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高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量
金英兰
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2009(18)24
【摘要】目的建立测定异烟肼片剂中异烟肼及其杂质含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法色谱柱为Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%多库酯钠水溶液(40:60),流速为0.8 mL/min,紫外检测波长为216 nm.结果异烟肼质量浓度在10～l 000 mg/L范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999
8,n=6),平均回收率为99.19%,RSD=1.99%(n=6);异烟酸质量浓度在4～24mg/L 范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 4,n=6).结论该法快速、简便、准确、重现性好.
【总页数】2页(P37-38)
【作者】金英兰
【作者单位】吉林省吉林市食品药品检验所,吉林,吉林,132013
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R978.3
【相关文献】
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异烟肼片含量测定实验报告一、实验目的1. 掌握测定异烟肼含量的方法。
2. 了解反应机理及测定原理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
二、实验原理1. 反应机理异烟肼在酸性条件下与4-氨基乙酰显色剂（PABA）发生偶联反应，形成带有色素的产物。
反应方程式如下：异烟肼+PABA+HCl→带色产物2. 测定原理本实验采用比色法进行异烟肼含量的测定。
首先将样品加入酸性介质中，再加入PABA，使其与异烟肼发生偶联反应形成带色产物。
经过取等波长（λ=540nm）进行光度计测定，根据标准曲线计算出异烟肼的含量。
三、实验步骤1. 原料准备（1）异烟肼片：取适量异烟肼片，称约0.5g，粉碎并过筛。
（2）标准品溶液：取异烟肼片粉末约10mg，加入10ml甲醇，振摇均匀后称取1ml，放入10ml量瓶中，加甲醇至刻度，打乱均匀后制成含1mg/ml异烟肼的标准品溶液。
（3）0.02mol/L盐酸：向1L锥形瓶中加入4.20ml盐酸，加水至刻度。
（4）PABA溶液：取约100mg PABA，加入5ml甲醇，振摇溶解，再加10ml盐酸溶液中，振摇溶解，定容至50ml。
（2）精密称取约75mg异烟肼粉末，放入锥形瓶中，再加入3ml 0.02mol/L盐酸溶液，摇匀2-3分钟，溶解样品。
（3）加入约1ml PABA溶液，再加滴定管滴加0.02mol/L的盐酸溶液至pH=2.7左右。
顺序是先滴至酸化终点，再回滴1-2滴至以恰好pH=2.7为准。
（4）用0.02mol/L盐酸溶液定容至50ml，摇匀均称混匀的溶液放置于室温中静置10分钟。
3. 测定标准曲线（1）取一系列预配不同浓度的标准品异烟肼溶液，按上述方法进行测定，分别测定其吸光度。
（2）根据吸光度与浓度的线性关系，绘制出标准曲线。
4. 数据记录与处理（1）测定样品的溶液吸光度，根据标准曲线计算出样品吸光度对应的含量。
（2）计算出样品的含量，并计算平均值。
4. 实验结果样品A吸光度为0.652，样品B吸光度为0.654，样品C吸光度为0.650。
一、实验目的1. 掌握异烟肼含量的测定方法。
2. 理解异烟肼含量测定的原理和反应机理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
4. 提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid）是一种常用的抗结核病药物，其含量测定对于保证药物质量和临床疗效具有重要意义。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定异烟肼片剂中的含量。
原理如下：1. 异烟肼在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐。
2. 重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐发生偶联反应，生成偶氮染料。
3. 偶氮染料的最大吸收波长为530nm，根据吸光度与异烟肼含量的线性关系，计算样品中异烟肼的含量。
