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高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量
金英兰
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2009(18)24
【摘要】目的建立测定异烟肼片剂中异烟肼及其杂质含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法色谱柱为Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%多库酯钠水溶液(40:60),流速为0.8 mL/min,紫外检测波长为216 nm.结果异烟肼质量浓度在10～l 000 mg/L范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999
8,n=6),平均回收率为99.19%,RSD=1.99%(n=6);异烟酸质量浓度在4～24mg/L 范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 4,n=6).结论该法快速、简便、准确、重现性好.
【总页数】2页(P37-38)
【作者】金英兰
【作者单位】吉林省吉林市食品药品检验所,吉林,吉林,132013
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R978.3
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一、实验目的1. 学习和掌握紫外-可见分光光度法在药物分析中的应用。
2. 掌握异烟肼的定量分析方法。
3. 培养实验操作能力和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid，INH）是一种常用的抗结核药物，其分子中含有苯环和肼结构。
异烟肼在紫外-可见光区有较强的吸收，可利用紫外-可见分光光度法进行定量分析。
本实验采用紫外-可见分光光度法，以异烟肼在特定波长下的吸光度与浓度成正比的关系，通过测定异烟肼溶液的吸光度，计算出其浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、锥形瓶、吸耳球等。
2. 试剂：异烟肼标准品、乙醇、氢氧化钠溶液、硫酸溶液、磷酸盐缓冲溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）配制一系列不同浓度的异烟肼标准溶液。
（2）将标准溶液分别置于1cm比色皿中。
（3）在特定波长下，测定标准溶液的吸光度。
（4）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）准确称取一定量的异烟肼样品，用乙醇溶解并定容至100mL。
（2）取一定量的样品溶液，置于1cm比色皿中。
（3）在特定波长下，测定样品溶液的吸光度。
（4）根据标准曲线，计算出样品中异烟肼的浓度。
五、结果与讨论1. 标准曲线的绘制通过绘制标准曲线，可知异烟肼在特定波长下的吸光度与浓度呈线性关系，相关系数R²大于0.99，表明该方法具有较高的准确性和可靠性。
2. 样品测定根据标准曲线，计算出样品中异烟肼的浓度为x mg/mL。
3. 实验误差分析（1）实验过程中，可能存在以下误差来源：a. 称量误差：在称取样品时，由于天平的精度限制，可能导致称量误差。
b. 体积误差：在配制标准溶液和样品溶液时，由于移液管、容量瓶等仪器的精度限制，可能导致体积误差。
c. 吸光度测量误差：在测定吸光度时，由于仪器精度、操作技巧等因素，可能导致吸光度测量误差。
（2）为降低实验误差，可采取以下措施：a. 选用高精度的天平和移液管，确保称量和移液操作的准确性。
异烟肼片含量测定实验报告一、实验目的1. 掌握测定异烟肼含量的方法。
2. 了解反应机理及测定原理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
二、实验原理1. 反应机理异烟肼在酸性条件下与4-氨基乙酰显色剂（PABA）发生偶联反应，形成带有色素的产物。
反应方程式如下：异烟肼+PABA+HCl→带色产物2. 测定原理本实验采用比色法进行异烟肼含量的测定。
首先将样品加入酸性介质中，再加入PABA，使其与异烟肼发生偶联反应形成带色产物。
经过取等波长（λ=540nm）进行光度计测定，根据标准曲线计算出异烟肼的含量。
三、实验步骤1. 原料准备（1）异烟肼片：取适量异烟肼片，称约0.5g，粉碎并过筛。
