微生物实验(4)

实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。

放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。

孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。

孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。

它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。

3.2 培养基高氏1号培养基。

3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。

5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。

5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。

直接在显微镜下观察。

5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。

在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。

实验4微生物菌落的观察
一、实验前的准备
（1）准备Petri瓶：Petri瓶是用于生物实验的一种透明塑料或玻
璃容器，可以在其上进行微生物菌落的观察。

Petri瓶的直径大约为9厘米，高度约为2厘米，它一般具有一个小孔，可以用于把培养基引入或培
养基排出。

（2）准备培养基：培养基是用于培养微生物菌落的一种特殊的液体，它通常由淀粉、糖、氮源等组成，可以提供微生物需要的必要营养和营养素。

（3）准备所需的用具：为了完成本次实验，还需要准备一些实验室
常用的用具，如烧杯、移液器、滴管、温控器等。

二、实验过程
（1）将培养基倒入Petri瓶中：将恰当量的培养基倒入清洁的
Petri瓶中，使外壁和底部充分接触培养基，确保培养基在容器内均匀分布。

（2）加入微生物样品：将微生物样品放入容器中，用移液器将样品
匀化，然后用滴管将样品分散在培养基表面，确保培养基表面有足够的微
生物样品。

（3）培养：用温控器控制温度，一般情况下，需要将温度调节在
25℃~30℃之间，并维持适当的湿度，使微生物菌落能够正常生长，一般
情况下，可以在24~36小时内获得较好的观察结果。

（4）观察：取出Petri瓶。

实验四 微生物大小的测定一、实验目的1. 熟悉目测微尺和物测微尺的使用方法, 掌握测定微生物大小的技能。

3. 巩固光学显微镜的使用方法二、实验要求1. 预习有关微生物大小测定等方面的知识；2. 遵守实验室安全制度, 听从指导教师安排； 3．认真听讲, 不懂就问；4. 完成实验报告三、实验仪器和材料目测微尺、物测微尺、光学显微镜、微生物标本片四、实验原理及方法1.目测微尺:目镜测微尺是一块圆形玻片, 在玻片中央把5mm 长度刻成50等分, 或把10 mm 长度刻成100等分。

测量时, 将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同, 目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样, 因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正, 以求出在一定放大倍数下, 目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

2.物测微尺中央部分刻有精确等分线的载玻片, 一般将1mm 等分成100格, 每格长0.01mm （即10µm ）。

它并不直接测细胞的大小, 而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

五、实验步骤及内容1. 目测微尺的标定两对重合线间镜台测微尺格数10目镜测微尺每小格长度＝两对重合线间目镜测微尺格数把物测微尺放在载物台上使刻度朝上。

用低倍镜找到物测微尺的刻度, 移动物测微尺和目测微尺使两者的第一条线重合, 顺着刻度找出另一条重合线。

再分别求出高倍镜和油镜下目测微尺每格的长度。

2. 菌体大小的测量将物测微尺取下, 换上标本片, 选择适当的物镜测量目的物的大小, 分别找出菌体的长和宽占目测微尺的格数, 再按目测微尺1格的长度算出菌体的长度和宽度。

六、实验结果1.将目镜测微尺校正结果填入表1物镜倍数目镜测微尺格数镜台测微尺格数目镜测微尺每格代表的长度2.在高倍镜下测量枯草芽孢杆菌大., 将结果填入表2序号长/um 宽/um 菌体大小（平均值）长/um×宽/um目镜测微尺格数菌体长度目镜测微尺格数菌体宽度1 2 3 4 5七、思考题1.不改变目镜和目镜测微尺, 而改用不同倍数的物镜来测定同一细菌的大小, 目镜测微尺上所量的物镜上物体的实际长度是否相同？为什么？相似。

实验四细菌抹片的制备及染色实验班级：2017级牧医高职（动物微生物）指导老师：陶波实训地点：实训室207时间：2018年6月【目的要求】1.掌握细菌抹片的制备方法和几种常用的染色方法。

2.认识革兰氏染色和瑞特氏染色的反应特性。

【实验材料】试剂用品：载玻片、接种棒、酒精灯、吸水纸、生理盐水、染色液等。

菌种：羊、兔粪便便中提取培养的细菌。

【实验内容】一、细菌涂片的制备1.载玻片准备载玻片应清晰透明，如有残余油渍，可用95%酒精清洗。

2.抹片根据材料情况不同，抹片方法也有差异。

液体材料（如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等）可直接用灭菌接种环取一环材料，于玻片中央均匀涂布适当大小或可采用推片法。

非液体材料（菌落、脓、粪便）应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于玻片中央，然后用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂抹成适当大小的薄层。

组织脏器材料可先用镊子夹持中部，然后以灭菌或洁净剪刀取一小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上触片或涂抹成薄层。

3.干燥上述涂片应让其自然干燥或适当烘干处理。

4.固定有两类固定方法火焰固定法：将干燥好的抹片使其涂抹面向上，以其背面在酒精灯外焰来回拖过数次，略作加热进行固定。

化学固定法：血液、组织脏器等抹片要做姬姆萨染色，不同火焰固定，可将干燥后的抹片滴加数滴甲醇其实作用2~3min后自然干燥进行固定（瑞士染色可不做甲醇固定）。

二、几种常用的染色方法（一）姬姆萨染色将足量的姬姆萨溶液（或将姬姆萨原液稀释）滴加到抹片上，或将抹片浸入盛有姬姆萨染液的染缸中浸染30min 至数小时，取出后水洗，吸干水分后镜检。

