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人巨细胞病毒IgM抗体国家参考品的研制

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巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程

巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程

巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程1、检测目的规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。

2、检测方法)检测IgM抗体。

采用酶联免疫吸附法(ELISA3、检测原理采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM)，微孔中预包被鼠抗人-IgM(u链)，首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶(HRP)标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。

被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。

通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。

4、实验条件(1)实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。

(2)检验人员应经过操作前培训。

(3)用酶标仪测定。

5、操作程序(1)样本采集。

无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4?保存，必要时，-20?冻存。

(2)操作步骤。

参照试剂盒说明书进行操作。

一肌步骤如下:?取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。

稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。

将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。

?37?温育30分钟;弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。

每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。

?每孔加酶标记抗体100ul，37?，30分钟。

洗板同上。

?加酶底物,色原溶液(OPD,TMB)，每孔100ul37?，15分钟。

?加终止液(2mo1,L HSO)，24每孔50ul。

于酶标仪上读取吸光度(A)值。

(3)结果判定:?阴性对照平均A值必须小于0 .2;弱阳性对照平均A值在0 .20,0 .65;弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。

人巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒国家监督抽验质量评价

人巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒国家监督抽验质量评价

・
质 量 控 制 与 管 理 ・
人 巨细胞病毒 Ｉ ｇ Ｇ抗体检测 试剂盒 国家 监 督抽 验 质 量 评 价
胡泽斌 ， 曲守 方，孙彬 裕 ，杨振 ，黄 杰
人类 巨细胞病毒 （ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍｅ ｇ ａ ｌ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｃ ＭＶ） ，属
疱 疹 病 毒 科 ， 乙组 疱 疹 亚 科 ，分 子 量 为 １ ５ ０ Ｘ １ ０ 。 Ｄ，是 直 径为 ２ ０ ０ ｎ ｌ Ｔ ｌ的线 状 双 链 ＤＮ Ａ 病 毒 ，人 是 其 唯 一 的 宿 主 。 巨细 胞 病 毒 的 主 要 感 染 途 径 是 与 被 感 染 病 人 接 触 ， ０ ％（ 重复性／ 精密 性） 。 实验操作严格按
各待 测 试 剂 盒 的 说 明书 进 行 。
２ 结 果
２ ． １ 法定检验 按照企业产 品注册标准进行检测 ， 如 果企业产 品注册标
切 实 加 强 对 此 类 产 品的 监 管 ， 根据 《 食 品药 品监 管 总 局 办 公 厅 关 于 印发 体 外 诊 断试 剂 抽 验 工 作 方 案 的通 知 》 （ 食 药 监 办
械监 ［ ２ ０ １ ５ ］ ６ ３ 号 ）开 展 了 监 督抽 验 工作 。
探 索 性 研 究 ：依 据 Ｙ Ｙ／ Ｔ １ ２ ３ ６ ． ２ ０ １ ４ 《巨 细 胞 病 毒
被感染病人的唾液 、生殖器分泌物、尿 液和 乳汁 ，同时也可
通 过 胎 盘 传 播 或 发 生 医 源 性 传 。 Ｃ ＭＶ 是 新 生 儿 先 天 性 致畸的重要病原微生物之一 ， 它 对 胎 儿 的危 害 比风 疹 病 毒 要 大 ，最 易 引起 胎 儿 、新 生 儿 、婴 儿 的急 性 、慢 性 感 染 和 迟 发

人IgM(单克隆抗体) 说明书

人IgM(单克隆抗体) 说明书

小鼠抗人IgM（单克隆抗体）
本产品使用具有高效价抗体的小鼠腹水为原料，采用免疫亲和层析方法纯化，去除杂抗体，并采用免疫亲和层析方法纯化，制成高纯度（＞95%）高活性的抗人IgM（μ链特异）单克隆抗体。

纯度：≥95%
保存体系：10mM PBS、0.03%防腐剂、PH7.2
应用范围：Elisa、WB、IHC、金标、点膜、包被等科研、生产实验
稳定性：-20℃保存2年
产品规格：1mg、5mg、10mg、50mg
注意事项：
1.请根据实验需要选择最适工作效价，部分实验根据具体实验情况可在推荐工作效价
基础上进行增加或减小。

