细肌丝的肌动蛋白相互作用,抑制肌球蛋白的A TP酶活性,抑制区的序列最短仅包含氨基酸残基l37～148.cTnI测定的标准化临床应用发现,不同的检测方法对同一标本中的cTnI进行测定时,测定值可有30倍或更大差异.这给实际应用带来诸多不便.近年世界许多组织致力于cTnI测定标准化. 目的是使cTnI测定结果有可比性.影响cTnI测定标准化的因素主要有:①抗体针对的表位不同,或与抗原表位结合力不同;②不同表位的cTnI片段有不同的清除率和降解率;③使用不同的校准品(无统一的校准材料);④不同标本(血浆,血清或全血)及由此带来的基质的影响(如纤维蛋白,凝血剂);⑤磷酸化;⑥系统本身问题.而测定标准化的最关键因素是统一标准品及抗体.Giuliani等应用不同抗体配对的双抗体夹心法分析患者血清cTnI的存在形式.抗体配对形式分别为:2株均为抗cTnI单抗;l株为抗TnC单抗,l株为抗cTnI单抗;l株为抗TnT单抗,l株为抗cTnI单抗.发现血循环中最主要的形式是cTnI.TnC复合物.Katrukha等用一对仅识别游离cTnI的单抗和一对识别游离cTnI及cTnI复合物的单抗进一步证实了血中cTnI存在的主要形式是cTnI—TnC复合物.这一发现对于如何更好地实现cTnI测定标准化有重要指导作用. 因为I,C是最主要的形式,稳定性也好,这可能是不同测定系统的统一标准品材料的最好形式.cTnI在血清中的降解使cTnI测定结果的可比性差.因为每种测定方法针对的抗原表位不同,而cTnI在血清中降解为很多不同片段,Shi等151运用StratusI1fDadeIntema. tion【a,Opus(BehringDiagnostics)和ACCESS(BeckmanIn—JDiagnConceptsPract2005,V o1.4,No.1strument)系统分别测定Stratus质控品,ACCESS质控品和Opus质控品,结果表明,除了Stratus质控品用ACCESS和Opus系统测不出值以外,另外2个质控品用不同系统所测值之间的最大变异不超过5倍.因此.可能存在其他影响cTnI测定的因素.由于所用方法都为夹心免疫测定法,因而测定时需要抗体识别的靶表位完全暴露并有正确的构象,且2靶表位之间的区域不被水解.由于不同方法运用不同抗体进行测定.针对cTnI的区域不同.所以cTnI各区域不同的降解情况,也就可能导致各测定方法之间的变异.他们用重组的4种cTnI片段cTnI(1～148),cTnI(55～2l0),cTnI (1—99),cTnl(104～210)研究Stratus,Opus,ACCESS等测定的区别,并用Westemblot分析血清中片段的稳定性.发现Stratus,Opus测定法识别的是cTnIN一端.而ACCESS测定法识别的是cTnIC一端.应用对cTnI的N末端部分和C末端部分特异的单抗,对加有重组cTnI的正常人血清和加有重组cTnI复合物的正常人血清,在37℃分别孵育2,4,6,24和48h 后,Westemblot分析证明cTnIC.端很容易降解,而cTnIN一端部分稳定性相对强一些.Katrukha等161用不同免疫学方法分析人坏死组织和血清中cTnI的蛋白水解.发现不同肽段有不同的稳定性.N.端,C一端很易被蛋白酶水解,而30～ll0间的肽段稳定性好. 极可能是受TnC的保护作用.长期以来N一端(前32个氨基酸残基)以其高特异性及抗原性被认为是最好的抗体识别表位,但研究表明N一端,C.端很易被蛋白酶水解.所以双抗夹心法测cTnI时.用针对N.端(前32个氨基酸残基)和C一端表位的抗体反而降低了灵敏度,建议测定cTnI时.抗体针对的是cTnI稳定区域的表位,这样非常有助于提高灵敏度和特异度,现在新一代cTnI测定系统采用的抗体大多针对30～ll0稳定区域的表位171.cTnI测定用不同的校准品(无统一的校准材料)使各家方法问测定的绝对值无可比性.Tate等IsI把20份冰冻血浆标本在DadeBehringStratus,ChironACS:l80,AbbottAxSYM和BeckmancoulterACCESS4种系统上检测.发现未校正的cTnI测定值系统问相差60倍,ACS:l80,AxSYM,ACCESS与Stratus用回归分析进行相关性比较,回归斜率分别为O.97, 4.86和0.03,相关系数分别为0.83(ACS:l80),0.98(AxSYM)和0.46(ACCESS),证实cTnI测定值方法间的巨大差异用同一参考校准品校准后,各方法测定值的CV为2.7%55.0%.结果表明,应用同一参考校准品可以改善cTnI测定值的可比性.造成部分测定结果不一致的原因是因为血浆中存在多种形式的cTnI片段,免疫反应性各异.该作者认为要完善cTnI测定标准化,一方面要有二级参考品.另一方面各厂家使用的cTnI抗体也需要标准化.关于统一标准品,Christenson等19I用NIsT(Nati0nalln—stituteofStandardsandTechnology,美国国家标准与技术研究院)推荐的l0种候选参考物在l3种测定系统上做测定标准化试验,结果表明最好的3种候选参考物质均为T_cTnI-TnC复合物.3种最好的候选参考物仅仅是来源方式不同,分别为:①厂商以冻干粉形式提供,然后复溶;②厂商以诊断学理论与实践2005年第4卷第1期液体形式提供,由NIST冻干,然后复溶;(厂商以液体形式提供.同时发现cTnI-TnC复合物作为候选参考物效果也很理想.这为美国临床化学学会(AACC)标准化组织随后的工作提供了依据.该组织正计划用血清混合液及单一患者标本来评价这些候选参考物在减少测定方法间结果差异上的能力.Tate等用2种校准品来分析cTnI测定时不同方法间结果的一致性,一种为人T合成TnT—cTnI—TnC复合物,另一种为冠状动脉综合征患者的阳性血清,结果也发现人造TnT—cTnI.TnC复合物和冠状动脉综合征患者的阳性血清均能减少测定方法间结果的差异.Liu等【-01研究了用重组表达的ScTn—C和ScTn—C一2融合蛋白来作为校准品和质控材料的可行性.ScTn.C是用l9个氨基酸多肽手臂连接全长cTnI和TnC:ScTn—C一2为l9个氨基酸多肽手臂连接cTnI28～ll0和TnC.先用基因工程构建TnI—linker—TnC,TnI28～l10.1inker.TnC,在Escherichiacoli表达,表达后包涵体处理并用特异性单抗亲和层析纯化.SDS—PAGE发现ScTn—C分子量为45ku,ScTn—C一2分子量30ku. 用Stratus来检测两者稳定性.2～8℃为4个月.一20℃为1年.在37℃血清中,ScTn—C一2稳定性更强.另外ScTn—C能被所有cTnI免疫测定系统识别.且活性很高.而ScTn—C一2只能被采用针对稳定区域的测定系统识别.它们这些特点使ScTn—C,ScTn—C一2有望成为cTnI测定的校准品及质控材料.解决目前cTnI测定标准化问题测定标准化还有一重要因素是应尽量减少测定中的干扰成分.Eriksson等I”I对血浆和血清中cTnI测定的干扰因素进行分析,发现无论是心肌损伤患者还是健康人血中都有干扰抗体识别cTnI中间抗原表位的成份.从而使cTnI测定呈假阴性.建议测定时用一单抗针对中间稳定区.另一抗体针对N一端或C一端从而避免负干扰.蛋白激酶A磷酸化作用,cTnI的22和23位丝氨酸易被蛋白激酶A作用发生磷酸化,使cTnI形成4种形式,即未磷酸化,2种单磷酸化和双磷酸化.研究表明患者体内磷酸化cTnI占50%磷酸化可改变cTn1分子结构及抗原性,从而影响抗体识别.所以测定时应该应用对22和23位丝氨酸磷酸化敏感的抗体.氧化还原的形式也影响cTnI测定的标准化.cTnI第79和96位半胱氨酸,易发生氧化还原反应,从而影响cTn1分子结构及抗原性,影响某些抗体的识别.抗凝剂的影响也很显着.EDTA是Ca螯合剂,可促使cTnI-TnC复合物分离.影响测定值的真实性,肝素带负电荷,而cTnI的PI为9.87.带正电荷,所以肝素易与cTnI结合形成复合物从而影响抗原抗体反应,引起cTnI测定值偏低,Opus,Stratus可用肝素.AC—CESS用EDTA,要根据不同的系统选择不同的抗凝剂【参考文献】【1】FerrieresG,CalzolafiC,ManiJC,eta1.HumancamiactroponinI:preciseidentificationofantigenicepitopesand predictionofsecondarystructure[J].ClinChem,1998,44(3):487--493.【2】FilatovVL,KatrukhaAG,BereznikovaA V,eta1.Epi—topemappingofanti-troponinImonoclonalantibodies[J], 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ofcamiactroponinIassays:roundrobinoftencandidate referencematerials【J】.ClinChem,2001,47(3):43l437.【10】LiuS,ZhangMY,SongQ,eta1.Recombinantsingle chaincardiactroponinI-Cpolypeptides:superiorcalibra—tionandcontrolmaterialsforcardiactroponinIim—munoassays[J].ClinLab,2001,47(1—2):19—27.【11]ErikssonS,JunikkaM,LaitinenP,eta1.Negativeinter- ferenceincardiactroponinIimmunoassaysfromafre—quentlyoccurringserumandplasmacomponent[J].ClinChem,2003,49(7):l095—1104.(收稿日期:2004—11—19)《诊断学理论与实践》杂志由邮局向国内外公开发行.邮发代号4-687.读者可向当地邮局直接订阅.漏订者可直接与本编辑部联系. 欢迎来稿.欢迎订阅,欢迎批评指正.。

