薄层色谱鉴别介绍共58页

在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚
度等），化合物移动的距离和展开剂移动的 距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理 常数，其大小只与化合物本身的结构有关， 因此可以根据Rf值鉴别化合物。
比移值
组分二 组分一
被分离 混合物
薄层色谱展开示意图
薄层色谱法
优点
操作简单，定性结果直观
缺点
有一定毒性、定量方面的精密度 较差
却后使用。
固定相（吸附剂）的选择
纤维素、淀粉 硅酸镁 硫酸钙 硅胶 佛罗里硅土 氧化镁 氧化铝 对极性有机物的吸附作用增强
活性炭
2
供试品的制备：按照各药品质量标准规
定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。 3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定 精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶 中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试 品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一 定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止 造成对照品污染。


二．展开室应放在水平、稳定的实验台上，不能有阳光直射， 也不能在通风处放置，离开热源，避免温度波动对分离不利； 光敏物质的分离应将展开室置于暗处进行。 三．点样时间不应超过三分钟。硅胶的硅醇基以氢键形式优 先吸附水，物理吸附使硅胶的活度降低，影响了弱极性物质 的吸附，化合物的Rf值相应地增大。硅胶薄层的吸水速度很 快，当用预先经过活化的薄层板，在点样过程中干燥的薄层 会立即吸附空气中的水蒸气，在数分钟内达到平衡，吸附水 蒸气的量决定于点样速度即暴露在空气中的时间和空气的相 对湿度。Dallas指出0.25mm厚、20cm×20cm的硅胶薄层 板在50%相对湿度中放置约3min就失去活性的一半，而放 置15min时吸附的水分已达到最大值。在用相同条件分离同 一组化合物得到的结果不能重现时，必须考虑到相对湿度对 展开的影响，特别是我国南北地区湿度相差很大；即使在同 一实验室冬夏季节不同湿度也有明显差别，如果不注意湿度 的影响就得不到预期的结果。

氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。

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连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。 二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
8.2 7.4 10.2 9.1 9.1 9.8 9.4 12.4 12.9 17.9
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流动相选择时需考虑溶剂的下列情况 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作 保护剂，有时需重蒸除去乙醇。 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致， 导致实验难以重现。 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注 意出厂日期。 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相 互作用。 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流 动相。要求操作格外小心，同时混合流动相 不应重复使用。

2
1
原点
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离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。 锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶 剂 前 沿

薄层被刮 掉部分
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薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例： 硅胶板（粒度10 ～40um） 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。 硅胶CMC——以CMC为黏合剂。配制 0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬 浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀 浆。

一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。

薄层色谱法
将固定相于玻璃或铝箔等载板上涂布成 均匀的薄层。展开剂（流动相）借助毛细作 用从薄层板点样的一端展开到另一端时使不 同物质得到分离。 分离原理随固定相不同而 异，可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换 薄层 以及凝胶薄层等。
电泳法
电泳：带电粒子在直流电场作用下向异性 电极移动。
电泳法:带电荷的被分离物质在纸、醋酸 纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持介质上 ，由于粒子的大小不同以及所带的电荷种类 、 数量不同，在一定电场的作用下，向电荷 相反的电极方向以不同速度迁移而得到分 离 。
— — —
。
∆
若加热至1100 C ，则结合水全失，完全失 去吸附能力。 若通过化学反应，将有机分子以共价键 连接到硅醇基上，则称为化学键合相。按键 合到有机硅烷的官能团不同，又可以分为极 性键合相和非极性键合相。
。
—
—
—
—
—
—
2
Si
—
OH
-H2O
Si
—
O
Si
—
氧化铝
氧化铝由氢氧化铝高温脱水而成。按制备方法不 同，氧化铝可分为三种：
平面色谱独有的优点:
a. 操作简单，价格便宜，应用范围广; b. 样品预处理简单，且不会造成检测失落，对未 知试样的分析很有利; c. 可同时平行分离多个试样; d. 对成份复杂的试样可采用不同类型的流动相双 向展开，提高分离效能.
2.2滤纸及薄层板
2.2.1滤纸
纸色谱中所用的滤纸性质对分离效果有很大影响。 对滤纸的要求是： 1. 物理性质均匀、 质地均一、厚薄一致，否则斑 点畸形，Rf值改变; 2. 具有一定的机械强度; 3. 纤维松紧程度适当; 4. 具有一定的纯度; 5. 纸面洁净，不含有溶于水及有机溶剂的物质。

荧光;银激活的ZnS和CdS, ZnS• CdS •Ag在366nm
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析，又可以进行分配层
析，主要的区别是在于活化程度不同，前者活化程 度高，后者活化程度低。 （3）纤维素
可在实验室制备，取脱脂棉或滤纸剪成小
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块加适量的5％的盐酸，加热煮沸3小时，冷却
要于150－160度干燥1－3小时，备用。
（3）薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关，
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含水量越低，吸附能力越强，其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C，氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C，活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似，首先 应该考虑应如何层析，一般的讲，非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析，水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂：
（1） 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂，直接用干
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粉铺层，得到的层析板称为“干板” 或“软 板”，但也可以加煅石膏作粘合剂，这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G，用氧化铝G加水，
3.各种特制薄层
由于工作需要，各种特制薄层相继出现，
这里介绍数种：
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（1）混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如，
为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻
土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，
对糖和醇具有较好的分离效果。 （2）酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化，克服了 技术上的困难，从此以后，薄层层析法得到 了迅速的发展。

薄层色谱法用于药物成分的分析和鉴别， 可分离和鉴定药物中的有效成分和杂质。
食品安全
环境监测
薄层色谱法用于食品中农药残留、添加剂 、毒素等的检测和鉴定，保障食品安全。
薄层色谱法用于环境样品中污染物的分离 和鉴定，如水体、土壤、空气中的有害物 质等。
02
薄层色谱法的实验操作
实验材料准备
薄层板
选择合适规格的薄层板 ，确保其质量可靠且无
定量分析
通过测量斑点的大小或使用紫 外可见光谱等方法，计算待测
物质的质量或浓度。
03
薄层色谱法的优缺点
优点
快速分离
薄层色谱法可以在短时间内完成样品的分离 ，特别适合于大量样品的快速分析。
操作简便
薄层色谱法的操作相对简单，不需要复杂的 设备，容易掌握。
高分离效能
薄层色谱法具有较高的分离效能，可以分离 复杂混合物中的各个组分。
改进方向
提高重现性和定量精度
联用技术
通过改进操作方法和技术手段，提高 薄层色谱法的重现性和定量精度。
将薄层色谱法与其他分析技术联用， 如质谱、光谱等，以提高分析效果和 分离效能。
拓展应用范围
研究和发展适用于大分子和极性物质 分离的薄层色谱技术，谱法的实际应用 案例
绿色环保
采用环保型溶剂和低毒性的分离 材料，降低对环境的负面影响。
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薄层色谱鉴别介绍课件
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。

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②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
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③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。

1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点 样→展开→显色与检视
1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声 提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
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2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
A
B
W1
W2
d1
d2
5
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
2
1.出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
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4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及

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k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶剂强度 决定 I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 4 丙酮 0. 氧化铝—有碱性、中性、酸性 放置时间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信噪比降低。 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 归一化法、内标法、外标法 这种影响一般使分配系数变小。 此外还有：化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 这类扫描仪技术上一些问题还未解决。 51 / 二氧六环 0. 展开距离一般为10-15cm。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相色谱，色谱后衍生化受限制。
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点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。
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自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
*
薄层色谱参数
保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。，