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西安长安医院检 验 科甲胎蛋白(AFP )测定(化学发光法)文件编号：CA-JY-CZ-MY第 二 版执行日期：2010-1-4共5页 第1页１ 原理AFP 是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于20ng/ml 。
本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)。
AFP 测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－抗原－酶标记抗体复合物”。
然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方。
这时再加入底物：4-甲基伞型酣磷酸盐(4-Mup)。
酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup 分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣(4-Mu)，它在365nm 激发光的照射下，发出448nm 的荧光，经过荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。
2 标本采集与处理2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、ACD 、CPDA-1或EDTA ）、尿液(晨尿、随即尿、24小时尿等)或其他体液(羊水等)。
2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（83μl-238μl ）。
2.3患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起体内含有人抗鼠抗体（HAMA ），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。
2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。
样本采集要求：避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集；2 3确保离心速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰。
避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得稳定的结果。
若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄清后再进行测试。
肿瘤标志物AFP指标解读展开全文1、原发性肝癌现状在全世界范围内，原发性肝癌（PHC）是威胁人类生命健康的第二大癌症死因。
我国是肝癌高发国，每年有大约383000人死于肝癌，约占全世界肝癌死亡总数的51%。
而这些人群中，绝大多数发现于中晚期，延误了早期治疗的绝佳时机。
因而，肝癌发病的控制亟需更简单、高效、快速地筛查和早期诊断手段。
2、AFP与PHC目前，PHC的筛查主要依赖于肝超声和成像造影。
然而近年来，由于指标结果主观性更少，且比成像灵敏度更高，肿瘤标志物正引起越来越多的重视。
在所有的血清标志物中，AFP是用于PHC检测最常用也是最可靠的标志物之一，几乎70%的PHC患者中都有AFP水平异常。
2.1 AFP的性质及其生理作用AFP属于血清白蛋白家族，其编码基因位于4号染色体的长臂上。
AFP最初产生于胎盘层和卵黄囊，在胚胎期，AFP及其他血清白蛋白家族在肝脏中表达，而与其他这些蛋白不同的是，在出生后几周内血清中的AFP浓度几乎完全丧失了表达且几乎不可检测得到（<10 ng/mL）。
AFP糖链异构体主要有3大类：AFP-L1、AFP-L2 和AFP-L3，它们与扁豆凝集素的亲和力不同，且在不同的生理或病理状态下各自的表达量也不同。
在胚胎期和围产期，AFP的主要功能是保证各种分子（如重金属铜或镍、脂肪酸、胆红素及某些特定药物）的运输。
此外，AFP由于具有免疫抑制作用，可防止母体对胎儿的排斥作用。
2.2 AFP用于PHC诊断正常人血清中的AFP含量很低，AFP的血浆浓度20 ng/mL是人体的病理学阈值，而浓度达400 ng/mL以上时通常即被视为PHC诊断的可信因素。
根据病理学特征的不同，包括肿瘤细胞的分化程度和肿瘤组织大小，AFP在PHC患者体内水平的升高程度不同。
由于检测方法学的不断改进，目前AFP对PHC的阳性检测率已达90%以上。
在排除活动性肝病、妊娠、胚胎瘤的情况下，一般认定血清AFP浓度＞400 ng/mL达4周，或＞200 ng/mL持续8周以上即被诊断为PHC。
ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测摘要】目的：探讨ELISA法甲胎蛋白（AFP)的检测方法及意义。
方法：对原发性肝癌患者30例，对ELISA法甲胎蛋白（AFP)方法及临床意义进行分析。
结果：ELISA测得的AFP含量取不同浓度的混合血清，AFP浓度为10.7lng/mL、18.08ng/mL、46.83ng/mL，分别加入不同浓度定值血清，用ELISA法分别检测其回收率。
用ELSIA测得的回收率分别在93.90％～98.16％，平均回收率分别为96.42％，ICA的检测精度高，稳定性强。
