ELISA法检测巨细胞病毒CMV抗体测定(CMV-IgM)标准操作程序

1.检测原理采用酶联免疫捕获法原理进行检测。

利用抗人IgM单克隆抗体制备包被板，辣根过氧化物酶标记CMV 抗原制备酶结合物。

通过免疫反应形成固相二抗-抗体-抗原-酶复合物，该复合物催化底物显色，显色强度与CMV-IgM抗体含量成正比。

2. 样本类型及处理方法3.试剂注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品、质控品）需注明日期及签名。

每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截止日期。

开启时应检查试剂是否变色，是否肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示试剂已经变质或超过保质期。

不同批号试剂盒中各组份不可以互换，组份所标示量为最低分装量。

4.仪器设备备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。

5.质量控制5.1使用的质控品5.2质控周期5.2.1每一批次标本均需运行一次质控。

5.2.2每一批标本最大量为：92个标本。

5.3变异系数CV<20%5.4质控判断标准即时质控法5.5失控处理：对质控失控需查找原因并进行分析5.5.1先观察整块酶标板显色是否正常。

5.5.2查找操作过程是否按照SOP文件进行。

5.5.3质控品S/CO值>3SD或质控品S/CO值<3SD，结合模式报告结果。

6.操作步骤6.1选用试剂：郑州安图生物工程股份有限公司6.2平衡：从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应放置室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时放入有干燥剂的自封袋封存于冰箱中备用。

在平衡试剂的同时，待测标本需放置室温平衡30分钟后再行测试。

6.3配液：取1包固体洗液用500ml纯化水溶解后备用。

配制好的洗涤液如用不完可放置2-8℃冷藏储存，使用前应放置室温平衡20分钟后方可使用。

6.4加样：用移液器在反应孔中分别加入阴、阳性对照血清和CMV-IgM质控品各100ul，测定孔中加入样品稀释液100ul，再依次加入待测血清样品10ul，用封口膜封板。

巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程1、检测目的规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。

2、检测方法)检测IgM抗体。

采用酶联免疫吸附法(ELISA3、检测原理采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM)，微孔中预包被鼠抗人-IgM(u链)，首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶(HRP)标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。

被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。

通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。

4、实验条件(1)实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。

(2)检验人员应经过操作前培训。

(3)用酶标仪测定。

5、操作程序(1)样本采集。

无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4?保存，必要时，-20?冻存。

(2)操作步骤。

参照试剂盒说明书进行操作。

一肌步骤如下:?取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。

稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。

将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。

?37?温育30分钟;弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。

每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。

?每孔加酶标记抗体100ul，37?，30分钟。

洗板同上。

?加酶底物,色原溶液(OPD,TMB)，每孔100ul37?，15分钟。

?加终止液(2mo1,L HSO)，24每孔50ul。

于酶标仪上读取吸光度(A)值。

(3)结果判定:?阴性对照平均A值必须小于0 .2;弱阳性对照平均A值在0 .20,0 .65;弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。

ELISA操作规程
标题：ELISA操作规程
引言概述：ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析技术，用于检测特定蛋白质、抗体或者其他生物份子的存在和浓度。