三、实验材料与仪器1. 试剂：异烟肼对照品、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、甲醇、水等。
2. 仪器：高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、电子天平、旋涡混合器、离心机等。
四、实验步骤1. 样品前处理：取异烟肼片剂若干，精密称定，研细，过筛，取适量粉末，加入适量甲醇，超声提取，离心分离，取上清液待测。
2. 对照品溶液制备：精密称取异烟肼对照品适量，加入适量甲醇，超声溶解，制成浓度为100mg/L的对照品溶液。
3. 标准曲线绘制：分别取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，置于10mL容量瓶中，加入适量盐酸，按实验方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4. 样品测定：取处理后的样品溶液，按实验方法测定吸光度，从标准曲线上查出样品中异烟肼的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：在530nm波长下，吸光度与浓度呈线性关系，线性方程为A=0.012C+0.0056，相关系数R²=0.9999。
2. 精密度试验：对同一样品进行多次测定，RSD为1.23%，表明实验具有良好的精密度。
3. 重复性试验：对同一批样品进行重复测定，RSD为1.45%，表明实验具有良好的重复性。
4. 稳定性试验：样品溶液在室温下放置24小时内，RSD为1.10%，表明样品溶液在24小时内稳定。
一、实验目的1. 掌握异烟肼的鉴定原理和方法。
2. 学习异烟肼的定量分析方法。
3. 培养实验操作技能，提高分析能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid）是一种常用的抗结核病药物，化学名称为4-吡啶甲酰肼。
本实验采用紫外分光光度法对异烟肼进行定量分析。
三、实验材料1. 异烟肼标准品2. 0.1mol/L硫酸溶液3. 0.01mol/L氢氧化钠溶液4. 1%氯化钠溶液5. 1cm比色皿6. 紫外可见分光光度计7. 移液管8. 容量瓶9. 烧杯10. 玻璃棒四、实验步骤1. 标准溶液的配制- 称取0.1g异烟肼标准品，用少量0.1mol/L硫酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶中，用0.1mol/L硫酸溶液定容至刻度，摇匀。
此溶液浓度为0.1mg/mL。
2. 样品溶液的配制- 称取一定量的异烟肼样品，用0.1mol/L硫酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶中，用0.1mol/L硫酸溶液定容至刻度，摇匀。
3. 显色反应- 取2mL样品溶液和2mL标准溶液，分别置于两个10mL容量瓶中，加入2mL 0.01mol/L氢氧化钠溶液，混匀，静置5分钟。
4. 测定吸光度- 将显色后的溶液置于1cm比色皿中，用紫外可见分光光度计在275nm波长处测定吸光度。
5. 计算- 根据标准曲线，计算样品中异烟肼的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制- 以异烟肼浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得异烟肼的含量。
3. 结果分析- 样品中异烟肼的含量与理论值相符，说明本实验方法准确可靠。
六、实验讨论1. 本实验采用紫外分光光度法对异烟肼进行定量分析，该方法简便、快速、准确。
2. 实验过程中，应注意控制显色反应时间，以确保显色反应充分。
3. 标准曲线的线性范围应尽量宽，以提高实验的准确度。
4. 本实验结果说明，所配制的样品溶液和标准溶液具有较好的稳定性。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了异烟肼的鉴定原理和方法，学习了异烟肼的定量分析方法，提高了实验操作技能和分析能力。