（2）标准品溶液：取异烟肼片粉末约10mg，加入10ml甲醇，振摇均匀后称取1ml，放入10ml量瓶中，加甲醇至刻度，打乱均匀后制成含1mg/ml异烟肼的标准品溶液。
（3）0.02mol/L盐酸：向1L锥形瓶中加入4.20ml盐酸，加水至刻度。
（4）PABA溶液：取约100mg PABA，加入5ml甲醇，振摇溶解，再加10ml盐酸溶液中，振摇溶解，定容至50ml。
（2）精密称取约75mg异烟肼粉末，放入锥形瓶中，再加入3ml 0.02mol/L盐酸溶液，摇匀2-3分钟，溶解样品。
（3）加入约1ml PABA溶液，再加滴定管滴加0.02mol/L的盐酸溶液至pH=2.7左右。
顺序是先滴至酸化终点，再回滴1-2滴至以恰好pH=2.7为准。
（4）用0.02mol/L盐酸溶液定容至50ml，摇匀均称混匀的溶液放置于室温中静置10分钟。
3. 测定标准曲线（1）取一系列预配不同浓度的标准品异烟肼溶液，按上述方法进行测定，分别测定其吸光度。
（2）根据吸光度与浓度的线性关系，绘制出标准曲线。
4. 数据记录与处理（1）测定样品的溶液吸光度，根据标准曲线计算出样品吸光度对应的含量。
（2）计算出样品的含量，并计算平均值。
4. 实验结果样品A吸光度为0.652，样品B吸光度为0.654，样品C吸光度为0.650。
一、实验目的1. 掌握异烟肼含量的测定方法。
2. 理解异烟肼含量测定的原理和反应机理。
3. 熟悉药物分析实验的操作流程和注意事项。
4. 提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理异烟肼（Isoniazid）是一种常用的抗结核病药物，其含量测定对于保证药物质量和临床疗效具有重要意义。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定异烟肼片剂中的含量。
原理如下：1. 异烟肼在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐。
2. 重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐发生偶联反应，生成偶氮染料。
3. 偶氮染料的最大吸收波长为530nm，根据吸光度与异烟肼含量的线性关系，计算样品中异烟肼的含量。
三、实验材料与仪器1. 试剂：异烟肼对照品、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、甲醇、水等。
2. 仪器：高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、电子天平、旋涡混合器、离心机等。
四、实验步骤1. 样品前处理：取异烟肼片剂若干，精密称定，研细，过筛，取适量粉末，加入适量甲醇，超声提取，离心分离，取上清液待测。
2. 对照品溶液制备：精密称取异烟肼对照品适量，加入适量甲醇，超声溶解，制成浓度为100mg/L的对照品溶液。
3. 标准曲线绘制：分别取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，置于10mL容量瓶中，加入适量盐酸，按实验方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4. 样品测定：取处理后的样品溶液，按实验方法测定吸光度，从标准曲线上查出样品中异烟肼的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：在530nm波长下，吸光度与浓度呈线性关系，线性方程为A=0.012C+0.0056，相关系数R²=0.9999。
2. 精密度试验：对同一样品进行多次测定，RSD为1.23%，表明实验具有良好的精密度。
3. 重复性试验：对同一批样品进行重复测定，RSD为1.45%，表明实验具有良好的重复性。
4. 稳定性试验：样品溶液在室温下放置24小时内，RSD为1.10%，表明样品溶液在24小时内稳定。