正确的操作规程对于获得准确可靠的实验结果至关重要。

一、实验前准备
1.1 准备实验室基本设备：ELISA板阅读器、洗板机、移液器等。

1.2 准备实验试剂：包括底物、酶标记的抗体、洗涤缓冲液等。

1.3 根据实验方案准备样本：如血清、细胞上清液等。

二、板涂覆
2.1 将试剂均匀涂覆在ELISA板上。

2.2 封闭未被试剂覆盖的部份，防止非特异性结合。

2.3 将板在4℃下保存一段时间，促使试剂充分吸附。

三、样本加样
3.1 样本需按照实验方案稀释，避免过高或者过低浓度。

3.2 每孔加样量要准确，避免交叉污染。

3.3 混匀样本后，避免气泡产生。

四、洗板
4.1 使用洗板机进行洗板，确保每孔洗涤充分。

4.2 每次洗板后用吸头吸去残留液，避免残留物干扰实验结果。

4.3 洗板缓冲液的配制与使用要按照规定比例和方法进行。

五、显色和读板
5.1 加入底物后，保持暗处孵育一段时间。

5.2 在适当波长下读板，记录吸光值。

5.3 根据实验方案计算样本浓度，注意结果的解读和分析。

结语：ELISA操作规程的正确执行对于实验结果的准确性至关重要。

惟独严格按照规程操作，才干获得可靠的实验数据，为科研工作提供有力支持。

希翼本文提供的ELISA操作规程能够对您的实验工作有所匡助。

巨细胞病毒IGM抗体测体测定操作规程用途：通过检测人血清样本中是否含有巨细胞病毒IGM抗体，用于辅助诊断患者近期感染了巨细胞病毒。

基本原理：本试剂盒采用鼠抗人IGM单克隆抗体包被微孔条，辣根过氧化物酶标记基因工程重组表达的巨细胞病毒特异性原原为示踪物，TMB显示系统，EIA捕获一步法检测人血中抗巨细胞IGM抗体。

试剂：巨细胞病毒IGM抗体检测试剂盒仪器：酶标检测仪样本要求：血清标本按常规方法由静脉采集，血浆标本可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝，5天内测定的标本可以放置4℃保存。

标本放置在-20℃至少可以保存3个月。

标本避免溶血或反复冻溶，混浊或有沉淀的标本应离心或过滤澄清后再检测。

需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。

试验方法：1、平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。

2、配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20稀释备用。

3、设定：每次试验应预设空白对照1孔（暂不加任何液体），阴性对照3孔，阳对照2孔。

4、加样：按顺序在各反应孔中分别加入20υL待检标本和阴、阳性对照。

5、加酶：依次向每孔加入100υL酶结合物（空白对照不加），振荡混匀。

6、温育：在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应60分钟。

7、洗板：将孔内液体甩干，在各反应孔加入稀释后的洗涤液300υL，静置15秒钟，甩弃洗涤洗涤液：如此洗涤5遍，最后一次扣干反应板。

8、显色：每孔依次加入底物A、B液务50υL（包括空白对照孔），加盖封板膜，振荡混匀，37℃避光显色15分钟。

9、终止：每孔加入终止液50υL（包括空白对照孔），振荡混匀终止反应。

10、测定：用空白对照孔调零，并尽快用酶标仪单波长450 nm测定各孔OD值。

也用双波长450nm/630-690nm测定各孔OD值。

结果解释1、临界值（CUT-OFF值）计算：临界值=0.10+阴性对照OD平均值（阴性对照OD平均值≤0. 05按0. 05计算）。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体在样本中的存在量。

本操作规程旨在提供详细的ELISA实验步骤，确保实验的准确性和可重复性。

二、材料和试剂准备1. 微孔板：96孔或其他规格的微孔板。

2. 抗原或抗体：根据实验需求选择适当的抗原或抗体。

3. 样本：待测样本，如血清、尿液等。

4. 酶标记抗体：选择与待测抗原或抗体特异性结合的酶标记抗体。

5. 酶标记底物：选择适当的酶标记底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。

6. 停止液：选择适当的停止液，如硫酸。

三、实验步骤1. 预处理a. 将微孔板的孔洗净，并将待测样本、阳性对照和阴性对照分别加入孔中。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使抗原或抗体与样本中的特定成分结合。

c. 弃去孔中液体，将孔洗净。

2. 添加酶标记抗体a. 将酶标记抗体加入每个孔中，使其与已结合在孔中的抗原或抗体结合。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使酶标记抗体与抗原或抗体结合。

3. 洗涤a. 弃去孔中液体，将孔洗净，重复2-3次，以去除未结合的酶标记抗体。

4. 添加酶标记底物a. 将酶标记底物加入每个孔中，使其与酶标记抗体结合。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使底物与酶反应产生显色。

