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一、实验目的1. 学习和掌握紫外-可见分光光度法在药物分析中的应用。
2. 掌握异烟肼的定量分析方法。
3. 培养实验操作能力和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid，INH）是一种常用的抗结核药物，其分子中含有苯环和肼结构。
异烟肼在紫外-可见光区有较强的吸收，可利用紫外-可见分光光度法进行定量分析。
本实验采用紫外-可见分光光度法，以异烟肼在特定波长下的吸光度与浓度成正比的关系，通过测定异烟肼溶液的吸光度，计算出其浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、锥形瓶、吸耳球等。
2. 试剂：异烟肼标准品、乙醇、氢氧化钠溶液、硫酸溶液、磷酸盐缓冲溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）配制一系列不同浓度的异烟肼标准溶液。
（2）将标准溶液分别置于1cm比色皿中。
（3）在特定波长下，测定标准溶液的吸光度。
（4）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）准确称取一定量的异烟肼样品，用乙醇溶解并定容至100mL。
（2）取一定量的样品溶液，置于1cm比色皿中。
（3）在特定波长下，测定样品溶液的吸光度。
（4）根据标准曲线，计算出样品中异烟肼的浓度。
五、结果与讨论1. 标准曲线的绘制通过绘制标准曲线，可知异烟肼在特定波长下的吸光度与浓度呈线性关系，相关系数R²大于0.99，表明该方法具有较高的准确性和可靠性。
2. 样品测定根据标准曲线，计算出样品中异烟肼的浓度为x mg/mL。
3. 实验误差分析（1）实验过程中，可能存在以下误差来源：a. 称量误差：在称取样品时，由于天平的精度限制，可能导致称量误差。
b. 体积误差：在配制标准溶液和样品溶液时，由于移液管、容量瓶等仪器的精度限制，可能导致体积误差。
c. 吸光度测量误差：在测定吸光度时，由于仪器精度、操作技巧等因素，可能导致吸光度测量误差。
（2）为降低实验误差，可采取以下措施：a. 选用高精度的天平和移液管，确保称量和移液操作的准确性。
异烟肼片含量测定实验报告一、实验目的1. 掌握测定异烟肼含量的方法。
2. 了解反应机理及测定原理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
二、实验原理1. 反应机理异烟肼在酸性条件下与4-氨基乙酰显色剂（PABA）发生偶联反应，形成带有色素的产物。
反应方程式如下：异烟肼+PABA+HCl→带色产物2. 测定原理本实验采用比色法进行异烟肼含量的测定。
首先将样品加入酸性介质中，再加入PABA，使其与异烟肼发生偶联反应形成带色产物。
经过取等波长（λ=540nm）进行光度计测定，根据标准曲线计算出异烟肼的含量。
三、实验步骤1. 原料准备（1）异烟肼片：取适量异烟肼片，称约0.5g，粉碎并过筛。
（2）标准品溶液：取异烟肼片粉末约10mg，加入10ml甲醇，振摇均匀后称取1ml，放入10ml量瓶中，加甲醇至刻度，打乱均匀后制成含1mg/ml异烟肼的标准品溶液。
（3）0.02mol/L盐酸：向1L锥形瓶中加入4.20ml盐酸，加水至刻度。
（4）PABA溶液：取约100mg PABA，加入5ml甲醇，振摇溶解，再加10ml盐酸溶液中，振摇溶解，定容至50ml。
（2）精密称取约75mg异烟肼粉末，放入锥形瓶中，再加入3ml 0.02mol/L盐酸溶液，摇匀2-3分钟，溶解样品。
（3）加入约1ml PABA溶液，再加滴定管滴加0.02mol/L的盐酸溶液至pH=2.7左右。
顺序是先滴至酸化终点，再回滴1-2滴至以恰好pH=2.7为准。
（4）用0.02mol/L盐酸溶液定容至50ml，摇匀均称混匀的溶液放置于室温中静置10分钟。
3. 测定标准曲线（1）取一系列预配不同浓度的标准品异烟肼溶液，按上述方法进行测定，分别测定其吸光度。
（2）根据吸光度与浓度的线性关系，绘制出标准曲线。
4. 数据记录与处理（1）测定样品的溶液吸光度，根据标准曲线计算出样品吸光度对应的含量。
（2）计算出样品的含量，并计算平均值。
4. 实验结果样品A吸光度为0.652，样品B吸光度为0.654，样品C吸光度为0.650。
一、实验目的1. 掌握异烟肼含量的测定方法。
2. 理解异烟肼含量测定的原理和反应机理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