2.短期保存的抗体：如抗体几周内就会使用，收到后推荐在2-8℃保存，2-8℃短暂保
存数周对抗体活性没有影响。

3.长期保存的抗体：如抗体需超过1个月后才会使用，请酌情分装后于-20℃保存。

4.建议：将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。

绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。

反复冻融过程中，冰晶会对抗体的空间结构造成破坏，导致蛋白变性形成多聚
体，从而降低抗体的结合能力，加快抗体降解速度。

人巨细胞病毒核酸标准物质研制与应用

人巨细胞病毒核酸标准物质研制与应用

人巨细胞病毒核酸标准物质研制与应用付岳;王瑞霞;邹迎曙;李尔华;高旭年;王军【摘要】人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是威胁人类健康的最重要病原之一.随着分子生物学技术的发展,HCMV核酸水平的检测逐渐得到了广泛的认可,这也就需要研制HCMV核酸标准物质来保证检验数据的真实可靠.本文简要介绍了国内外目前存在的HCMV核酸标准物质的研制情况,并对这些标准物质在应用中遇到的问题进行了阐述,旨在为人巨细胞病毒核酸检测诊断试剂的标准化,以及为其质量控制提供参考.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2017(009)006【总页数】5页(P367-370,385)【关键词】人巨细胞病毒;核酸;标准物质【作者】付岳;王瑞霞;邹迎曙;李尔华;高旭年;王军【作者单位】北京市医疗器械检验所,医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室,北京101111;北京市医疗器械检验所,医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室,北京101111;北京市医疗器械检验所,医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室,北京101111;广州邦德盛生物科技有限公司,广东,广州510665;广州邦德盛生物科技有限公司,广东,广州510665;北京市医疗器械检验所,医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室,北京101111【正文语种】中文巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）属于β疱疹病毒亚科，病毒基因组大约235 kb。

病毒感染具有严格的宿主特异性，例如人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）只能感染人［1］。

HCMV感染在人群中很普遍但都无任何感染症状［2］。

孕妇感染HCMV可引起新生儿宫内感染，导致胎儿畸形等严重疾患［3⁃4］。

另外，在免疫功能低下的人群中，例如在艾滋病、器官移植病人中若感染 HCMV 将引起严重的并发症［5⁃6］。

目前实验室检测HCMV感染的方法有病毒学检测、血清学检测与核酸检测等［7］。

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09546h特异性：本试剂盒可检测人Anti-CMV IgM，且与其他相关抗体无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-CMV IgM含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×6 ml/瓶。

4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。

5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。

6.底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。

7.底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。

8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。

9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。

需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09546h特异性：本试剂盒可检测人Anti-CMV IgM，且与其他相关抗体无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-CMV IgM含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×6 ml/瓶。

4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。

5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。

6.底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。

7.底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。

8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。

9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。

需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

一种巨细胞病毒抗体IgM的检测试剂盒[发明专利]

一种巨细胞病毒抗体IgM的检测试剂盒[发明专利]

专利名称：一种巨细胞病毒抗体IgM的检测试剂盒专利类型：发明专利
发明人：宣生良
申请号：CN201810883445.7
申请日：20180806
公开号：CN109001468A
公开日：
20181214
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种巨细胞病毒等抗体IgM的检测试剂盒，属于检测试剂技术领域。

它包括复合微珠悬浮液、荧光显示剂、样本稀释液和洗涤液，生产工艺按照制备微珠保存液、微球的活化与包被、制备荧光标记物和制备浓缩洗涤液进行生产，并结合校准品1、校准品2、校准品3、参考微球和NSC微球对照品的特定抗原，解决了当检测一个样本中的弓形虫、风疹、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒1型和单纯疱疹病毒2型时，需要单独的用四种检测试剂分别对弓形虫、风疹、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒1型和单纯疱疹病毒2型进行检测的问题，缩短了检测时间，从而提高了检测效率。

申请人：一滴准生物科技(常州)有限公司
地址：213100 江苏省常州市西太湖科技产业园长扬路9号
国籍：CN
代理机构：上海怡恩专利代理事务所(普通合伙)
代理人：牟俊玲
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一种检测巨细胞病毒IgM抗体的化学发光法免疫分析诊断试剂盒[发明专利]