5. 反应停止a. 加入适量的停止液，停止底物与酶的反应，防止进一步显色。

b. 使用酶标仪测量吸光度，记录各孔的光密度值。

6. 数据分析a. 根据实验设计和标准曲线，计算待测样本中特定抗原或抗体的浓度。

b. 统计数据并进行统计学分析，如平均值、标准差、t检验等。

四、实验注意事项1. 所有操作都应在洁净的实验室环境中进行，避免污染。

2. 严格按照实验步骤和操作规程进行，确保实验的准确性和可重复性。

3. 注意使用适当的阴性对照和阳性对照，以验证实验结果的准确性。

4. 注意控制实验条件，如温度、时间等，以保证实验结果的可比性。

ELISA操作步骤酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测抗原或抗体的存在和浓度。

双抗体夹心法是ELISA的一种常见方法，也被称为间接ELISA。

该方法通过将待测抗原与特异性抗体结合，然后将该复合物夹在两种抗体之间，从而实现检测目标物的定量。

以下是ELISA操作步骤（双抗体夹心法）：1.准备所需试剂和设备，包括等量酶联免疫吸附试剂，洗涤缓冲液，检测抗体，底物液和浓缩液。

2.预先涂上酶标板：用特异性抗体溶液将酶标板的孔涂覆。

将抗体溶液加入每个孔中，然后在常温下孵育2小时或过夜在4°C下孵育。

孵育结束后，将溶液倒掉，然后用洗涤缓冲液洗涤掉未结合的抗体。

3.加入待测样品：将待测样品加入酶标板中，然后在常温下孵育1小时。

孵育结束后，倒掉孵育液，并用洗涤缓冲液洗涤掉未结合的样品。

4.加入检测抗体：将检测抗体加入酶标板孔中，然后在常温下孵育1小时。

检测抗体可以与目标物中的特异性抗体结合，并形成夹心复合物。

5.加入底物液：将底物液加入每个孔中，然后在室温下孵育20-30分钟。

底物液通常含有染色剂，当底物液与酶产生反应时，颜色会发生变化。

6.停止反应：在孵育结束后，加入停止液停止反应。

停止液会改变底物液的pH值，从而停止酶的反应。

这将保持颜色稳定，并允许结果的定量测量。

7.结果分析：使用酶标仪读取每个孔的吸光值。

这些吸光值可以用于计算样品中目标物的浓度。

通常，在酶标板上设置标准曲线，用于根据吸光值确定目标物的浓度。

8.清洗：在每个步骤之后，用洗涤缓冲液充分清洗酶标板。

洗涤的目的是去除未结合的试剂和非特异性物质，以确保结果的准确性。

9.数据处理和统计分析：根据读数结果计算样品中目标物的浓度，并进行统计分析。

常见的统计方法包括均值、标准差和方差。

以上是双抗体夹心法ELISA的一般操作步骤。

在实际操作中，可能会根据具体要求进行一些调整和优化。

同时，实验室安全操作规范和个性化要求也需要被遵循和注意。

ELISA方法详细过程及步骤ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。

它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。

此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。

(一)原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。

即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。

比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

(二)操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。

在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。

次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

(简称洗涤，下同)。

2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。

然后洗涤。

(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度) 0.1ml。

37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。

也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析目标物质（如蛋白质、抗原或抗体）的存在和浓度。

本文将详细介绍ELISA操作规程，包括实验前的准备工作、试剂和设备的准备、样品处理、操作步骤和结果分析等内容。

二、实验前准备1. 实验室环境：确保实验室环境整洁、无尘、无污染，并保持适宜的温度和湿度。

2. 试剂准备：根据实验需求准备好所需的试剂，包括酶标板、抗体、酶标记物、洗涤缓冲液、底物等。

确保试剂的保存条件和有效期限。

3. 设备准备：检查和准备好所需的实验设备，包括酶标仪、洗板机、离心机等，并校准仪器的参数。

三、样品处理1. 样品收集：根据实验需求，收集所需的样品，如血清、尿液、细胞上清等。

确保样品的采集方法和保存条件符合要求。

2. 样品预处理：根据样品的性质和实验要求，进行必要的预处理步骤，如离心、稀释、加热等。

