糖苷液相测定

高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量取黄芪250g，用60%的乙醇，分别以12倍量，10倍量，10倍量提取三次，每次1.5小时。

精制的药液在旋转蒸发仪中，旋转蒸干乙醇，将浓缩药液置于已干燥至恒重且称重的2号蒸发皿中,水浴蒸干,置烘箱中干燥3h(105℃),取出,置于干燥器中放置30min,称重，并记录重量。

2号蒸发皿重：213.9g，皿与药物总重：304.7g，提取药材：90.8g 测定黄芪药粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为1790.35μg/g。

含量测定方法与结果：仪器：美国SSI高效液相色谱仪色谱柱：BonChrom-c18,4.6*250mm,5μg,100A流动相：乙腈：水：甲酸=17：83：0.4；检测波长：260nm;流速:1ml/min;进样量:20ul；柱温:常温。

对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品约 1.15mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加流动相制成每lml含46μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取提取的黄芪细粉（过80目)约0.025g ,精密称定，置5ml量瓶中,加流动相至刻度,超声10min，摇匀,取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。

线性关系考察精密吸取上述对照品溶液，分别配制成含毛蕊异黄酮葡萄糖苷2.76，4.6，9.2，18.4，36.8，46μg/ml 的标准溶液,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液按上述色谱条件分析。

以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X)作图。

毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度在2.76-46mg/L 间与峰面积有良好的线性关系。

回归方程y=41784x-694.99(r=0.9992,n=6)。

精密度试验取9.2μg/ml毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液 , 按上述色谱条件连续进样5次,测得阿魏酸的峰面积的RSD为0.46%。

结果表明本法精密度良好。

峰面积（mvo/ts）平均值 RSD %（n=5) 417389415344418151.6 0.46%418197419690420138稳定性试验取含量测定的溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h 进行测定，得出毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.15%。

高效液相法测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量【摘要】目的：建立测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷含量的方法。

方法：高效液相法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SHIMADZU，Shim-pack VP-ODS 5μm 4.6mmI.D.×250mm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液（16.5:83.5）为流动相；流速：1.0ml/min。

理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

结果：结果表明毛蕊花糖苷在21.44～1286.40ng范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=0.000608765X+1.67921，r=0.9999，回收率为100.42%,RSD为1.2%。

结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量。

【关键词】高效液相法;返顾马先蒿;毛蕊花糖苷;含量[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）18-0006-02引言本品为玄参科植物返顾马先蒿[1]Pedicularis resupinata L.的干燥地上部分。

分布于我国东北、华北、山东、安徽、山西、甘肃、四川、贵州；欧洲、前苏联西伯利亚和远东地区，蒙古、朝鲜、日本也有分布，本品为蒙医常用药材，具有拢敛扩散之毒，清胃火，止泻的功能。

用于眼花，胃胀，痧症，肉毒症。

1.仪器、试剂与试药1.1 仪器:高效液相色谱仪为岛津LC-20A、LC-2010；二极管阵列检测器、紫外检测器；色谱数据工作站为LC-solution。

1.2 试剂与试药乙腈为色谱纯，其他均为分析纯试剂。

毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所）供含量测定用，批号为111530-200404、含量以94.8%计，批号为111530-201007。

2.溶液的制备2.1 对照品溶液的制备：精密称取毛蕊花糖苷对照品2.144mg，置100ml量瓶中，加流动相（乙腈-0.1%磷酸溶液（16.5∶83.5））溶解并稀释至刻度，即得（浓度为：21.44μg/ml）。

高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊糖总苷的含量关键词：利用高效液相色谱法对甜叶菊干叶中甜菊糖总苷含量开发出一种新的检测方法，通过单因素试验，确立了检测方法，即样品经30%乙腈超声提取、孔径为0.45μm的有机滤膜过滤后，选择C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以78%的0.1%磷酸水溶液+22%乙腈（体积比）为流动相，1.0mL/min的流速进行洗脱。