一种检测巨细胞病毒IgM抗体的化学发光法免疫分析诊断试剂盒[发明专利]

专利名称：一种检测巨细胞病毒IgM抗体的化学发光法免疫分析诊断试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：彭京胜,应希堂,宋胜利,胡国茂,唐宝军,于尚永
申请号：CN200810105414.5
申请日：20080429
公开号：CN101368965A
公开日：
20090218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种采用FITC抗体－FITC间接包被技术与化学发光免疫分析技术相结合以检测巨细胞病毒IgM抗体的体外诊断试剂盒及其制备方法。

本发明的试剂盒由阴性、阳性对照，固相载体，标记抗体，酶标抗原，化学发光底物液，以及浓缩洗涤液组成。

本发明的试剂盒可以作为产前优生优育诊断的辅助检测指标，其对于提高出生人口素质，搞好计划生育和优生优育具有极其重要的意义。

申请人：北京科美东雅生物技术有限公司
地址：100094 北京市海淀区永丰基地丰贤中路7号北科园
国籍：CN
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人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法[发明专利]

人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法[发明专利]

专利名称：人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法专利类型：发明专利
发明人：米薇,戴新华,胡志上,王越珉,翟睿,方向,欧阳艳艳申请号：CN202110259295.4
申请日：20210310
公开号：CN112961237B
公开日：
20220322
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种人源化IgM单克隆抗体标准物质及制备方法，该方法包括如下步骤：针对病毒抗原进行噬菌体抗体库筛选，获得达到亲和力阈值需求的IgG原型抗体；原型IgG抗体亲和力成熟后，将优化后的抗体重链可变区嫁接到人源IgM抗体的恒定区上组成嵌合体重链，Kappa轻链可不变。

表达、纯化以获得人源化IgM单克隆抗体标准物质原料；对人源化IgM单克隆抗体标准物质原料进行纯度表征，蛋白质活性表征和结构表征；在纯度充分表征和结构确证与目标抗体序列一致的基础上，经均匀性、稳定性检验，采用基于氨基酸分析的同位素稀释质谱法对人源化IgM单克隆抗体标准物质进行定值。

申请人：中国计量科学研究院
地址：100029 北京市朝阳区北三环东路18号
国籍：CN
代理机构：北京东方尚禾专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：李厚铭
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一种用重组抗原检测人巨细胞病毒IgM和IgA抗体的ELISA试剂盒及其制备

一种用重组抗原检测人巨细胞病毒IgM和IgA抗体的ELISA试剂盒及其制备

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810968554.9(22)申请日 2018.08.23(71)申请人 潍坊市康华生物技术有限公司地址 261023 山东省潍坊市经济开发区月河路699号(72)发明人 杨致亭　唐玉蓉　马金环　朱元祺　王婷　(74)专利代理机构 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411代理人 苏友娟(51)Int.Cl.G01N 33/577(2006.01)G01N 33/569(2006.01)G01N 33/535(2006.01)(54)发明名称一种用重组抗原检测人巨细胞病毒IgM和IgA抗体的ELISA试剂盒及其制备工艺(57)摘要本发明公开了一种用重组抗原检测人巨细胞病毒IgM和IgA抗体的ELISA试剂盒及其制备工艺，本发明为HCMV重组抗原S(pp150862-1048+gp52297-433+pUL57545-601)用于检测人巨细胞病毒IgM和IgA的ELISA试剂盒，包括包被鼠抗人-IgM 单克隆抗体的酶标板和包被HCMV重组抗原S的酶标板，以及辣根过氧化物酶标记的HCMV重组抗原S和标记的鼠抗人-IgA单克隆抗体。

其中，包被鼠抗人-IgM单克隆抗体的酶标板用于检测HCMV IgM抗体，包被HCMV重组抗原S的酶标板用于检测HCMV IgA抗体。

本发明试剂具有较好的灵敏性、特异性、稳定性和可重复性，且操作方法简便，标准易于控制。

权利要求书2页 说明书7页 附图1页CN 109298181 A 2019.02.01C N 109298181A1.一种用重组抗原检测人巨细胞病毒IgM和IgA抗体的ELISA试剂盒，其特征是：包括包被鼠抗人-IgM单克隆抗体的酶标板和包被HCMV重组抗原S的酶标板、辣根过氧化物酶标记的HCMV重组抗原S和标记的鼠抗人-IgA单克隆抗体、标本稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阴性对照和阳性对照。