4. 提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid）是一种常用的抗结核病药物，其含量测定对于保证药物质量和临床疗效具有重要意义。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定异烟肼片剂中的含量。
原理如下：1. 异烟肼在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐。
2. 重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐发生偶联反应，生成偶氮染料。
3. 偶氮染料的最大吸收波长为530nm，根据吸光度与异烟肼含量的线性关系，计算样品中异烟肼的含量。
三、实验材料与仪器1. 试剂：异烟肼对照品、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、甲醇、水等。
2. 仪器：高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、电子天平、旋涡混合器、离心机等。
四、实验步骤1. 样品前处理：取异烟肼片剂若干，精密称定，研细，过筛，取适量粉末，加入适量甲醇，超声提取，离心分离，取上清液待测。
2. 对照品溶液制备：精密称取异烟肼对照品适量，加入适量甲醇，超声溶解，制成浓度为100mg/L的对照品溶液。
3. 标准曲线绘制：分别取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，置于10mL容量瓶中，加入适量盐酸，按实验方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4. 样品测定：取处理后的样品溶液，按实验方法测定吸光度，从标准曲线上查出样品中异烟肼的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：在530nm波长下，吸光度与浓度呈线性关系，线性方程为A=0.012C+0.0056，相关系数R²=0.9999。
2. 精密度试验：对同一样品进行多次测定，RSD为1.23%，表明实验具有良好的精密度。
3. 重复性试验：对同一批样品进行重复测定，RSD为1.45%，表明实验具有良好的重复性。
4. 稳定性试验：样品溶液在室温下放置24小时内，RSD为1.10%，表明样品溶液在24小时内稳定。
1. 熟悉异烟肼片的制备方法。
2. 掌握片剂制备的基本操作流程。
3. 了解异烟肼片的处方组成和质量要求。
二、实验原理异烟肼片是一种抗结核病药物，其主要成分为异烟肼。
制备异烟肼片的方法有压片法和溶片法，本实验采用溶片法制备异烟肼片。
三、实验材料与仪器1. 材料与试剂：- 异烟肼原药- 碳酸钙- 硬脂酸镁- 稀盐酸- 蒸馏水- 纯化水2. 仪器：- 粉碎机- 搅拌器- 烘箱- 筛分器- 天平- 药片机- 热压机- 粉末流动性测定仪1. 粉碎：将异烟肼原药、碳酸钙、硬脂酸镁按比例混合，用粉碎机粉碎至粒度小于100目。
2. 过筛：将粉碎后的混合物过筛，去除不合格颗粒。
3. 配制辅料溶液：将硬脂酸镁用少量稀盐酸溶解，加入蒸馏水定容至所需体积。
4. 混合：将过筛后的混合物与辅料溶液混合均匀。
5. 制备片剂：将混合物倒入药片机，按设定参数压制出片剂。
6. 干燥：将压制好的片剂放入烘箱中，在60℃下干燥2小时。
7. 粉碎：将干燥后的片剂用粉碎机粉碎至粒度小于100目。
8. 筛分：将粉碎后的片剂过筛，去除不合格颗粒。
9. 质量检查：按照药典规定，对制备的异烟肼片进行外观、含量、溶出度等质量检查。
五、实验结果与分析1. 外观：制备的异烟肼片呈白色，表面光滑，无杂质。
2. 含量：按照药典规定，测定异烟肼片含量，结果符合要求。
3. 溶出度：按照药典规定，测定异烟肼片的溶出度，结果符合要求。
4. 结论：本实验成功制备了异烟肼片，其外观、含量、溶出度等质量指标均符合药典规定。
六、实验总结1. 通过本实验，掌握了异烟肼片的制备方法，熟悉了片剂制备的基本操作流程。
2. 在实验过程中，注意了各种试剂的准确称量，确保了实验结果的准确性。
3. 通过对制备的异烟肼片进行质量检查，验证了实验方法的有效性。
4. 在实验过程中，发现了以下几点不足：- 实验过程中，部分片剂表面出现裂纹，可能是因为压制过程中压力不足。
- 实验过程中，部分片剂出现分层现象，可能是因为混合不均匀。
中国药典2020年版注射用异烟阱【性状】本品为臼色或类臼色片。
【鉴别】(1)取本品的细粉适显（约相当千异烟阱0.lg), 加水10m l，振摇，滤过，滤液照异烟阱项下的鉴别(1)项试验，显相同的反应。
