实验五. 细胞染色体制备

染色体制备
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目录
1.染色体的概念与组成
2.染色体制备的方法
3.染色体制备的步骤
4.染色体制备的应用领域
5.染色体制备的注意事项
正文
染色体是生物体内的一种重要结构，其主要由 DNA 和蛋白质组成。

在生物学研究和实验中，对染色体的观察和分析十分重要。

染色体制备就是将细胞中的染色体提取出来并进行处理，以便于观察和分析。

下面，我们将详细介绍染色体制备的方法、步骤、应用领域以及注意事项。

首先，染色体制备的方法有很多种，常见的有直接法、间接法和免疫荧光法等。

直接法主要是通过化学试剂将染色体固定并染色，间接法是通过抗体与染色体结合，再进行染色，免疫荧光法则是在间接法的基础上，使用荧光标记的抗体来标记染色体。

其次，染色体制备的步骤主要包括：细胞采集、细胞处理、染色体提取、染色体固定和染色以及染色体检测。

细胞采集是指从生物体中获取细胞样本，细胞处理是为了使染色体更容易提取和固定，染色体提取则是将处理后的细胞中的染色体提取出来，染色体固定和染色是为了使染色体保持稳定并便于观察，染色体检测则是对染色体进行分析。

染色体制备的应用领域广泛，主要用于生物学研究、基因诊断、遗传病筛查和基因编辑等。

通过染色体制备，研究人员可以更好地了解染色体的结构和功能，从而为生物学研究和医学应用提供有力支持。

最后，染色体制备过程中需要注意以下几点：一是细胞采集和处理要尽量保持细胞的活性；二是染色体提取时要避免染色体的损伤和断裂；三是染色体固定和染色时要选择合适的试剂和方法；四是染色体检测时要准确分析染色体的形态和结构。

实验五骨髓细胞染色体的制备及组型分析一、实验目的初步掌握骨髓细胞染色体的制片及染色技术，学习染色体组型分析方法，观察动物细胞染色体的数目和形态。

二、实验原理真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。

制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。

小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。

利用骨髓的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。

另外，在骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。

主要的中期相来自成红细胞系统，也来自各种骨髓母细胞。

单核细胞和淋巴细胞的分裂相是较少的。

不过，在染色体制片上已无法区别上述来源。

多倍体的中期相（4n、8n和16n）往往来自于巨核细胞。

对大型动物通常采用对骨骼、脊柱或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。

通过骨髓得到的染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。

在临床上多用于白血病的研究。

在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，因此在药品检验、环境监测、食品检验等工作以及致畸、致癌、致突变等研究中，利用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。

不过，在有些情况下，穿刺取骨髓较困难，或者希望对同一个体材料进行连续的对比取材，以观察药物或环境因素对人类或动物的影响及染色体的动态变化。

这时，采用外周血细胞而不伤害供血者直接制备染色体的技术就十分有利了。

在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素。

秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种——秋水仙的器官和种子内提炼出来的一种植物碱。

因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。

报告成绩实时记录成绩实验五牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）简述染色体显色技术：将没有染色的中期染色体经过预处理后，再用不同的方法和染料处理，使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而稳定的斑带。

每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至染色体结构异常也可被检出。

染色体显色技术分为两大类，一类是产生的染色带分布在整个染色体上，如G、Q和R带；另一类是只能使少数特定的区域显带，如C、T和N带。

染色体显色技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现小的染色体结构异常也可被检出。

（2）制备中期染色体标本的原理和应用：识别染色体的形态特征的最佳时期是细胞有丝分裂中期和早后期。

这时染色体收缩程度最大，形态最稳定，并且分散排列、易于计数。

如果在同一时间内获得不同物种的染色体标本，就可以了解不同物种之间的染色体水平的异同；或者在同一时间内获得同一物种不同技术处理条件下的染色体标本，还可以了解不同技术处理对染色体的影响。

【Materials & methods】实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）；Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器；离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用），冰箱（0℃）。

实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。

实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。

实验操作：1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。

2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四个离心管离心→弃去上清液→生理盐水吹打沉淀物→合并于一管。

3．低渗：每管加蒸馏水1 ml→吹打混匀→30度下静置20 min。

4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。

实验五-人类染色体标本制备实验目的了解人类染色体的结构和形态，学习制备人类染色体标本的方法。

实验原理人类染色体是由DNA和蛋白质组成的细胞核内生物大分子。

它们是非常细小的、线性的、染色体形态因不同的染色体而异。

人的细胞内共有46条染色体，其中，44条是自动对应的配对染色体，男性有一对性染色体（XY），女性有两条同源性的性染色体（XX）。

制备人类染色体标本需要对细胞进行处理，使其在显微镜下展示出明显的染色体结构。

常用的制备方法是细胞悬液滴落法，即将细胞悬液滴于载片上，在经过一系列的处理后，使其形成明显的染色体结构。

实验步骤1.取合适数量的细胞悬液，滴在已经清洗干净的载片上；2.将载片在干燥器中干燥1小时左右；3.取三瓶试剂，分别为80%乙醇、95%乙醇、细胞色素，放置在洁净的台面上备用；4.将载片沉于80%乙醇中，浸泡5分钟；5.将载片取出，去除乙醇，挥干后，再将载片沉于95%乙醇中，浸泡5分钟；6.将载片取出，去除乙醇，挥干后，将其浸泡在细胞色素溶液中15-30秒；7.将载片在流动自来水下快速漂洗干净，挥干，然后在100%乙醇中固定3-5分钟；8.将载片气干（可用酒精灯），涂两三滴甘油，再覆盖薄玻璃片即可。