在210nm 波长及40℃柱温下利用DAD检测器检测，用外标法定量。

得出的图谱峰形尖锐，结果回收率高、检测结果准确、精密度高、重复性良好。

说明此方法开发具有较强的可行性。

关键词：高效液相色谱法；甜叶菊；甜菊糖总苷Determination of stevioside in stevia rebaudiana byhigh performance liquid chromatographyAuthor:Siqiao XieInstructor:Bingbing ChenAbsrtact:a new detection method for stevioside content in stevia rebaudiana dry leaves was developed by high performance liquid chromatography. through single factor test, the detection method was established, in other words,C18(250mm×4.6mm, 5μm) chromatographic column was selected after the sample was ultrasonically extracted with 30% acetonitrile and filtered by 0.45μm organic filter membrane. Elution was carried out at a flow rate of 1.0mL/min with 78% 0.1% phosphoric acid aqueous solution +22% acetonitrile (volume ratio) as mobile phase. At 210nm wavelength and 40℃ column temperature, DAD detector was used for detection and external standard method was used for quantification. The obtained chromatogram has sharp peak shape, high recovery rate, accurate test results, pinpoint accuracy and beautiful repeatability. This shows that the development of this method is feasible.Key words:high performance liquid chromatography; Stevia rebaudiana; Stevioside total glycoside1 前言食物是人类得以生存的必备保障，食物的主要成分与构成人体的基本物质相同，人类可从食物中获取人体生长的营养物质及能量。

一、实验目的1. 熟悉糖苷类化合物的提取和分离方法；2. 学习利用色谱技术进行糖苷的分离纯化；3. 掌握糖苷的鉴定和结构分析。

二、实验原理糖苷是一类重要的天然有机化合物，广泛存在于植物界。

提取糖苷的方法有水提法、醇提法、超声波提取法等。

本实验采用醇提法提取糖苷，利用薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）对提取的糖苷进行分离纯化，并通过核磁共振波谱（NMR）和质谱（MS）对分离纯化的糖苷进行结构鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物样品、乙醇、丙酮、石油醚、正己烷、无水硫酸钠、硅胶、薄层板、色谱柱、核磁共振波谱仪、质谱仪等。

2. 实验仪器：旋转蒸发仪、恒温水浴锅、分析天平、磁力搅拌器、分光光度计、紫外灯等。

四、实验步骤1. 糖苷的提取（1）将植物样品干燥、粉碎，过40目筛；（2）取适量粉末，加入适量乙醇，在室温下搅拌提取1小时；（3）过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，得到糖苷提取物。

2. 糖苷的分离纯化（1）薄层色谱法（TLC）分离①点样：将糖苷提取物点在薄层板上，用石油醚-乙酸乙酯（V/V=8:2）为展开剂；②展开：将薄层板放入展开缸中，展开至前沿；③显色：用紫外灯照射薄层板，观察糖苷的Rf值，并标记出斑点；④刮取：刮取Rf值相同的斑点，进行下一步分离。

（2）高效液相色谱法（HPLC）分离①制备糖苷样品：将刮取的糖苷斑点溶解于甲醇中，制成糖苷样品；②进样：将糖苷样品进样至HPLC仪；③分析：通过比较保留时间，确定糖苷的纯度。

3. 糖苷的鉴定（1）核磁共振波谱（NMR）分析①将分离纯化的糖苷溶解于DMSO-d6，制成溶液；②将溶液滴在NMR样品管中，进行核磁共振波谱分析；③分析糖苷的结构，确定其化学位移和耦合常数。

（2）质谱（MS）分析①将分离纯化的糖苷溶解于甲醇，制成溶液；②将溶液进样至质谱仪；③分析糖苷的分子量和碎片信息，确定其结构。

五、实验结果与讨论1. 实验结果（1）糖苷的提取：根据薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）的结果，从植物样品中成功提取出糖苷。

糖苷键类型测定方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：糖苷键是一种连接两个糖分子的键，它是生物大分子中非常重要的一种键。

糖苷键的类型测定方法可以帮助我们更好地了解生物大分子的结构和功能。

本文将介绍一些常用的糖苷键类型测定方法，并探讨它们的优缺点以及应用范围。

一、核磁共振波谱（NMR）核磁共振波谱是一种常用的分析方法，可以用来确定分子结构中的碳、氢、氧等原子的位置以及它们之间的相互关系。

在糖苷键类型的测定中，通过核磁共振技术可以确定糖分子中糖与糖之间的连接方式和位置。

通过观察糖分子在不同耦合常数下的谱图，可以确定糖苷键的类型，如α-糖苷键和β-糖苷键等。

核磁共振波谱技术具有高分辨率和高灵敏度的优点，可以提供详细的结构信息。

核磁共振波谱技术也存在一些局限性，如需要高纯度的样品、对仪器设备的要求较高等。

二、质谱（MS）三、红外光谱（IR）四、X射线衍射（XRD）糖苷键类型的测定方法有核磁共振波谱、质谱、红外光谱、X射线衍射等多种，每种方法都有其独特的优缺点和应用范围。