(2)在含械测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
(3)取本品细粉适量（约相当千异烟阱50mg)，加乙醇10ml，研磨溶解，滤过，滤液蒸干，残渣经减压干燥，依法测定（通则0402)。
本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集166图）一致。
【检查】游离阱照薄层色谱法（通则0502)试验。
供试品溶液取本品细粉适显，加溶剂使异烟阱溶解并定量稀释制成每1ml中约含异烟阱0.l g的溶液，滤过，取续滤液。
溶剂、对照品溶液、系统适用性溶液、色谱条件、系统适用性要求与测定法见异烟阱游离阱项下。
限度在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
有关物质照高效液相色谱法（通则0512)测定。
供试品溶液取本品细粉适量，加水使异烟阱溶解并稀释制成每1ml中约含异烟阱0.5mg的溶液，滤过，取续滤液。
对照溶液精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中用水稀释至刻度，摇匀。
色谱条件系统适用性要求与测定法见异烟阱有关物质项下。
限度供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大千对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%），各杂质峰面积的和不得大千对照溶液主峰面积(1.0%）。
溶出度照溶出度与释放度测定法（通则0931第一法）测定。
溶出条件以水1000ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时取样。
测定法取溶出液5ml，滤过，精密量取续滤液适量，用水定最稀释制成每1ml中含10-20µg的溶液，照紫外－可见分光光度法（通则0401)，在263nm的波长处测定吸光度，按C6H7NO的吸收系数(E亡）为307计箕每片的溶出篮。
限度标示讯的60%，应符合规定。
一、实验目的1. 掌握异烟肼的鉴定原理和方法。
2. 学习异烟肼的定量分析方法。
3. 培养实验操作技能，提高分析能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid）是一种常用的抗结核病药物，化学名称为4-吡啶甲酰肼。
本实验采用紫外分光光度法对异烟肼进行定量分析。
三、实验材料1. 异烟肼标准品2. 0.1mol/L硫酸溶液3. 0.01mol/L氢氧化钠溶液4. 1%氯化钠溶液5. 1cm比色皿6. 紫外可见分光光度计7. 移液管8. 容量瓶9. 烧杯10. 玻璃棒四、实验步骤1. 标准溶液的配制- 称取0.1g异烟肼标准品，用少量0.1mol/L硫酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶中，用0.1mol/L硫酸溶液定容至刻度，摇匀。
此溶液浓度为0.1mg/mL。
2. 样品溶液的配制- 称取一定量的异烟肼样品，用0.1mol/L硫酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶中，用0.1mol/L硫酸溶液定容至刻度，摇匀。
3. 显色反应- 取2mL样品溶液和2mL标准溶液，分别置于两个10mL容量瓶中，加入2mL 0.01mol/L氢氧化钠溶液，混匀，静置5分钟。
4. 测定吸光度- 将显色后的溶液置于1cm比色皿中，用紫外可见分光光度计在275nm波长处测定吸光度。
5. 计算- 根据标准曲线，计算样品中异烟肼的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制- 以异烟肼浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得异烟肼的含量。
3. 结果分析- 样品中异烟肼的含量与理论值相符，说明本实验方法准确可靠。
六、实验讨论1. 本实验采用紫外分光光度法对异烟肼进行定量分析，该方法简便、快速、准确。
2. 实验过程中，应注意控制显色反应时间，以确保显色反应充分。
3. 标准曲线的线性范围应尽量宽，以提高实验的准确度。
4. 本实验结果说明，所配制的样品溶液和标准溶液具有较好的稳定性。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了异烟肼的鉴定原理和方法，学习了异烟肼的定量分析方法，提高了实验操作技能和分析能力。