实验结果制备好的人类染色体标本可以用显微镜观察到细胞核内的染色体。

成品的标本应该能够清晰地显示出染色体的结构和形态，如下图所示：chromosome1.jpg实验注意事项1.操作时要注意卫生和安全；2.选择细胞悬液的质量对制备染色体标本的质量会有影响；3.操作中需要用到一次性手套；4.操作时尽可能避免离心过度，避免对细胞造成破坏。

实验通过本次实验，我们学习了制备人类染色体标本的方法，掌握相关的操作技巧，对人类染色体的结构和形态有了更深入的了解。

在实验过程中，需要注意卫生和安全，避免对实验者本身和实验环境造成不必要的伤害。

染色体制备染色体制备是指通过特定的实验方法，从细胞中提取染色体并进行处理，以获得高质量的染色体样品用于后续实验研究。

染色体是细胞中的遗传物质，其中包含着基因并承载着遗传信息。

因此，对染色体的制备是理解生物遗传学和基因组学的基础。

在染色体制备过程中，首先需要选择适当的细胞来源。

常用的细胞来源包括动物组织、人类血液、植物根尖等。

不同的细胞来源有不同的特点和处理方法，需要根据实验目的选择合适的细胞来源。

接下来，需要用适当的方法将细胞破碎，使染色体释放出来。

常用的破碎方法包括机械破碎、酶解和超声波破碎等。

机械破碎是将细胞通过高速离心或搅拌等方法破碎，使染色体释放到溶液中。

酶解是利用特定的酶，如蛋白酶和核酸酶等，将细胞的细胞壁和细胞膜降解，释放出染色体。

超声波破碎则是利用超声波的振动作用破坏细胞结构，使染色体释放。

在染色体破碎后，需要进行染色体的纯化和富集。

常用的纯化和富集方法包括差速离心、密度梯度离心和磁珠富集等。

差速离心是根据染色体在离心过程中的沉降速度差异，将染色体从其他细胞组分中分离出来。

密度梯度离心是利用不同密度的溶液，将染色体在离心过程中在不同密度梯度上分离出来。

磁珠富集则是利用特定的磁性珠子，将染色体与磁珠结合，通过磁场将染色体富集到特定位置。

染色体制备后，还需要进行染色体的固定和染色。

固定是通过化学处理使染色体的结构保持不变，常用的固定方法有甲醛固定和冷冻固定等。

染色则是利用染色剂对染色体进行染色，以便观察和分析。

常用的染色方法包括吉姆萨染色、乌仑染色和荧光原位杂交等。

吉姆萨染色是最常用的染色方法，通过吉姆萨染料对染色体进行染色，使染色体呈现出特定的颜色和形态。

染色体制备是基因组学和细胞生物学研究中重要的实验步骤。

通过染色体制备，可以获取高质量的染色体样品，为后续的染色体结构和功能研究提供基础。

同时，染色体制备技术的不断发展，也为研究人员提供了更多更精确的工具和方法，使得对染色体的研究更加深入和全面。

细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。

2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。

染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。

（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。

（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。

②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。

我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。

在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。

③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。

PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。

与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。

可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。

④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。

小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。

本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。

一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。

2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。

3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。

4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。

12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。

13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。

14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。

15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。

实验五人类染色体标本制备【目的要求】1 •熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。

2.初步掌握人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备方法。

3•了解正常人非显带染色体核型特征及核型分析方法。

【实验原理】人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。

在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。

人外周血的有形成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞（主要是小淋巴细胞）具有潜在的细胞分裂能力。

培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素（PHA）可使处于G期、具有潜在分裂能力的淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075mol/L KCI对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。

制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分析的过程称为染色体非显带核型分析。

【实验用品】（一）材料：人外周静脉血。

（二）器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒精棉球、显微镜、废液缸。

（三）试剂1. RPMI1640 培养液（1） RPMI1640 : RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。

（2） RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血清20 ml、PHA 50 mg 青霉素（终浓度100 U/ml）、链霉素10000卩g （终浓度100卩g /ml）, 15磅、20min高压灭菌的NaHCO调pH至7.2〜7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。

（3）配制方法配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。

实验五人类染色体标本制备【目的要求】1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。

2．初步掌握人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备方法。

3．了解正常人非显带染色体核型特征及核型分析方法。

【实验原理】人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。

在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。

人外周血的有形成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分裂能力。

培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。

制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分析的过程称为染色体非显带核型分析。

【实验用品】(一) 材料：人外周静脉血。

(二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒精棉球、显微镜、废液缸。

(三)试剂1. RPMI1640培养液(1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。

(2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)，15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。

