实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察

实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

（2）学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。

小麦种子或黄豆幼根根尖。

2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。

2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。

（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。

实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。

动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。

在一切动物细胞内皆有。

通常为圆形泡状，数目多少不定。

除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。

液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。

液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。

动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。

在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。

根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。

小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。

经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。

含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。

如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。

此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。

为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。

因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。

细胞材料要浸泡在生理盐水中。

长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。

（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。

线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。

实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。

2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。

3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。

实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。

其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。

而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。

实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。

该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。

实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。

同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。

实验2线粒体和液泡系的超活染⾊与观察中国海洋⼤学实验报告姓名:常天易系年级:海洋⽣命学院2012级专业:⽣物科学科⽬:分⼦细胞⽣物学实验学号:12050011006线粒体与液泡系得超活染⾊与观察⼀、实验⽬得1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系得形态、数量与分布;2、学习⼀些细胞器得超活染⾊技术。

3、观察⾖芽根部细胞得液泡分布⼆、实验原理１、詹纳斯绿B染液被线粒体中得细胞⾊素氧化酶氧化⽽呈现蓝绿⾊,在细胞得其她部位因保持还原状态⽽呈现⽆⾊。

２、中性红染液为⼀种碱性染液,易随外周染液进⼊液泡,因液泡内环境偏酸性,所以使液泡被染上红⾊。

三、实验材料黄⾖幼根根尖、⼈⼝腔上⽪细胞,Ringer试剂,詹纳斯绿B染⾊液,中性红染液四、实验⽅法黄⾖幼根根尖得超活染⾊(1)、使⽤中性红染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得中性红染液中染⾊１０分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察(２)、使⽤詹纳斯绿B 染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液中染⾊10分钟盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察(３)、使⽤詹纳斯绿B 与中性红染液混合染⾊①先加詹纳斯绿B,后加中性红染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液中染⾊10分钟向载玻⽚上得标本滴加中性红染液再染⾊１０分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察②、使⽤詹纳斯绿B与中性红染液同时染⾊将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液与中性红染液得混合物中染⾊10分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察⼈⼝腔上⽪细胞得超活染⾊(1)、使⽤詹纳斯绿B染⾊⽤消毒⽛签得钝端在⼝腔上⽪轻轻地挂取部分上⽪细胞在载玻⽚上滴加詹纳斯绿Ｂ染液,将⽛签上得内容物在染液中混匀染⾊10分钟后,在显微镜下观察(２)、使⽤中性红染⾊⽤消毒⽛签得钝端在⼝腔上⽪轻轻地挂取部分上⽪细胞在载玻⽚上滴加中性红染液,将⽛签上得内容物在染液中混匀,染⾊10分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖得染⾊情况图1、根部伸长区得切⽚及其在中性红染⾊下显⽰得液泡。

实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

2、了解细胞的超活染色技术。

二、实验原理：活体染色是使生活有机体的细胞或组织进行特异性着色但对样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，既可以显示生活细胞内的某些特定结构又不会影响细胞的生活状态和造成细胞死亡。

通常分为体内活体染色和体外活体染色。

体外活体染色又称为超活染色。

活体染料主要是靠染料的“电化学”特性。

例如碱性燃料就是靠表面带有的阳离子与被染的细胞部分的阴离子相互吸引而着色。

詹纳斯绿B和中性红即是最常用的两种。

前者是线粒体的专一活性染色剂，线粒体中的氧化酶使染料氧化即有色状态（蓝绿色），而在周围空间中染料仍保持还原即无色状态。

中性红对液泡系的染色有专一性，而对核与胞质不着色。

三、实验用品：1 器材：显微镜，恒温水浴锅，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

2 试剂：Ringer溶液（NaCl 0.85g，KCl 0.25g，CaCl20.03g，加蒸馏水100ml）；10%、1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热(30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存。

临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。

1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。

最好现用现配。

3 实验材料：人口腔上皮细胞，黄豆根尖。

四、实验方法：1 人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并搅动几下。

线粒体和液泡系的超活染色与观察_百替生物实验一、线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜下线粒体和液泡系基本形态结构。

二、实验用品（一）材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片；蟾蜍一只，软骨细胞电镜照片。

（二）器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml注射器、吸管。

（三）试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)；l／3000中性红染液、Ringer氏液(两栖类用)。

三、实验内容（一）兔肝细胞线粒体的活体染色1.原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B 是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

2.方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer 氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。

当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

3.结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察1.原理在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。