鉴别异烟肼的方法异烟肼是一种常用的抗结核药物，具有抗酸杆菌活性，并用于治疗结核病。
在药物治疗中，正确鉴别异烟肼非常重要，以确保患者接受到正确的治疗。
对于异烟肼的鉴别，可以从以下几个方面进行考虑：1. 外观鉴别：首先，我们可以通过观察异烟肼的外观来进行初步的鉴别。
异烟肼一般呈白色或类白色结晶或结晶性粉末，具有特殊的氨糖烟味。
检查时应注意颜色、形状和颗粒大小等特征，与正常异烟肼的外观进行对比。
2. 溶解性鉴别：异烟肼在水中的溶解度较低，溶解时呈呈酸性环境。
可以将一定量的样品加入水中，并观察是否完全溶解。
正常的异烟肼应当在酸性条件下充分溶解，并且呈无色透明溶液。
3. 化学试剂鉴别：可以使用一些化学试剂来鉴定异烟肼的化学性质。
例如，用伯林试剂（含氯化钾、硫酸铁）进行检测，正常的异烟肼样品会呈现出深红色沉淀；使用硝酸银试剂时，正常的异烟肼样品会产生棕色沉淀。
这些反应可以用来判断样品中是否存在异烟肼。
4. 红外光谱分析：红外光谱分析是一种常用的药品鉴别方法，可以通过样品的红外光谱图谱来鉴别异烟肼。
正常的异烟肼具有特征性的红外光谱图谱，可通过与标准红外光谱进行比对来对样品进行鉴定。
5. 薄层色谱分析：薄层色谱分析是一种常见的药物分析方法，可以用来鉴定样品中是否含有异烟肼。
将样品进行薄层层析分离，然后用特定的显色剂或紫外灯进行观察，正常的异烟肼样品会出现特定的色带，与标准异烟肼进行对比。
6. 液相色谱分析：液相色谱分析也是一种常用的药物分析方法，可以用来鉴别异烟肼。
通过将样品进行液相色谱分离，根据样品的保留时间和峰形进行鉴定，与标准异烟肼进行对比。
除了上述方法，还可以使用其他一些仪器分析方法如核磁共振、质谱等对异烟肼进行鉴定。
总结起来，鉴别异烟肼可以通过外观鉴别、溶解性鉴别、化学试剂鉴别、红外光谱分析、薄层色谱分析、液相色谱分析等多种方法进行。
根据不同的实验条件和设备的可用性，选择合适的鉴定方法进行鉴别，以确保药品的质量和治疗的有效性。
一、实验目的1. 学习并掌握异烟肼的质量测定方法。
2. 熟悉紫外-可见分光光度法的原理和应用。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼是一种抗结核药物，其分子结构中含有芳香族硝基。
根据紫外-可见分光光度法的原理，异烟肼在特定波长下具有特征吸收，通过测定吸光度，可以计算出异烟肼的质量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、移液器、容量瓶、试管等。
2. 试剂：异烟肼标准品、无水乙醇、蒸馏水、硝酸银溶液等。
四、实验步骤1. 标准溶液配制（1）准确称取异烟肼标准品10.0mg，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，得到浓度为100mg/mL的标准溶液。
（2）分别取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL标准溶液于5个10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，得到浓度分别为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL的标准溶液。
2. 样品溶液配制（1）准确称取异烟肼样品10.0mg，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，得到浓度为100mg/mL的样品溶液。
（2）分别取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL样品溶液于5个10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，得到浓度分别为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL的样品溶液。
3. 吸收度测定（1）将标准溶液和样品溶液在最大吸收波长下（λmax）测定吸光度。
（2）以吸光度为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。
4. 样品质量测定（1）根据样品溶液的浓度和体积，计算样品溶液中异烟肼的质量。
（2）根据标准曲线，计算出样品溶液中异烟肼的浓度。
（3）计算样品中异烟肼的质量百分含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线以吸光度为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，线性范围为1mg/mL～5mg/mL。