肌球蛋白在生物力学效应中的调控作用 胡鸣(综述);洪莉(审校) 【期刊名称】《医学综述》 【年(卷),期】2015(21)3 【摘 要】Cytoskeleton is a component of mechanical force transmission chain .As the main protein in forming cytoskeleton in cells, myosin plays a role in regulating the effect produced by cells when they are forced by the external force.When the expression, structure and activity of myosin changes, mechanical effi-ciency of cells will have a corresponding change, thus affecting the cell function and organizational structure. Phosphorylated myosin light chain, transformation of subtypes in myosin heavy chain , and Rho GTPases sig-naling pathway play an important role in the regulation of cellular biological effects .In this article, we try to express the advanced research in myosin′s impact on cell biomechanics effect.In addition, we also discuss the generation mechanism of such effects.%细胞骨架是细胞内机械力传递链的一个组分，肌球蛋白作为细胞骨架的主要组成蛋白，对细胞受到外界力作用时产生的效应具有一定的调控作用，当细胞内的肌球蛋白的表达、结构以及活性发生改变时，细胞的力学效能也会发生相应的改变，从而影响细胞的功能以及组织结构的改变。肌球蛋白轻链的磷酸化、重链各亚型间的转化以及Rho GTP酶信号通路在对细胞生物力学效应的调控中起着一定的作用。