巨细胞病毒IgM抗体捕捉ELISA法的建立及其应用

巨细胞病毒IgM抗体捕捉ELISA法的建立及其应用

巨细胞病毒IgM抗体捕捉ELISA法的建立及其应用
张乐;陆绍红
【期刊名称】《浙江省医学科学院学报》
【年(卷),期】1999(010)004
【摘要】建立巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩgＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法（ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），并用该法调查１９１７例杭州市不同人群的巨细胞病毒感染情况。

结果显示：抗原浓度、抗ＣＭＶ抗体酶结合物浓度对所测得的标本ＯＤ值都有不同程度的，用最适的实验条件建立的ＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测杭州市不同人群，表明儿童组ＣＭＶ感染率高于成人组，工人组的感染率高于其他职业人群。

以本方法测定ＣＭＶ－ＩgＭ抗体的敏感性和特异性较高，可广泛应用于
【总页数】3页(P15-17)
【作者】张乐;陆绍红
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R512.990.1
【相关文献】
1.检测肾综合征出血热血清IgM的ELISA捕捉一步法的建立及初步应用 [J], 汤琰;程振球;王发锁
2.检测乙脑患者IgM抗体快速ELISA捕捉法的建立 [J], 肖毅;刘丽萍
3.嗜异性IgM抗体ELISA检测法的建立和初步应用 [J], 白仲虎;何翠娟
4.检测HFRS患者血清IgM抗体的快速ELISA捕捉法的建立及其与常规法的比较
[J], 王海涛;徐志凯
5.检测脊髓灰质炎IgM抗体捕捉法ELISA的建立及其在早期快速诊断中的应用[J], 张礼璧;刘玉清;刘文军
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人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制及其临床应用