(3) 配制方法配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。

染色体的染色实验报告染色体的染色实验报告引言：染色体是细胞中的重要组成部分，它们携带着遗传信息，决定了个体的性状和特征。

为了更好地理解染色体的结构和功能，我们进行了染色实验。

本报告将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。

目的：本次实验的目的是观察和研究人类细胞中染色体的染色情况，了解染色体的结构和功能。

方法：1. 实验材料准备：我们使用了人类细胞的培养物、染色体抗体和荧光显微镜。

2. 细胞制备：将细胞培养物放入离心管中，离心分离细胞。

3. 固定细胞：用乙醇和乙酸固定细胞，以保持染色体的形态。

4. 染色体抗体处理：将染色体抗体加入细胞上，与染色体结合。

5. 荧光显微镜观察：将处理后的细胞放置在荧光显微镜下观察和拍摄。

结果：在荧光显微镜下观察，我们清晰地看到了细胞核中的染色体。

染色体呈现出明亮的颜色，且形态规整。

我们可以清楚地看到染色体的条带状结构，这是由于染色体上的基因分布不均匀所致。

染色体的数量也与正常情况相符，人类细胞中通常有46条染色体。

讨论：通过本次实验，我们得以直观地观察和了解染色体的结构和染色情况。

染色体的条带状结构反映了基因在染色体上的分布，这对基因的表达和调控起着重要作用。

染色体的数量和形态异常可能会导致遗传疾病的发生。

因此，对染色体的研究对于遗传学和医学的发展具有重要意义。

然而，本次实验也存在一些限制。

首先，我们只观察了人类细胞中的染色体，对于其他物种的染色体结构和功能还需要进一步研究。

其次，由于实验条件的限制，我们无法观察到染色体的具体基因序列和变异情况，这需要更高级的技术和设备来实现。

结论：通过本次染色实验，我们深入了解了染色体的结构和染色情况。

染色体在遗传学和医学领域具有重要作用，对于研究基因的表达和遗传疾病的发生机制具有重要意义。

未来，我们将继续深入研究染色体的功能和变异机制，为人类健康和遗传学的发展做出更大的贡献。

实验五、小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。

2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。

骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI 溶液、Giemsa染液等。

3．材料：65-90天健康小鼠【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。

注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。

秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。

2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。

3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。

低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。

4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷C arnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。

然后以1000 r / min 离心8 min。

5．固定弃去上清液，加5～6 ml Carnoy’s液，轻轻吹打细胞，静置固定20 min。

实验7 染色体制备技术〔实验目的〕1、学习染色体标本的制备技术2、掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤〔实验原理〕每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。

〔试剂材料〕1、试剂（1）0.1%秋水仙素溶液（生理盐水配置）（2）1mol/L盐酸（3）1%柠檬酸钠溶液（4）0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）Na2HPO4﹒12H2O 11.81g(Na2HPO4﹒2H2O 5.92g)KH2PO4 4.5g蒸馏水至1L（5）Giemsa原液（pH6.8）（pH6.8）Giemsa染粉1g，甘油33ml, 甲醇45ml 染粉在乳钵中滴加少许甘油研磨至无颗粒，再将全部甘油加入，放入60-65℃保温2小时后加入甲醇混匀。

棕色瓶中保存。

用时和磷酸缓冲液1：10混合（6）低渗液：0.4%KCl2、材料（1）洋葱根尖（2）女性口腔上皮（3）蟾蜍〔内容方法〕X染色体标本制片与观察1、取材：女性漱口后取口腔上皮细胞，涂在干净的载玻片上2、固定：95%乙醇固定10分钟，空气干燥3、水解：1mol/L盐酸室温水解10分钟，然后用新鲜蒸馏水冲洗4次，晾干4、染色：Giemsa染色10分钟，蒸馏水冲后90%乙醇分色1分钟，酒精灯过火脱水。

也可用0.2%甲苯安蓝染色5-15分钟，冲洗后干燥，观察注意事项：1、女性口腔、牙签和载波片要干净，避免杂质干扰。

2、口腔内第一次获取的上皮细胞要弃去，然后在相同部位再获取新鲜的上皮细胞。

3、上皮细胞涂片时尽量使细胞分散开，重叠的细胞影响观察。

4、人的X小体紧贴细胞核膜内侧，但是一般上皮细胞中只有30%-50%的细胞可以观察到X小体。

小鼠骨髓染色体制备1、小鼠按照4μg/g体重经腹腔注射秋水仙素，3-4小时后杀死动物，取后肢股骨和胫骨，纱布剥离所有肌肉，生理盐水洗净后剪去骨两端。

染色体标本制作与观察实验报告Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。

2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。

3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。

【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、%NaCl溶液、%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。

真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。

制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。

本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。

染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。

因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。

染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。

②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。

③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。