（二）瑞特氏染色瑞氏染料是碱性美蓝与酸性伊红混合而成的染料，当溶于甲醇后立即发生分离，分解成酸性和碱性两种染料。

由于细菌菌体蛋白偏酸性，菌体带负电（菌体蛋白等电点多在pH2~5），被染成蓝色。

在以固定好的涂片或触片上滴加足量的瑞氏染液，染色3~5min后水洗，吸干水分后镜检（如染色不理想可重复几次）。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

实验4微生物菌落的观察微生物菌落的观察是一种常见的实验方法，用于研究微生物的生长和繁殖特性。

本实验通过观察不同条件下微生物菌落的形态、颜色和数量变化，探究微生物的影响因素。

以下为一篇超过1200字的实验报告。

一、实验目的1.了解微生物菌落的基本特征和发展规律。

2.探究温度、pH值和营养物质对微生物菌落的影响。

二、实验原理微生物菌落是指由单个微生物细胞繁殖而成的大群体，具有特定形态、颜色和数量。

微生物菌落的形成受到温度、pH值和营养物质等因素的影响。

在适宜的环境条件下，微生物菌落会迅速生长和繁殖，形成可见的菌落。

三、实验材料与方法1.材料：琼脂培养基、无菌培养皿、微生物菌种液、无菌吸管、无菌接种环等。

2.方法：a.准备琼脂培养基并灭菌。

b.取出无菌培养皿，倒入适量的琼脂培养基并均匀摇晃使其平铺。

c.用无菌吸管取适量的微生物菌种液，在琼脂培养基表面画出菌落或点状样品。

d.使用无菌接种环将不同试验条件的菌种液施加于琼脂培养基上，分别形成不同的菌落。

e.将培养皿盖好，倒置放入恒温箱或恒温培养箱中，设定不同温度和pH值的条件。

f.根据实验设计的时间，观察菌落的形态、颜色和数量变化，拍照记录。

g.分析和比较不同条件下的菌落特征。

四、实验结果与分析本实验分别设置了温度、pH值和营养物质三个因素的实验组。

观察发现，在适宜的温度条件下，微生物菌落生长较为迅速，相反，过高或过低的温度会抑制菌落的形成。

例如，在30°C条件下，菌落的生长速度明显较快，菌落形态呈现圆形或不规则形，颜色多为白色或黄色。

而在较高温度条件下（40°C），菌落的生长速度较慢，形态多呈现不规则形，并呈现土黄色。

在低温条件下（10°C），菌落的生长也受到抑制，数量明显减少，颜色偏向灰色。

对于pH值的影响观察发现，微生物菌落对不同pH值的适应能力有所差异。

在中性条件（pH7）、微碱性条件（pH8）和微酸性条件（pH6）下，菌落均能生长，但形态和颜色有所差异。

实验四微生物平板菌落计数法(共3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--实验四微生物平板菌落计数法一、实验目的学习并掌握平板菌落计数的基本原理和方法。

二、实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低，为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。

三、实验器材1 ．菌种：酵母菌。

2 ．培养基：YEB培养基。

3 ．仪器或其他用具： 1ml 无菌吸管，无菌平皿，盛有无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。

四、实验步骤1 ．编号取无菌平皿 9 套，分别用记号笔标明 10-4、 10-5、 10-6（稀释度）各 2 套，另取 6 支盛有无菌水的试管，依次标是 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、10-6。

2 ．稀释用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放至 10-1的试管中，此即为 10 倍稀释。

将多余的菌液放回原菌液中。

将 10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。

另取一支 1ml 吸管插入 10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。

实验四放线菌的形态观察杨明轩生物111班1102040128一、实验目的1、学习观察放线菌形态的基本方法。

2、观察放线菌的个体形态特征。

二、实验原理放线菌是一类丝状原核微生物，因其菌落在固体表面长成放射状生长而得名，放线菌主要存在于土壤中，大部分腐生，少数寄生，也有的与植物共生固氮。

放线菌是最主要的抗生素产生菌，其形态特征是菌种选育和分类的重要依据。

放线菌通常有分枝发达的菌丝体组成，菌丝直径为0.2-1.2μm。

主要由两部分组成，一部分长在培养基内，一般没有横隔，有固定和吸收养分的作用，称为基内菌丝或营养菌丝。

当基内菌丝发育到一定阶段，即可向空中伸展形成气生菌丝（有的菌种没有气生菌丝）。

在显微镜下观察时，气生菌丝颜色较深，并且比基内菌丝粗两倍左右。

有些种的气生菌丝发育到一定阶段，其顶端可形成孢子丝。

孢子丝分直、波曲、螺旋等形状。

孢子丝的着生方式分别为单生、丛生、轮生和互生。

放线菌菌落小，与培养基结合紧密，不易用接种钩挑取，因而难以直接观察。

通常采用玻璃纸培养法和插片法观察。

本次实验采取插片法。

该方法适合进行营养菌丝、气生菌丝和孢子丝的比较观察。

在接种放线菌的培养基一侧，以45°角插入无菌盖玻片，使放线菌沿培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上，待菌丝生长一段时间后，取下盖玻片进行染色，即可直接观察。

三、实验材料1、菌种：紫色直丝链霉菌（Streptomyces violaoeorectus）、黑化链霉菌（Streptomyces nigrificans）、天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）、丰加链霉菌（Streptomyces toyocaensis）2、染色剂：石炭酸复红染液3、培养基：高氏一号培养基4、其他：干净载玻片、盖玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具四、实验方法1、制备平板：将已融化的高氏一号培养基（冷却到45℃左右）倒入无菌培养皿，每皿15~20ml（厚度约为培养皿高度的一半），凝固后备用。