人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制及其临床应用

人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制及其临床应用
郭立君;邵华;陈子杨;李冰;郭凤云
【期刊名称】《微生物学杂志》
【年(卷),期】2004(024)005
【摘要】制备人源性高效价人巨细胞病毒(HCMV)特异免疫球蛋白(IgG).采用ELISA从检定合格的血浆中筛选出滴度≥1:5 000的血浆,合并后按低温乙醇法制备HCMV-IgG,再次检定后应用于临床.结果显示,按人免疫球蛋白标准检定,所制备的HCMV-IgG全部合格,HCMV-IgG滴度为1:150000.临床应用结果表明,2批高效价HCMV-IgG均可明显降低先天性HCMV感染率.
【总页数】3页(P29-30,37)
【作者】郭立君;邵华;陈子杨;李冰;郭凤云
【作者单位】长春生物制品研究所,吉林,长春,130062;长春生物制品研究所,吉林,长春,130062;长春生物制品研究所,吉林,长春,130062;长春生物制品研究所,吉林,长春,130062;长春生物制品研究所,吉林,长春,130062
【正文语种】中文
【中图分类】R364.7
【相关文献】
1.更昔洛韦联合人免疫球蛋白治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎22例疗效观察 [J], 熊克宫;林彩文
2.巨细胞病毒UL44、UL32特异性免疫球蛋白M的检测在婴儿巨细胞病毒性肝炎
中的意义 [J], 项曙光
3.人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价 [J], 王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟
4.高效价人巨细胞病毒免疫球蛋白的研制 [J], 邵华;李凤喜;陈子杨;杨利民;李冰;郭立君;郭凤云
5.抗人巨细胞病毒免疫球蛋白G在脑胶质瘤的表达及与预后的相关性 [J], 郑玺; 殷捷
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FAN Xing-liang，YING Zhi-fang，LI Chang-gui，BAI Dong-ting，WANG Jun-zhi （ National Institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China）
Abstract： Objective To establish the new national reference panel in detection of HCMV IgM antibodies． Methods 5 positive samples and 12 negtive samples of HCMV IgM antibodies were collected，respectively． Identification and verification were carried out by uing six commercial HCMV detection kits registered in China and / or foreign countries． Results The sensitivity and accuracy of the panel are in line with the requirements of national reference material of P． R． China． Conclusions The panel is suitable to be used as the reference in quality control for HCMV IgM diagnostic reagents． Key words： Human cytomegolovirus（ HCMV） ； National reference panel ； Quality control； IgM
对参考品进行 4 ℃ 稳定性、37 ℃ 稳定性和冻融 稳定性考核。存放条件如下： ① － 70 ℃ 存放； ② 反 复冻融 5 次； ③ 4 ℃ 存放 14 d； ④ 37 ℃ 存放 1 d； ⑤ 37 ℃ 存放 3 d； ⑥ 37 ℃ 存放 7 d； ⑦ 37 ℃ 存放 14 d。 取出后进行稳定性检测和均匀性检测。
人巨细胞病毒也称人疱疹病毒 5 型 （ Human herpesvirus 5，HHV5） ，属 β 疱疹病毒亚科，在全世界 不同种族人群中都是普遍存在的病原体，感染率很 高，其流行因地区和社会经济状况不同而有区别，北 美和欧洲成年人群中抗体阳性率为 50% ～ 80% ，而 亚洲与非洲的人群中抗体阳性率近 100% ，社会经 济状况较好的成年人感染率较低，而社会经济状况 较差的人群感染率高。HCMV 的毒力较弱，侵入机 体后一般不会使器官和组织受到严重损伤，但一旦 该病毒基因整合在受精卵细胞的相关基因后，则可 阻止或影响后者的复制和表达，最后导致不可逆的 形态和结构的异常。临床表现为巨细胞包涵体病，
上述 6 种诊断试剂分别以不同检测原理的捕获 法 / 二步法、捕获法 / 一步法、化学发光法、荧光法及 金标法等对初筛样品进行检测，所用检测抗原既有
HCMV 灭活病毒也有不同的重组蛋白。
2结果
2． 1 参考品组成 从 11 836 份样本中筛选出强、中、弱阳性样本
共 5 份，作为阳性参考品，编号为 P1 ～ P5； 筛选出阴 性样本和阴性高值样本共 9 份，作为阴性参考品，编 号为 N1 ～ N9； 筛选出 1 份中值样本，依次梯度稀释 成 5 个稀释度，分别编号为 S1 ～ S5，其中 S4 略高于 临界值，另外还筛选出 1 份阴性样本作为 S6； 筛选 出 1 份中等偏弱阳性样本作为精密度参考品，标记 R。 2． 2 参考品标定 2． 2． 1 参考品验证： 按照说明书分别采用 6 种不同 方法的试剂对 HCMV IgM 抗体质控盘进行检测，结 果如表 1 所列。