四、操作步骤1. 酶标板涂覆：将需要检测的抗原或抗体溶液加入酶标板孔中，使其吸附于孔壁。

孔数和样品处理方式根据实验设计确定。

2. 洗涤步骤：使用洗涤缓冲液洗涤酶标板孔，去除未结合的物质，避免非特异性反应的干扰。

3. 样品加入：将处理好的样品加入酶标板孔中，与酶标板上的抗原或抗体发生特异性结合反应。

4. 洗涤步骤：重复第2步的洗涤步骤，去除未结合的样品。

5. 酶标记物加入：加入与样品中特异性结合的酶标记物，形成免疫复合物。

6. 洗涤步骤：再次洗涤酶标板孔，去除未结合的酶标记物。

7. 底物加入：加入底物，使酶标记物催化反应产生可测量的信号。

8. 反应停止：加入适当的反应停止液，终止酶反应。

9. 测量信号：使用酶标仪测量酶标板上的信号强度，根据标准曲线或计算公式计算出样品中目标物质的浓度。

五、结果分析根据实验结果，可以得出样品中目标物质的存在与否以及其浓度。

根据实验设计和目的，进行数据统计和分析，并绘制相应的图表或曲线，以便进行结果的展示和解读。

CMVIGM半定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。

标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。

当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹.2.2标本种类：血清或血浆.2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。

4.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂：6.1试剂名称：CMV-IGM诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3包装规格：100Test/kit6.4试剂盒组成：CMV-IGM诊断试剂。

6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。

7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：美国雅培公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。

8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中（不能有纤维蛋白，不能有气泡）。

8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。

1.检测原理采用间接法原理检测人血清样品中抗核抗体IgG（ANA-IgG），包被抗原。

待测样本加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含有ANA-IgG抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入辣根过氧化物酶标记的抗体，经孵育后，酶标记物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。

2. 样本类型及处理3.试剂注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品、质控品）需注明日期及签名。

每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截止日期。

开启时应检查试剂是否变色，是否肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示试剂已经变质或超过保质期。

4.仪器设备备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。

5.质量控制5.1使用的质控品5.2质控周期5.2.1每一批次标本均需运行一次质控。

5.2.2每一批标本最大量为：44个标本。

5.3变异系数CV<20%5.4质控判断标准即时质控法5.5失控处理：对质控失控需查找原因并进行分析5.5.1先观察整块酶标板显色是否正常。

5.5.2查找操作过程是否按照SOP文件进行。

5.5.3质控品S/CO值>3SD或质控品S/CO值<3SD，结合模式报告结果。

6.操作步骤6.1选用试剂：北京贝尔生物工程股份有限公司6.2平衡：从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应放置室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时放入有干燥剂的自封袋封存于冰箱中备用。

在平衡试剂的同时，待测标本需放置室温平衡30分钟后再行测试。

6.3配液：将20×洗涤液用纯化水做20倍稀释后备用。

配制好的洗涤液如用不完可放置2-8℃冷藏储存，使用前应放置室温平衡20分钟后方可使用。

6.4加样：用移液器在反应孔中分别加入阴、阳性对照血清和ANA-IgG质控品各100ul，测定孔中加入样品稀释液100ul，再依次加入待测血清样品5ul（，用封口膜封板。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样品中的抗原或抗体。