本科生毕业论文异烟肼含量测定方法比较姓名： XXX指导教师： XXX院系：化学化工学院专业：制药工程学号：提交日期： 2012-03-30目录中文摘要 (3)外文摘要 (4)引言 (5)1．异烟肼简介 (5)1.1物理化学性质 (5)1.2药理作用 (6)1.2.1作用原理 (6)1.2.2临床应用 (6)1.2.3 不良反应 (6)1.3 异烟肼制剂研究发展 (7)1.4 异烟肼含量测定方法简介 (7)2.实验部分 (7)2.1 实验仪器和试剂 (7)2.1.1 实验仪器 (7)2.1.2实验试剂 (8)2.2 实验应用公式 (8)2.3溴酸钾滴定法 (8)2.3.1实验原理 (8)2.3.2试剂溶液配制 (9)2.3.3异烟肼含量测定 (9)2.3.4稳定性实验 (9)2.3.5回收率实验 (10)2.3.6精密度实验 (10)2.3.7 结果分析与讨论 (10)2.4紫外分光光度法 (11)2.4.1实验原理 (11)2.4.2试剂溶液配制 (11)2.4.3 测定波长选择 (11)2.4.4 标准曲线绘制 (11)2.4.5稳定性实验 (12)2.4.6回收率实验 (13)2.4.7精密度实验 (13)2.4.8结果分析与讨论 (13)2.5 钼磷酸杂多蓝分光光光度法 (14)2.5.1实验原理 (14)2.5.2试剂溶液配制 (14)2.5.3实验方法 (14)2.5.4测定波长选择 (14)2.5.5 标准曲线绘制 (15)2.5.6稳定性实验 (16)2.5.7回收率实验 (16)2.5.8精密度实验 (16)2.5.9结果分析与讨论 (17)3.实验结论 (17)参考文献 (18)致谢 (20)异烟肼含量测定方法比较XXX指导老师：XXX（黄山学院化学化工学院，黄山，安徽，245041）摘要：随着科学技术的不断发展，无论是对异烟肼还是其他药物的研究都更进一步，并且更加精确。
因此，对含量测定实验方法的精确度也规定了更高的要求。
本文主要比较了传统的溴酸钾滴定法、紫外分光光度法以及钼磷酸杂多蓝分光光度法这三种实验方法在异烟肼原料药含量测定方面各自的优缺点。
实验结果：三种方法的平均回收率和RSD分别为102.5%和0.32%；101.88%和0.22；104.25%和0.15%。
结论：三种方法都可以用以异烟肼原料药的含量测定，并且钼磷酸杂多蓝分光光度法的精密度都较高，而紫外分光光度法测定的准确度和稳定性较好。
关键词：异烟肼；溴酸钾滴定；紫外分光光度法；钼磷酸杂多蓝The Comparison of Content Determination Methods of IsoniazideXXXDirector: XXX（Chemistry and Chemical Engineering College, Huangshan University, Huangshan,Anhui, 245041）Abstract:Along with the development of science and technology, both for isoniazid or other drugs are further studied. And the methods are more precise than before. Therefore, we set a highier requirement to make sure the content determination methods more accuracy. This paper mainly compares the content determination methods of isoniazid. They are Potassium bromate titration, Ultraviolet spectrophotometry and molybdenum blue spectrophotometry. They have respectively merits and demerits. The result : Three methods of average recovery rate and RSD are 102.5%and 0.32% ; 101.88% and 0.22%; 104.25% and 0.15%. The conclusion is that the isoniazid crude drug can use these three methods to make the content determinantion. But the most precise method is molybdenum blue spectrophotometry, and the best stable and the most accurate method is Ultraviolet spectrophotometry.Key words: isoniazide; potassium bromate titration; ultraviolet spectrophotometry; molybdenum heteropolyblue引言人类几千年的历史以来一直在同各种疾病作斗争。
踏入二十一世纪以后，同样也有很多的疾病突然袭来，但是随着科学技术的不断发展更新，人类同时也在用智慧创造出更加有效的药物来与疾病作斗争。
并且随着各种自动化机械和精密仪器的出现，药物的各种检测和含量测定更加准确精密。
结核病是一种由结核杆菌感染而引起的慢性传染性疾病。