结论：AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。
【关键词】ELISA法；甲胎蛋白（AFP)；检测【中图分类号】R735.7 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0058-02甲胎蛋白(AFP)是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。
AFP是胚胎发育早期的重要血清成分，由卵黄囊和肝细胞合成。
出生后一年内降至正常水平[1]。
AFP有很强的免疫抑制功能。
当肝细胞发生病变时，AFP基因表达重新开放，于血清中可检测到AFP浓度显著升高。
1.资料与方法1.1 实验对象选取2015年1月-2016年6月收治的门诊或住院原发性肝癌患者30例，年龄20～79岁，平均年龄54.5±3.5岁。
所有患者增根据临床表现，经B超、CT及各项实验室指标检查确诊。
1.2 实验试剂微孔反应板用抗AFP单抗体包被。
2～8℃干燥保存，有效期内保持稳定。
酶结合物溶于缓冲液中，含蛋白稳定剂。
2～8℃保存，有效期内保持稳定。
显色液A：0.05M乙酸缓冲液，含0.02%过氧化氢，存于滴瓶中。
2～8℃保存，有效期内保持稳定。
显色液B：含色素基质和稳定剂，存于滴瓶中。
2～8℃避光保存，有效期内保持稳定。
ELISA罚测定甲胎蛋白（AFP）操作规程1.检验目的检测血清AFP主要是用于原发性肝癌、生殖系统肿瘤等恶性肿瘤的诊断或或鉴别诊断，可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估，另外还可作为唐氏综合征、早期胎儿先天性畸形及肝癌高发区的普查指标。
2.方法原理采用ELISA双抗体夹心法：向抗AFP抗体包被的聚苯乙烯反应板微孔内加入待检标本，再加酶标记抗AFP抗体，加入酶底物显色，用终止液终止反应，测定吸光度值，测定光密度，查标准曲线，计算待测标本中AFP含量。
3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
AFP监测方案1. 概述AFP（Alpha-fetoprotein）是一种胚胎发育期间由胎肝分泌的一种糖蛋白，正常情况下在出生后会逐渐减少。
然而，AFP在某些肿瘤中（如肝癌、睾丸癌和卵巢癌）的产生会显著增加。
为了早期发现这些肿瘤并进行及时治疗，需要建立一套可靠的AFP监测方案。
在本文中，我们将介绍AFP监测方案的具体步骤和注意事项。
2. AFP监测步骤2.1. 采样首先，需要采集患者的血液样本进行AFP检测。
血液样本可以通过以下几种方式获得：•静脉采血：通过在患者的手臂上绑扎一根绷带，然后在患者的静脉上穿刺来获取血液样本。
•皮下注射：通过使用一根细长的针头将血液抽取到注射器中。
建议使用无菌的采血器材，并确保采样过程无菌，以避免样本受到外界污染。
2.2. 检测采集的血液样本需要送往实验室进行检测。
AFP测定可以使用多种方法，包括酶免疫法、放射免疫法和化学发光法等。
选择合适的测定方法取决于实验室的设备和经济情况。
在进行检测之前，需要对血液样本进行预处理，以去除可能干扰测定结果的物质。
预处理步骤可以包括离心、过滤和稀释等。
2.3. 数据分析在获得测定结果后，需要进行数据分析来判断患者的AFP水平是否异常。
一般来说，正常成年人的AFP水平应低于20ng/ml。
如果患者的AFP水平超过这个范围，可能存在肿瘤的风险。
然而，AFP水平也可能受到其他因素的影响，如妊娠和肝炎等。
因此，在进行数据分析时，需要综合考虑患者的病史以及其他临床表现来判断是否需要进行进一步的检查。
3. AFP监测注意事项在进行AFP监测时，需注意以下几点：•采样时间：最好在早晨采集血液样本，因为在早晨的AFP水平较稳定。
•采样频率：根据患者的具体情况，可以选择每月或每季度进行一次AFP监测，以便及时发现异常情况。
•少食脂肪食物：脂肪食物可能影响AFP测定结果，因此在采样前建议患者避免食用脂肪食物。
•阴性结果：AFP水平正常并不排除肿瘤的存在，因此，在出现其他临床症状时仍需进一步检查。
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AFP基因SiRNA表达质粒的构建及鉴定
亓同钢;汪运山;王芳;吴文秀;关广聚
【期刊名称】《山东大学学报：医学版》
【年(卷),期】2004(42)3
【摘要】目的:构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因siRNA表达质粒,为进一步研究AFP 基因功能奠定基础?方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化的pSilencer3.0-H1连接?转化大肠杆菌,扩增?纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列?结果:纯化的质粒的分子量为2.8 Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符?结论:成功构建了针对AFP基因的siRNAs表达质粒?
【总页数】3页(P353-354)
【关键词】质粒;甲胎蛋白类;基因表达
【作者】亓同钢;汪运山;王芳;吴文秀;关广聚
【作者单位】山东大学第二医院临床分子生物学实验室;山东大学临床医学院济南市中心医院中心实验室
【正文语种】中文
【中图分类】Q782
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