① 组作为对照组，与②组至⑦组的考核结果对 比： P1 ～ P5 的结果符合，其 A 值逐渐降低； N1-N9 的 结果符合，N1 ～ N7 在④组和⑤组存放条件下的 A 值逐渐增 加，N8、N9 在 不 同 存 放 条 件 下 变 化 较 稳 定； 而在 S1 ～ S6 的结果中，S1 ～ S6 在不同存放条件 下，其 A 值逐渐降低； ②组和③组的结果符合； ④组 至⑦组至检测到 S3，比对照组低一个梯度。此参考 品稳 定 性 试 验 结 果 提 示，5 次 冻 融 对 参 考 品 中 的 HCMV IgM 抗体活性没有影响。在精密性方面，经 过破坏的样本及对照样品变异系数均小于 15% ，并 且由于其均值降低，致使其 CV 较对照组偏低，考核 结果见表 3。
微生物学免疫学进展 2012 年第 40 卷第 3 期 Prog in Microbiol Immunol Jun． 2012，Vol． 40，No． 3
·31·
1 材料与方法
1． 1 材料 1． 1． 1 样本来源 自 2005 年开始从河南、广西、黑 龙江、山 东、北 京、广 东、湖 北 等 地 收 集 用 于 研 制 HCMV IgM 抗体国家参考品的样本，2006 年 3 月至 2008 年 1 月，用多家公司的 HCMV IgM 抗体诊断试 剂盒对候选参考品进行筛选后，对检测结果进行分 析，从中筛选出参考品样本。 1． 1． 2 主要仪器和试剂 分别选取已在国外上市 的及国内批准的 6 种 HCMV IgM 抗体检测试剂，编 号命名为 A、B、C、D、E、F 试剂。 1． 2 方法
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微生物学免疫学进展 2012 年第 40 卷第 3 期 Prog in Microbiol Immunol Jun． 2012，Vol． 40，No． 3
同厂家试剂盒的反应模式和灵敏度的差异，本研究 将最低检出限设定为 S3，S4、S5 样品可以检测为阳 性或阴性，见表 2。
表 2 稀释样本的检测结果 Tab． 2 Detective results for diluted samples
标本序号ห้องสมุดไป่ตู้
P1 P2 P3 P4 P5 N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7 N8 N9
A 捕获法 （ A 值） 0． 827 2． 029 0． 755 0． 708 0． 873 0． 084 0． 029 0． 021 0． 035 0． 031 0． 028 0． 018 0． 029 0． 026
收稿日期： 2012 -02 -01； 修回日期： 2012 -04 -27 基金项目： 新型体外诊断试剂质量评价体系和国家参考物质研究
（ 2011AA02A115） 作者简介： 范行良，副研究员，主要从事病毒类诊断试剂及疫苗质量
控制工作。 通信作者： 王军志，研究员，主要从事生物制品质量控制工作。E-
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微生物学免疫学进展 2012 年第 40 卷第 3 期 Prog in Microbiol Immunol Jun． 2012，Vol． 40，No． 3
·论 著·
人巨细胞病毒 IgM 抗体国家参考品的研制
范行良，英志芳，李长贵，白东亭，王军志
（ 中国食品药品检定研究院，北京 100050）
5． 408 1． 714 7． 433 6． 513 7． 353 0． 186 0． 359 0． 303 0． 230 0． 247 0． 331 0． 147 0． 158 0． 162
F 金标法 （ 条代）
++ +
++ +
+++ － － － － － － － － －
结果 符合率
6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6
表 1 阳性和阴性参考品的检测结果 Tab． 1 Detective results for the positive and negative references
B
C
D
E
捕获法 （ A 值）
捕获法 （ A 值）
化学发光法 （ 发光值）
微粒法 （ 荧光强度）
0． 254 1． 379 0． 268 0． 413 0． 334 0． 024 0． 014 0． 024 0． 043 0． 020 0． 020 0． 013 0． 031 0． 020
目前，国内外已有多家实验室及试剂生产厂家 和公司研制、生产 HCMV IgM 抗体检测试剂，用于 检测 HCMV IgM 抗体。由于生产条件不一、标准各 异，试剂的 灵 敏 度 及 精 密 性 会 有 所 差 异，因 此 建 立 HCMV IgM 抗体国家参考品，对于 HCMV IgM 抗体 检测试剂的标准化和规范化，促进 HCMV IgM 抗体 检测试剂的健康、有序发展具有重要意义。
用多种方法学的试剂检测阳性参考品和阴性参 考品，结果符合率均为 6 /6，与预期一致，见表 1。 2． 2． 2 最低检出限设定 分别用 3 种试剂对最低 检出限系列参考品进行检测。每份样品分别检测
5 次。 试验表明，A、D、E 3 种试剂对 S1、S2、S3 样品检
测结果均为阳性，S4 样品检测结果开始出现差异， S5、S6 样品检测结果均为阴性。考虑到在国内外不
mail： wangjz@ nicpbp． org． cn
病儿有肝脾肿大、血小板减少性紫癜及溶血性贫血， 少数是先天性畸形，如小头、智力低下、神经肌肉运 动障碍、耳聋、脉络膜视网膜炎等。由于 HCMV 引 起先天性畸形的症状常在出生后几月到几年表现出 来，主要为智力低下，因此成为围产医学和优生学中 的重大研究课题。另外，HCMV 与骨髓移植失败、单 核细胞增多症都有很大的相关性。鉴于 HCMV 在 临床疾病中的重要作用，已经引起医学界的广泛重 视。近年来对 HCMV 感染的实验室诊断研究集中 于孕妇的筛查及患者免疫状态评价、产前诊断、新生 儿的早期诊断及器官移植受者感染的检测等。