据世界卫生组织(WHO) 报道，目前全世界近三分之一的人已感染了结核杆菌，每年约三百万人死于结核病。
结核病是目前全球传染病中威胁人类健康的第一号杀手。
我国是全球二十二个结核病高负担的国家之一，结核患者数目位居世界第二，仅次于印度[1]。
1952年由美国和西德的研究人员分别独立发现异烟肼具有强的抗结核杆菌活性。
从发现至今，为了达到最好的疗效，并且把副作用减轻到最小程度，异烟肼与其他药物一样经历着各种剂型的研究。
虽然从发现至今已过去了将近六十年的历史，目前异烟肼仍作为抗结核病的一线药物而被广泛使用，因为异烟肼是抗结核有效药物中复合药片里四种成分之一[2]，复合型药处方由于考虑了各种因素对疗效的影响，因此其抗耐药性能力较普通药物强。
在含量测定中，不同的剂型有着不一样的实验方法，因此在测定含量小而精密度要求较高时应选择适当的方法。
本文通过稳定性实验、回收率实验以及精密度实验来比较异烟肼含量测定中三种不同方法的优劣，从而方便异烟肼在不同情况下含量测定方法的选择。
1 异烟肼简介1.1 物理化学性质异烟肼根据其结构等方法有很多种命名，其中文又名异烟酰肼、雷米封[3]、γ-吡啶甲酰肼、4-吡啶乙酰肼、4-吡啶羧酸肼、吡啶-4-甲酰肼。
异烟肼是一种白色针状结晶，无气味，味微甜而后苦，不是很稳定，遇光渐变质因此需要避光保存[3]。
溶解度在不同温度不同溶剂中有差别，比如在25℃水中约14%，在40℃水中约26%(水溶液呈中性），在25℃乙醇中约2%，在沸乙醇中约10%，在氯仿中约0.1%；几乎不溶于苯和乙醚。
分子量为：137.15分子结构如右下图所示NNH NH2 O1.2 异烟肼药理介绍最早出现的有效抗结核病的药物是链霉素，但是由于结核杆菌的耐药性以及链霉素本身的副作用，使得在研制出新药后链霉素退居抗结核病二线。
随着药物的不断更新研发，和异烟肼一起被用于治疗结核病的药物有利福平[4]。
除此之外，利福霉素类药物如：利福喷丁、利福布丁等；以及其他化学治疗药物。
1952年异烟肼的发明使治疗结核病起了根本性的变化。
在这六十年的使用历史中，虽然有的病人所感染的结核菌已经产生了耐药性，但绝大多数医生仍认为它是治疗结核病的一个不可缺少的主药。
1.2.1作用原理异烟肼选择性作用于结核分枝杆菌，对静止期结核杆菌有抑制作用，对繁殖期结核杆菌有杀灭作用。
因其穿透性强，故对细胞内外的结核杆菌都有作用。
其具体的作用机制尚未完全阐明，可能是抑制分枝菌酸的合成，从而使细胞丧失耐酸性、疏水性和增殖力而死亡。
分枝菌酸是结核分枝杆菌所特有的重要成分，因此异烟肼对其他细菌无明显作用。
异烟肼单用易产生耐药性，联合用药可延缓耐药性产生，并增强疗效，并且与其他抗结核药无交叉耐药性。
1.2.2临床应用（1）异烟肼为治疗结核病的首选药物，适用于各种类型的结核病，如肺、淋巴、骨、肾、肠等结核，结核性脑膜炎、胸膜炎及腹膜炎等。
为了预防和延缓耐药性的产生，一般应与其他一线抗结核药联合应用。
对急性粟粒性结核和结核性脑膜炎应增大剂量，必要时，采用静脉滴注。
（2）高浓度异烟肼可用于治疗低度耐多药肺结核的治疗[5]。
周洁等通过对61例患者随机分成两部分做对照试验，得出结论：进行高浓度异烟肼经脉输入和局部灌注强化两个月的患者比常规量治疗的患者疗效更好，并且未见严重的肝功能损坏和其他不良反应。
(3)异烟肼和利福平联合灌肠可用于治疗细菌性痢疾[6]。
高阳通过对50例痢疾患儿随机分成两组做对照试验。
实验组在常规治疗下辅助异烟肼、利福平联合灌肠，对照组仅进行常规治疗。
结论：辅助异烟肼、利福平联合灌肠的治疗效果明显优于常规治疗。
1.2.3不良反应异烟肼的不良反应症状相对较轻，其发生率主要与使用剂量有关系。
不过也有一些发病率很低，但是其症状相对而言却比较严重，如由于病菌具有耐药性因而在免疫方面会引起胸腔积液复发等[7]。
异烟肼的主要不良反应有如下几方面。
（1）神经系统：异烟肼引起的常见神经系统不良反应表现为：周围神经病变、交感神经病变、视神经炎等神经障碍病症[8]。
同时也会引起精神障碍，表现为：忧郁、强迫、兴奋等症状。
（2）肝脏毒性：异烟肼服用后经肝脏中的酶代谢转化为肼、乙酰肼等代谢物[9]。
肼和乙酰肼在肝脏中经细胞色素P450酶系氧化而影响肝脏的抗氧化物耗竭，其作用超过肝细胞的解毒作用，因此易引起肝细胞功能紊乱，最终引起氧化型肝损伤。
（3）其他：可引起共济失调[10]；引起过敏反应如：药热、皮疹等；偶尔可引起粒细胞缺乏、血小板减少、再生障碍性贫血等。
1.3 异烟肼制剂研究发展异烟肼水溶性较好，因此口服生物利用度较高，杀菌能力强。
但是因为口服用药过程中，其药物分布于全身体液和组织中，容易产生各种副反应，不仅使用药剂量增加，而且危害身体健康。
随着制药技术的不断更新改革，以及药剂理念的不断创新，目前异烟肼也有不同的剂型来满足不同的临床需求。
异烟肼制剂从最初的片剂胶囊剂到目前已经研发出来的或者正在研究的缓控释制剂、靶向制剂和复方制剂。