本科生毕业论文异烟肼含量测定方法比较姓名： XXX指导教师： XXX院系：化学化工学院专业：制药工程学号：提交日期： 2012-03-30目录中文摘要 (3)外文摘要 (4)引言 (5)1．异烟肼简介 (5)1.1物理化学性质 (5)1.2药理作用 (6)1.2.1作用原理 (6)1.2.2临床应用 (6)1.2.3 不良反应………………………………………………………………61.3 异烟肼制剂研究发展…………………………………………………………71.4 异烟肼含量测定方法简介……………………………………………………72.实验部分 (7)2.1 实验仪器和试剂 (7)2.1.1 实验仪器…………………………………………………………………72.1.2实验试剂…………………………………………………………………82.2 实验应用公式………………………………………………………………82.3溴酸钾滴定法 (8)2.3.1实验原理…………………………………………………………………82.3.2试剂溶液配制……………………………………………………………92.3.3异烟肼含量测定…………………………………………………………92.3.4稳定性实验………………………………………………………………92.3.5回收率实验 (10)102.3.7 结果分析与讨论………………………………………………………10 2.4紫外分光光度法……………………………………………………………1 12.4.1实验原理………………………………………………………………1 12.4.2试剂溶液配制…………………………………………………………1 12.4.3 测定波长选择…………………………………………………………1 12.4.4 标准曲线绘制…………………………………………………………112.4.5稳定性实验……………………………………………………………1 22.4.6回收率实验……………………………………………………………1 32.4.7精密度实验……………………………………………………………1 32.4.8结果分析与讨论………………………………………………………1 32.5 钼磷酸杂多蓝分光光光度法………………………………………………1 42.5.1实验原理………………………………………………………………1 42.5.2试剂溶液配制 (14)2.5.3实验方法………………………………………………………………1 42.5.4测定波长选择 (14)2.5.5 标准曲线绘制…………………………………………………………152.5.6稳定性实验……………………………………………………………1 61 62.5.8精密度实验……………………………………………………………1 62.5.9结果分析与讨论………………………………………………………17 3.实验结论 (17)参考文献 (18)致 (20)异烟肼含量测定方法比较XXX指导老师：XXX（学院化学化工学院，，，245041）摘要：随着科学技术的不断发展，无论是对异烟肼还是其他药物的研究都更进一步，并且更加精确。
1. 熟悉异烟肼片的制备方法。
2. 掌握片剂制备的基本操作流程。
3. 了解异烟肼片的处方组成和质量要求。
二、实验原理异烟肼片是一种抗结核病药物，其主要成分为异烟肼。
制备异烟肼片的方法有压片法和溶片法，本实验采用溶片法制备异烟肼片。
三、实验材料与仪器1. 材料与试剂：- 异烟肼原药- 碳酸钙- 硬脂酸镁- 稀盐酸- 蒸馏水- 纯化水2. 仪器：- 粉碎机- 搅拌器- 烘箱- 筛分器- 天平- 药片机- 热压机- 粉末流动性测定仪1. 粉碎：将异烟肼原药、碳酸钙、硬脂酸镁按比例混合，用粉碎机粉碎至粒度小于100目。
2. 过筛：将粉碎后的混合物过筛，去除不合格颗粒。
3. 配制辅料溶液：将硬脂酸镁用少量稀盐酸溶解，加入蒸馏水定容至所需体积。
4. 混合：将过筛后的混合物与辅料溶液混合均匀。
5. 制备片剂：将混合物倒入药片机，按设定参数压制出片剂。
6. 干燥：将压制好的片剂放入烘箱中，在60℃下干燥2小时。
7. 粉碎：将干燥后的片剂用粉碎机粉碎至粒度小于100目。
8. 筛分：将粉碎后的片剂过筛，去除不合格颗粒。
9. 质量检查：按照药典规定，对制备的异烟肼片进行外观、含量、溶出度等质量检查。
五、实验结果与分析1. 外观：制备的异烟肼片呈白色，表面光滑，无杂质。
2. 含量：按照药典规定，测定异烟肼片含量，结果符合要求。
3. 溶出度：按照药典规定，测定异烟肼片的溶出度，结果符合要求。
4. 结论：本实验成功制备了异烟肼片，其外观、含量、溶出度等质量指标均符合药典规定。
六、实验总结1. 通过本实验，掌握了异烟肼片的制备方法，熟悉了片剂制备的基本操作流程。
2. 在实验过程中，注意了各种试剂的准确称量，确保了实验结果的准确性。
3. 通过对制备的异烟肼片进行质量检查，验证了实验方法的有效性。
4. 在实验过程中，发现了以下几点不足：- 实验过程中，部分片剂表面出现裂纹，可能是因为压制过程中压力不足。
- 实验过程中，部分片剂出现分层现象，可能是因为混合不均匀。
中国药典2020年版注射用异烟阱【性状】本品为臼色或类臼色片。
【鉴别】(1)取本品的细粉适显（约相当千异烟阱0.lg), 加水10m l，振摇，滤过，滤液照异烟阱项下的鉴别(1)项试验，显相同的反应。