尼可地尔的临床应用及研究进展或不稳定性心绞痛和冠状动脉成形术或溶栓后再灌注损伤。

尼可地尔能通过开放三磷酸腺苷敏感钾（K+ ATP）通道和增加内皮一氧化氮（NO），在多种疾病中发挥了不同的保护作用。

这些机制的关键取决于尼可地尔使用的剂量、病变部位以及该机制是否能在该部位发挥作用。

研究证实，尼可地尔对心肌纤维化、肺纤维化、肾损伤和肾小球肾炎具有保护作用，主要机制为是K+ATP通道开放，而在肝纤维化和炎症性肠病的保护机制中，内皮系统NO的增加占主导地位。

因此，探讨在不同的疾病下，明确不同机制在尼可地尔的保护作用中起主要作用有助于正确使用所选药物及其针对特定疾病的选用推荐剂量。

关键词：尼可地尔；内皮一氧化氮；钾通道开放引言尼可地尔是一种安全、有效的抗心绞痛药物，在日本和欧洲已被列入指南，作为慢性稳定型心绞痛的长期治疗药物[1]。

在多个国家使用尼可地尔治疗冠心病（CAD）心绞痛研究中显示，它能降低冠心病的发病率及死亡率[2，3]。

有赖于上述研究结果的发现，尼可地尔被欧洲心脏病学会推荐为治疗慢性稳定型心绞痛的二线疗法之一，与β受体阻滞剂和钙拮抗剂相比，尼可地尔在改善劳力型心绞痛和缺血性症状方面的疗效相当，且血流动力学障碍最小[5]。

此外，尼可地尔与钙拮抗剂或β受体阻滞剂相比，尼可地尔在有使用β受体阻滞剂禁忌症的患者中是一种有效的抗缺血药物[7]。

根据其药代动力学特征，尼可地尔对正在使用抗凝治疗的患者，以及存在肝损伤、肾功能下降以及肺疾病是安全的[8]。

此外，它的副作用很小，除了常见的副作用如头晕、胃肠不适、面色潮红外，头痛也是常见的副作用，但尼可地尔禁用于低血压或与其他血管扩张剂同时使用。

尼可地尔已被广泛用于各种心血管疾病，诸如变异性心绞痛（冠状动脉痉挛）、不稳定心绞痛和冠状动脉成形术或溶栓后引起的再灌注损伤[6,10]。

由于其在临床研究中已被证明是治疗难治性心绞痛的有效药物，使用该药后可大大减少了心绞痛发作的频率或持续时间[11]。

蛋白质激酶蛋白质磷酸酶
蛋白质激酶是生物体内一类重要的酶，它可以在细胞信号转导过程中对蛋白质进行磷酸化，通过磷酸化来调节蛋白质的活性。

不同种类的蛋白激酶对不同蛋白质进行磷酸化，例如蛋白激酶A（PKA）可以调节代谢、离子通道和其他信号转导途径的蛋白；蛋白激酶C（PKC）则可以调节转录因子、翻译因子、S6K、Raf激酶等基因表达；钙/钙调素依赖性蛋白激酶（CaMK）包括肌球蛋白轻链激酶、磷酸化酶激酶等。