实验一异烟肼原料药的质量分析异烟肼是一种常用的处方药物，被广泛用于结核病的治疗。
而异烟肼的质量分析对于确保药物的安全性和有效性至关重要。
本文将对异烟肼原料药的质量分析进行详细探讨。
异烟肼原料药的质量分析包括外观检查、物理性质、化学性质、纯度和含量分析等多个方面。
首先，外观检查是质量分析的第一步。
通过外观检查可以直观地了解异烟肼原料药是否符合相关标准，是否有明显的外观变化。
异烟肼原料药通常呈白色结晶状或结晶粉末状，无异味。
若存在异常的颜色、气味或有异物等情况，可能表示异烟肼原料药存在质量问题。
其次，物理性质是另一个重要的质量分析指标。
物理性质包括颗粒度、溶解度、熔点等方面。
颗粒度可以通过粒度测定方法来确定，其结果应符合相关规定。
异烟肼原料药的溶解度也是质量评估的重要指标之一，溶解度的测定可以采用不同溶剂，如水、甲醇等，在一定温度条件下进行。
此外，熔点是判断异烟肼原料药纯度的关键参数之一，正常情况下，异烟肼原料药的熔点应该在163-167℃之间。
接下来，化学性质的分析也是质量分析的核心之一。
常用的化学性质测试包括酸度（以硫酸为参考）、溶解性、氯含量和水含量等。
酸度测试可以判断异烟肼原料药的纯度和酸碱中和反应情况。
溶解性测试则可以评估异烟肼原料药在不同溶剂中的溶解度，从而为后续药物制剂提供参考。
氯含量和水含量的测试可以反映异烟肼原料药是否受到了不当储存或加工等因素的影响。
此外，纯度和含量分析也是异烟肼原料药质量分析的重要环节。
纯度分析主要通过色谱、质谱等分析手段来确定异烟肼原料药的纯度，分析结果应符合相关标准。
含量分析则是通过化学分析等方法来确定异烟肼原料药中异烟肼的含量，通常采用高效液相色谱法（HPLC）进行测定。
总结来说，异烟肼原料药的质量分析是确保药物质量安全和有效的重要步骤。
通过外观检查、物理性质、化学性质、纯度和含量分析等多个方面的评估，可以全面了解异烟肼原料药的质量情况，为制药过程提供科学依据和质量保证。
药物分析实验指导怀化学院化学化工系药学教研室二○一二年十二月目录实验一氯化钠的杂质检查实验二葡萄糖注射液的质量分析实验三苯甲酸钠的含量测定实验四阿司匹林片的分析实验五异烟肼片的含量测定实验六片剂的崩解度和脆碎度的检测实验七蒸馏水的杂质检查附录1~3 药品检验操作标准原料药检验报告书成品检验报告书标准液配制及标定记录实验一氯化钠的杂质检查一、目的1.了解药物杂质检查的意义。
2.掌握杂质检查的原理和方法。
3.掌握杂质限量的计算方法。
二、实验内容取本品5.0g，加水50ml溶解后，加溴麝香草酚蓝指示液2滴。
如显黄色，加氢氧化钠液(0.02mol/L)0.10ml，应变为蓝色；如显蓝色或绿色，加盐酸液(0.02mol/L)0.2ml，应变为黄色。
2.溶液的澄清度取本品5.0g，加水25ml溶解后，溶液应澄清。
3.碘化物取本品的细粉5.0g，置瓷蒸发皿内，滴加新配制的淀粉混合液 [取可溶性淀粉0.25g，加水2ml，搅匀，再加沸水至25ml，随加随搅拌，放冷，加硫酸液(0.025mol/L)2ml，亚硝酸钠试液3滴与水25ml，混匀] 适量使晶粉湿润，置日光下(或日光灯下)观察，5分钟内晶粒不得显蓝色痕迹。
4.溴化物取本品2.0g，加水10ml使溶解，加盐酸3滴与氯仿1ml，边振摇边滴加2％氯胺T溶液(临用新制)3滴，氯仿层如显色，与标准溴化钾溶液(精密称取在105℃干燥至恒重的溴化钾0.1485g，加水使溶解成100ml，摇匀)1.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。
5.硫酸盐取本品5.0g，加水溶解成约40ml(溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性)，溶液如不澄清，应滤过，置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。
另取标准硫酸钾溶液1.0ml置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml摇匀，即得对照溶液。
于供试溶液与对照溶溶中，分别加入25％氯化钡溶液5ml，用水稀释使成50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较、供试品管浊度不得更浓。
项目负责人：QC主管确认类别：方法验证确认领导小组审查汇签：本方案规定了异烟肼片微生物限度检查方法的验证方法及标准。
2.验证概述我公司生产异烟肼片微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、大肠埃希菌。
