染色体的C带实验
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北京雷根生物技术有限公司
DAPI 荧光封片剂
简介:
DAPI 荧光封片剂是一种专门用于染色体C 带的DA-DAPI 染色的减缓荧光淬灭的封固剂。
DA 和DAPI 易与A-T 碱基对结合,DAPI 染色可同时检测C 带和G 带,进行DA 对比染色后图像荧光强度减弱,只能特异的C 带呈强荧光染色。
按每个样本需要50~100μl 封片剂计算,5ml 可以用于至少50样本的封片。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 染色样本用DA 染色液染色,McIlvaine 缓冲液轻轻清洗。
2、 DAPI 染色液染色,McIlvaine 缓冲液轻轻清洗。
3、 滴一滴DAPI 荧光封片剂于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽
量避免气泡封片。
4、 用透明黏合剂密封盖玻片。
注意事项:
1、 荧光物质均易发生淬灭,染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用DAPI 荧光封片剂的情况下,虽然可减缓淬灭,仍需尽量避光。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 DZ0125 Storage DAPI 荧光封片剂 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。
常见带型的类型1、Q带(Q banding):Q显带是用荧光染料对染色体标本进行染色,然后在荧光显微镜下进行观察。
Q显带技术是最早建立的显带技术,它在观察染色体多态方面有重要的用途。
但Q带保存时间短,而且需要在荧光显微镜下进行观察,因而,限制了Q显带技术的应用。
2、G显带(G banding):染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后,再用Giemsa染色,可以显示出与Q带相似的带纹。
在光学显微镜下,可见Q带亮带相应的部位,被Giemsa 染成深带,而Q带暗带相应的部位被Giemsa染成浅带。
这种显带技术称为G显带,所显示的带纹称为G带。
G显带克服了Q显带的缺点,G带标本可长期保存,而且可在光学显微镜下观察,因而得到了广泛的应用,是目前进行染色体分析的常规带型。
3、R显带(R banding):所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反,故称为R带(reversed band)。
G带浅带如果发生异常,不易发现和识别,而R显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带,所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有重要作用。
4、C显带(C banding):专门显示着丝粒的显带技术。
C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。
因而,C带可用来分析染色体这些部位的改变。
5、T显带(T banding):专门显示染色体端粒的显带技术,用来分析染色体端粒。
6、N显带(N banding):专门显示核仁组织区的显带技术。
7、高分辨显带(high-resolution banding):分裂中期一套单倍染色体一般显示320条带。
70年代后期,采用细胞同步化方法和改进的显带技术,获得细胞分裂前中期、晚前期或早前期的分裂相,可以得到带纹更多的染色体,能显示550-850条带,甚至2000条带以上。
这种显带技术称为高分辨显带技术。
8、姊妹染色单体互换(SCE):5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxy-uridine,BrdU)是脱氧胸腺嘧啶核苷的类似物,在DNA链的复制过程中,可替代胸腺嘧啶。
——低温诱导染色体加倍的原理,卡诺氏液、酒精、盐酸、
改良苯酚品红染液等试剂的作用
前情提要:
关键词:低温、染色体变异、卡诺氏液、酒精、盐酸、改良苯酚品红染液难度系数:★★★
重要程度:★★★★
基础回顾:
考点一览:低温诱导植物染色体数目的变化原理、步骤与现象
技能方法:
1.低温诱导植物染色体数目变化的实验中的试剂及其作用
3.选材的时候必须选用能够进行分裂的分生组织的原因是:不分裂的细胞染色体不复制,不会出现染色体数目加倍的情况。
4.实验过程中,低温诱导时,应设常温、低温4℃、0℃三种,以作对照,否则实验设计不严密。
【易错警示】关于“低温诱导植物染色体数目的变化”实验的3个易错提醒(1)细胞是死的而非活的:显微镜下观察到的细胞是已被盐酸杀死的细胞。
(2)材料不能随意选取:误将低温处理“分生组织细胞”等同于“任何细胞”。
选材应选用能进行分裂的分生组织细胞,否则不会出现染色体加倍的情况。
(3)着丝点分裂与纺锤体无关:误将“抑制纺锤体形成”等同于“着丝点不分裂”。
着丝点是自动分裂,无纺锤丝牵引,着丝点也分裂。
【课堂巩固】
1.下列有关实验操作的描述,正确的是()
A.细胞中脂肪的鉴定、叶绿体中色素的提取和观察细胞的有丝分裂过程都使用了酒精
B.可将酸性重铬酸钾加入酵母菌培养液,以检测生成的呼吸产物
C.观察DNA和RNA在细胞中分布实验中,应选择染色均匀、色泽较深的区域观察
D.低温诱导染色体加倍实验中,将大蒜根尖制成装片后再进行低温处理
【答案】A。
染色体带纹及命名人类染色体是以几届国际会议的结果予以命名的(1960的Denver会议,1963年的伦敦会议,1966年的芝加哥会议,1975年巴黎会议,1977年stockholm会议,1994年Memphis会议)。
1995年细胞遗传学标准委员会修改了自1985到1991年所发表的文件,把他们编撰成一个册子,名为《人类细胞遗传学国际命名体制》,常简称ISCN1995。
显带是一类分带技术,是一种方法学。
是把染色体标本经过特殊处理后染色,使染色体有深、浅或明、暗的区别带。
这里我们介绍几种常出现在文献中的带型。
1、G带:也叫G显带,这是临床上最常用的显带方法。
用胰酶,缓冲液处理中期染色体标本均可显带。
G带的特性是显带方法简单恒定,带型稳定,保存时间长。
染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后,再用Giemsa染色,可以显示出与Q带相似的带纹。
在光学显微镜下,可见Q带亮带相应的部位,被Giemsa染成深带,而Q带暗带相应的部位被Giemsa 染成浅带。
这种显带技术称为G显带,所显示的带纹称为G带。
G显带克服了Q显带的缺点,G带标本可长期保存,而且可在光学显微镜下观察,因而得到了广泛的应用,是目前进行染色体分析的常规带型。
2、Q带:用喹吖因染料染中期染色体标本可出现一种特征性黄光亮暗带型,一般富含AT-DNA区段表现为亮带,富含GC-DNA区段黄光较暗,常用于人类Y染色体长臂的观察。
临床上较少用,不能长久保存。
3、C带:这种方法将结构异染色质和高度重复的DNA区域染色。
在人类染色体上这些区域位于着丝粒和Y染色体上。
常用于某一科题的研究。
专门显示着丝粒的显带技术。
C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。
因而,C带可用来分析染色体这些部位的改变。
4、R带:带型与G带相近,常用于染色体末端的研究。
所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反,故称为R带(reversed band)。
G带浅带如果发生异常,不易发现和识别,而R显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带,所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有重要作用。