另一方面，蛋白质磷酸酶则可以对已磷酸化的蛋白质进行去磷酸化，使其失去活性。

例如，蛋白磷酸酶1和/或蛋白磷酸酶2A在长期抑郁症中，可以通过对蛋白质的去磷酸化，导致AMPA受体的去磷酸化，从而改变突触后靶标的后续变化。

蛋白激酶和蛋白质磷酸酶的相互作用，形成了一个复杂的细胞调控网络，通过蛋白质的逐级磷酸化和去磷酸化，调节着细胞的许多重要功能，如代谢、转录、细胞周期等。

◇专论◇中药有效成分抗血小板聚集的研究进展魏蕾，宫鹏(安徽省立儿童医院药剂科，安徽合肥230051;安徽医科大学第一附属医院药剂科，安徽合肥230022)摘要：为了进一步研究中药有效成分对血小板聚集的影响，该文对具有抗血小板聚集活性的中药成分做一综述，为中药中许多有效成分抗血小板聚集活性的研究提供参考。

关键词：冠心病；中药；抗血小板冠心病是危害人类健康的主要疾病。

近年来，随着生活水平的不断提高，冠心病的发病率和致死率不断升高，给社会和家庭造成了极大的负担。

开发出高效低毒的预防、治疗冠心病的药物是当前医学领域的一个重要研究方向。

抗血小板治疗是冠心病治疗中的一个主要治疗手段，常用的抗血小板治疗化学药物包括阿司匹林、氯吡格雷、阿昔单抗等［1-2］，但大多数存在不良反应。

多年研究表明，一些中药有效成分在对抗血小板聚集作用显著，在冠心病的治疗中也发挥着重要作用，本文对具有抗血小板聚集活性的中药有效成分做一综述。

1皂苷类成分1．1人参皂苷Lee JG等研究了四种达玛烷型人参皂苷的对ADP、胶原、花生四烯酸和U46619（TXA2类似物）诱导的血小板聚集的影响，结果表明人参皂苷Rk1和Rg5可以剂量依耐性地抑制花生四烯酸诱导的血小板聚集，其作用强度高于阿司匹林，亦可抑制U46619诱导的血小板聚集，人参皂苷20（S）-Rg3和20（R）-Rg3对花生四烯酸和U46619具有中等强度的抑制作用。

这四种人参皂苷对ADP和胶原诱导的血小板聚集无明显影响［3］。

Lee WM等研究了人参皂苷Rg3的衍生物dihydroginsenoside Rg3的抗血小板活性，结果表明di-hydroginsenoside Rg3可以剂量依耐性的抑制凝血酶和胶原诱导的血小板聚集，活性高于人参皂苷Rg3。

研究其抗血小板聚集的机制发现dihydroginsenoside Rg3可以升高血小板内cAMP水平，抑制ERK2的磷酸化，但是不影响血小板cGMP 水平，提示其抗血小板聚集作用可能是通过血小板聚集的下游信号通路如cAMP和ERK2来实现的［4］。

一氧化氮在甲状腺功能减退所致血管内皮损伤中作用的研究进展甲状腺激素参与机体重要的生理功能，血管内皮细胞是甲状腺激素作用的重要靶细胞之一。

甲状腺功能减退影响心血管系统功能，促进动脉粥样硬化的发生与发展。

一氧化氮主要由内皮性一氧化氮合酶（eNOS）催化生成，具有使血管舒张等功能，生理含量下对血管内皮具有保护作用。

甲状腺功能减退导致eNOS 活性降低，血浆一氧化氮含量下降导致血管内皮损伤，成为动脉粥样硬化的危险因素，增加患心血管系统疾病风险，及时行替代治疗可降低心血管内皮功能损伤。

[Abstract] Thyroid hormone is involved in the important physiological functions of the body. Vascular endothelial cells are one of the key target cells of thyroid hormone. Hypothyroidism affects cardiovascular system function and promotes the occurrence and development of atherosclerosis. Nitric oxide is mainly catalyzed and produced by endothelial nitric oxide synthase （eNOS），which has the function of vasodilatation and protecting vascular endothelium under physiological contents. Hypothyroidism leads to reduced eNOS activity. Decrease of plasma nitric oxide content leads to vascular endothelial injury，which becomes the risk factor for atherosclerosis，and increases the risk of cardiovascular diseases. Timely replacement therapy can reduce cardiovascular endothelial injury.[Key words] Nitric oxide；Endothelial nitric oxide synthase；Hypothyroidism；Vascular endothelial injury甲状腺功能减退是一种比较常见的内分泌系统疾病，人群患病率在4%～20%[1]，以老年人、女性以及碘摄入充足地区的人群多见。