(2)在含械测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
(3)取本品细粉适量（约相当千异烟阱50mg)，加乙醇10ml，研磨溶解，滤过，滤液蒸干，残渣经减压干燥，依法测定（通则0402)。
本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集166图）一致。
【检查】游离阱照薄层色谱法（通则0502)试验。
供试品溶液取本品细粉适显，加溶剂使异烟阱溶解并定量稀释制成每1ml中约含异烟阱0.l g的溶液，滤过，取续滤液。
溶剂、对照品溶液、系统适用性溶液、色谱条件、系统适用性要求与测定法见异烟阱游离阱项下。
限度在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
有关物质照高效液相色谱法（通则0512)测定。
供试品溶液取本品细粉适量，加水使异烟阱溶解并稀释制成每1ml中约含异烟阱0.5mg的溶液，滤过，取续滤液。
对照溶液精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中用水稀释至刻度，摇匀。
色谱条件系统适用性要求与测定法见异烟阱有关物质项下。
限度供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大千对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%），各杂质峰面积的和不得大千对照溶液主峰面积(1.0%）。
溶出度照溶出度与释放度测定法（通则0931第一法）测定。
溶出条件以水1000ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时取样。
测定法取溶出液5ml，滤过，精密量取续滤液适量，用水定最稀释制成每1ml中含10-20µg的溶液，照紫外－可见分光光度法（通则0401)，在263nm的波长处测定吸光度，按C6H7NO的吸收系数(E亡）为307计箕每片的溶出篮。
限度标示讯的60%，应符合规定。
实训五异烟肼片的质量检测
一、实训目的
1、掌握异烟肼片质量检测项目。
2、掌握薄层色谱法在杂质限量检查中基本操作方法。
3、掌握异烟肼片的含量测定方法。
4、熟悉异烟肼片的鉴别试验方法及含量测定的基本原理。
5、了解甲基橙不可逆褪色操作要点。
二、实训原理
采用薄层色谱法对游离肼进行限量检查。
以含CMC-Na的硅胶铺制薄层板，以异丙醇：丙酮（3：2）为展开剂，利用游离肼与对二甲氨基苯甲醛缩合生成鲜黄色腙类化合物（异烟肼此时呈棕橙色），采用对二甲氨基苯甲醛为显色剂，将供试品溶液与硫酸肼对照液分别点于同一薄层板上，展开后显色，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
利用酰肼基的还原性，在强酸性溶液中，可用溴酸钾直接滴定异烟肼，化学计量点后，稍过量的BrO3-与反应生成的Br-作用产生Br2，使溶液呈浅黄色而自身指示终点。
但灵敏度不高，通常加入甲基橙或甲基红为指示剂，终点前指示剂在酸性溶液中呈红色，化学计量点后，微量的Br2氧化破坏指示剂使红色骤然褪去指示终点。
三、实训操作
1、检查
取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。
另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。
吸取供试品溶液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（CMC-Na溶液制备）上，以异丙醇丙酮（3：2）为展开剂，展开后晾开，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视。
在供试品主斑点前后与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
2、含量测定
取本品20片，精密称定；研细，精密称取适量（约相当于异烟肼0.2g），置100ml 量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液；精密量取续滤液25ml，加水50ml、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。
每1ml 的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg 的C6H7N3O。
四、思考题
1、溴酸钾滴定异烟肼时，滴定速度过快有何影响？
2、测定含量时，为什么要充分搅拌、缓缓滴定？。