参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。
通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用性。
异烟肼片处方中含有异烟肼以及常用辅料成分，异烟肼对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。
异烟肼在水中易溶用薄膜过滤可去除其对微生物生长的影响。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。
本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
对异烟肼片微生物限度检查方法适用性进行验证。
3.验证依据3.1.《验证与确认管理规程》、《微生物限度检查SOP》3.2.中国药典(2015年版) 四部：（1105）非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法；（1106）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法。
4.验证目的验证异烟肼片（100mg）微生物限度检查方法的可靠性。
5.实施验证人员及职责6.1.验证前准备6.1.1.文件准备6.1.1.1.现场备《微生物限度检查法SOP》、《培养基及检定菌管理规程》、《药品微生物限度检查方法确认方案》及相关的验证记录，并填写验证文件准备验证表（附表1）。
6.1.2.验证主要仪器准备：经检定或确认合格并处于有效期内的需氧菌培养箱、霉菌和酵母菌培养箱、生化培养箱、温度计等，填写《主要检验仪器设备确认表》，见附表2。
6.1.3.验证用空调系统及部分设备的确认/验证情况检查微生物限度检查室空调系统已经确认并合格、用于灭菌的高压蒸汽灭菌器已经确认并合格、超净工作台、生物安全柜等已经确认并合格，填写《确认相关确认记录表》，见附表3。
实训五异烟肼片的质量检测
一、实训目的
1、掌握异烟肼片质量检测项目。
2、掌握薄层色谱法在杂质限量检查中基本操作方法。
3、掌握异烟肼片的含量测定方法。
4、熟悉异烟肼片的鉴别试验方法及含量测定的基本原理。
5、了解甲基橙不可逆褪色操作要点。
二、实训原理
采用薄层色谱法对游离肼进行限量检查。
以含CMC-Na的硅胶铺制薄层板，以异丙醇：丙酮（3：2）为展开剂，利用游离肼与对二甲氨基苯甲醛缩合生成鲜黄色腙类化合物（异烟肼此时呈棕橙色），采用对二甲氨基苯甲醛为显色剂，将供试品溶液与硫酸肼对照液分别点于同一薄层板上，展开后显色，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
利用酰肼基的还原性，在强酸性溶液中，可用溴酸钾直接滴定异烟肼，化学计量点后，稍过量的BrO3-与反应生成的Br-作用产生Br2，使溶液呈浅黄色而自身指示终点。
但灵敏度不高，通常加入甲基橙或甲基红为指示剂，终点前指示剂在酸性溶液中呈红色，化学计量点后，微量的Br2氧化破坏指示剂使红色骤然褪去指示终点。
三、实训操作
1、检查
取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。
另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。
吸取供试品溶液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（CMC-Na溶液制备）上，以异丙醇丙酮（3：2）为展开剂，展开后晾开，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视。
在供试品主斑点前后与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
2、含量测定
取本品20片，精密称定；研细，精密称取适量（约相当于异烟肼0.2g），置100ml 量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液；精密量取续滤液25ml，加水50ml、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。
每1ml 的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg 的C6H7N3O。
四、思考题
1、溴酸钾滴定异烟肼时，滴定速度过快有何影响？
2、测定含量时，为什么要充分搅拌、缓缓滴定？。