在选择糖苷键类型测定方法时，可以根据样品的性质和需要确定最合适的方法。

希望通过本文的介绍，读者对糖苷键类型的测定方法有更深入的了解，为研究生物大分子提供更多的参考和帮助。

第二篇示例：糖苷键是生物分子中非常重要的连接方式，它将葡萄糖等单糖分子通过共轭键连接起来形成多糖。

而糖苷键的类型测定方法则是一种用来确定糖苷键种类及其连接位置的技术手段。

本文将介绍一些常用的糖苷键类型测定方法，帮助读者更加深入地了解糖苷键的结构和性质。

1. 红外光谱法红外光谱是一种常见的结构分析方法，可以用来确定化合物中是否存在糖苷键。

在红外光谱中，糖苷键通常表现为特定的吸收峰，其位置和强度可以帮助确定糖苷键的存在和类型。

通过比对样品的红外光谱和标准物质的光谱，可以准确地确定糖苷键种类。

2. 液相色谱法液相色谱是一种高效的色谱技术，可以用来分离和鉴定复杂混合物中的不同成分。

高效液相色谱法同时测定右旋糖酐发酵液中的多种糖分右旋糖酐为一种由若干葡萄糖分子脱水形成的无毒无害的高分子聚合物，具有免疫刺激、抗炎症、抗微生物、抗感染、抗肿瘤、抗辐射、降低胆固醇以及治愈创伤等生物学活性。

中低分子量的葡聚糖作为血浆补充剂在医学、兽药生产被广泛应用。

近年来，将中低分子量葡聚糖的衍生物制备药物载体输送系统成为国内外学者研究的热点，具有广阔的应用前景。

右旋糖酐的合成体系组分复杂，随着右旋糖酐的生成，发酵液黏度增加，一般常用测定体系黏度的方法对转化过程进行监测。

但转化体系的黏度不仅与右旋糖酐的生成量和分子量有关，还会受到发酵液中其他组分变化的影响，难以准确监测转化过程的进行。

单一糖分或多种糖分含量的测定常用化学法、比色法、旋光法、气相色谱法等方法。

化学分析方法只能测定体系中各种糖分的总量，而不能分别测定各种糖分的含量。

气相色谱法虽可分别测定不同糖的含量，灵敏度高，但由于糖难以汽化，必须进行衍生化反应才可检测，使检测步骤繁琐。

能够快速、准确同时测定多种低分子量糖的检测方法并不多，其中高效液相色谱法是一种测定低分子量糖较好的方法。

本文针对右旋糖酐转化体系的特征，采用流动相乙腈水溶液预处理发酵液，使其中右旋糖酐沉淀，消除对发酵液中糖分测定的影响，选用OSMOSILSugar-D(4.6 mm I.D.times;250 mmtimes;0.46 mu;m)色谱柱，通过色谱条件选择，同时测定右旋糖酐发酵液中蔗糖、果糖和葡萄糖等糖分的含量，测定方法操作简单，快速准确，为监控生物转化合成右旋糖酐过程提供了一种技术途径。

1 材料与方法1.1 材料与试剂蔗糖、果糖、葡萄糖(标准品)、乙腈(色谱纯)：国药集团化学试剂有限公司;菌种(CICC20724)：中国工业微生物菌种保藏管理中心。

1.2 仪器与设备LC-20AD高效液相色谱仪(配RID-10A示差折光检测器)：日本岛津公司;COSMOSIL Sugar-D色谱柱：日本NACALAI TESQUE公司;高压蒸汽灭菌锅：上海申安医疗器械公司;恒温摇床培养箱：瑞士Adolf Kuhner 公司;冷冻离心机：湖南湘仪公司。

高效液相色谱法检测运动饮料中甜菊糖苷周文清【摘要】建立一种用高效液相色谱-PDA检测法测定运动饮料中甜菊糖苷的检测方法。

样品前处理采用硅胶固相萃取小柱进行富集和净化，氮气吹干后用流动相复溶上机检测。

采用Waters RP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）分离，以乙腈∶水=30∶70（体积比）作为流动相，用PDA检测器检测，外标法峰面积定量。

结果表明，9种甜菊糖苷组分在20.0μg/mL~200.00μg/mL浓度范围内线性良好，相关系数r2为0.991~0.999，检出限在1.0μg/mL~3.0μg/mL，定量限为3.0μg/mL~9.0μg/mL，加标回收率达到81.4%~90.5%。

%A rapid and effective method was established for the determination of steviol glycosides in sports drink by high performance liquid chromatography-PDA detection method. The samples were concentrated and purified by silica gel solid phase extraction column.The elution liquid was dried under nitrogen, and detected af-ter re-dissolution with mobile phase. The separation of targeted compound was performed on a Waters RP C 18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm, 5μm) usingacetonitrile∶water (30∶70) as mobile phase, with PDA detector and external standard method peak area quantification. The linear range of nine kinds stevioside components was in the range of 20.0μg/mL-200.0μg/mL with a correlation coefficient of 0.991-0.999. The de-tection limit was 1.0μg/mL-3.0μg/mL and the quantitative limit was 3.0μg/mL-9.0μg/mL. The recovery rate w as 81.4%-90.5%.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)001【总页数】4页(P161-164)【关键词】高效液相色谱;运动饮料;甜菊糖苷【作者】周文清【作者单位】景德镇陶瓷大学，江西景德镇333000【正文语种】中文甜菊糖苷是从甜菊叶中提取的天然甜味剂，其在人体内不参与代谢，热值仅为蔗糖的1/300，且具有清热、利尿、调节胃酸的功效，试验证明其无致癌性、遗传毒性、生殖/发育毒性，近年来在食品和医学中得到广泛应用，目前已被我国及美国、日本等20多个国家批准为食品添加剂使用，世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会建立甜菊糖苷ADI（每日允许摄入量）值为4mg/（kg体重·d）。

第1篇一、实验目的1. 学习糖苷的提取和鉴定方法。

2. 掌握糖苷的检测原理和操作步骤。

3. 提高实验操作技能，培养严谨的实验态度。

二、实验原理糖苷是一类重要的天然有机化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。

糖苷的提取和鉴定是研究天然产物的重要手段。

本实验通过提取植物样品中的糖苷，利用化学和光谱分析方法对其进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物样品（如板蓝根、丹参等）、乙醇、盐酸、氨水、水、氯仿、正己烷、无水硫酸钠、硝酸银、碘化钾等。

2. 实验仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、超声波清洗器、电子天平、分析天平等。

四、实验步骤1. 糖苷提取（1）称取适量植物样品，置于索氏提取器中。

（2）加入适量乙醇，回流提取3小时。

（3）将提取液过滤，收集滤液。

（4）将滤液旋转蒸发至近干，加入适量水溶解残渣。

（5）将溶液通过氯仿-正己烷（体积比1:1）萃取，弃去氯仿层。

（6）将水层通过无水硫酸钠干燥，浓缩至近干，加入适量水溶解残渣。

2. 糖苷鉴定（1）紫外可见分光光度法：取适量样品溶液，在特定波长下测定吸光度，与标准曲线对照，确定样品中糖苷的含量。

（2）高效液相色谱法：将样品溶液进行色谱分析，与标准品色谱图对照，鉴定样品中糖苷的种类。

五、实验结果与分析1. 紫外可见分光光度法通过测定样品溶液在特定波长下的吸光度，得到标准曲线。

根据标准曲线，计算出样品中糖苷的含量。

2. 高效液相色谱法将样品溶液进行色谱分析，与标准品色谱图对照，鉴定出样品中存在的糖苷种类。

六、实验讨论1. 糖苷提取过程中，选择合适的提取溶剂和提取方法对提取效果有很大影响。

本实验采用乙醇回流提取，提取效果较好。

2. 在糖苷鉴定过程中，紫外可见分光光度法和高效液相色谱法具有不同的适用范围。

紫外可见分光光度法适用于定量分析，高效液相色谱法适用于定性分析。

3. 本实验成功提取并鉴定了植物样品中的糖苷，为后续研究糖苷的药理作用提供了基础。