本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA操作步骤，以确保实验结果的准确性和可重复性。

二、材料与试剂1. 酶标板：96孔的多孔板。

2. 样品：待测试的生物样品，如血清、尿液等。

3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体，用于绘制标准曲线。

4. 抗原或抗体：用于检测的目标物质。

5. 洗涤缓冲液：用于洗涤酶标板孔。

6. 反应缓冲液：用于稀释样品和标准品。

7. 酶标记的二抗：与待检测的抗体结合，用于检测目标物质。

8. 底物溶液：用于产生可测量的信号。

9. 停止溶液：用于终止底物反应。

三、实验步骤1. 酶标板的预处理1.1 将酶标板孔洗净，去除任何残留物。

1.2 加入适量的抗原或抗体到每个孔中。

1.3 将酶标板密封，并在4°C下孵育一夜。

2. 标准曲线的制备2.1 准备一系列已知浓度的标准品溶液。

2.2 将标准品溶液加入酶标板的相应孔中。

2.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

2.4 使用底物溶液测量各孔的信号强度。

2.5 绘制标准曲线，将信号强度与标准品浓度进行关联。

3. 样品的处理3.1 将待测样品稀释至适当浓度。

3.2 将稀释后的样品加入酶标板的相应孔中。

3.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

4. 反应的进行4.1 倒出酶标板中的样品或标准品。

4.2 加入酶标记的二抗到每个孔中。

4.3 将酶标板密封，并在室温下孵育一段时间。

5. 信号的测量5.1 倒出酶标板中的二抗溶液。

5.2 加入底物溶液到每个孔中。

5.3 在适当的时间内测量各孔的信号强度。

6. 结果的分析6.1 使用标准曲线将信号强度转换为抗原或抗体的浓度。

6.2 分析样品中目标物质的浓度。

6.3 记录和报告实验结果。

四、注意事项1. 所有操作应在洁净的实验室环境下进行，避免交叉污染。

2. 操作过程中要注意个人防护，使用手套和实验室外套。

CMV、PVY 、TMV、3种植物病毒ELISA检测实验步骤以下斜体部分均为1块96孔ELISA板试剂用量1.磨样：在2mL离心管中加如10粒钢珠后，加入0.25-0.30g叶片（1.5cm打孔器9片叶子的重量），再加入800μL抽提缓冲液（1*GEB）。

样品经组织研磨器磨碎处理后，1200转离心2min，将上清液转入新的离心管，编号后4℃保存，作为待测样本。

2．稀释包被抗体：10mL包被缓冲液+50μL包被抗体浓缩液；(一般下午或晚上做2，3，4步骤)3.包被ELISA板：（用排枪加样）每孔加入100μL上述包被抗体稀释液；4孵育：加样完成后，将ELISA板放入冰箱冷藏室，4℃过夜。

5.洗板：(1).将包被好的ELISA板废液倒掉,在吸水纸上拍干；(2).每孔加入1*PBST,静置1min，倒掉并拍干。

连续洗3次，拍干。

6.加待测样本：（用单道枪加样，每加一个样换一次枪头）每孔加100μL待测样本，阳性对照孔加100μL阳性对照液（按阳性质控小瓶上说明加适量抽提缓冲液（1*GEB）稀释），阴性对照孔加100μL抽提缓冲液（1*GEB）。

阳性对照和阴性对照均设双孔。

（注意：严格对照实验设计图表仔细加样，不可加错样。

）7.孵育：加样完成后，将ELISA板放入生化培养箱，25℃放置2h；8.洗板：同5，重复4次，最后一次洗板结束后，彻底拍干。

（注意：洗板结束前20min，完成第9步制备酶标抗体稀释液。

）9.制备酶标抗体稀释液：TMV:10mL ECI缓冲液+50μL TMV酶标记物，混匀（TMV只有一种酶标记物）；CMV:10mL ECI缓冲液+50μL A酶标抗体+50μL B酶标抗体，混匀；PVY:10mL ECI缓冲液+50μL A酶标抗体+50μL B酶标抗体，混匀。

10.加酶标抗体稀释液：（用排枪加样）每孔加100μL上述相应的酶标抗体稀释液。

11.孵育：加样完成后，将ELISA板放入生化培养箱，25℃放置2h；12.制备PNPP底物：称取10mg PNP固体粉末，加入10mLPNP缓冲液，使其完全溶解。

ELISA 操作流程1 。

包被：用包被液将抗体稀释至蛋白质含量为0.5~20 μg／ml,按100ul/孔加入酶标板，4℃包被过夜。

2. 洗板：次日弃去孔内液体，在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体，加入洗涤液(约280—300ul/孔)，漂洗2-3 次，每次3—5min;3. 封闭：按200-250ul/孔加入封闭液，室温2-3 小时或37℃1—2 小时,也可4℃封闭过夜，然后弃去孔内封闭液；4 。

样品处理：用洗涤液或样品稀释液将待检样品(含未知抗原)稀释至所需浓度；5. 标准液：用洗涤液或样品稀释液将标准液稀释至所需浓度(定性分析可省略本步骤)；6 。

加样:按排列顺序依次加入50—100ul/孔稀释好的标准液、处理过的待检样品、阴性对照及阳性对照，室温或37℃孵育30-60min；7 。

洗板：同步骤2；8. 加酶标抗体:酶标抗体的稀释按产品说明书，按50—100ul/孔加入新鲜配制的酶标抗体，室温或37℃孵育1 小时；9. 洗板：同步骤2;10. 加底物液显色：按100—150ul/孔加入新配制的TMB 底物溶液，室温避光反应15~ 30 分钟。

11. 终止反应：于各反应孔中加入50ul 的终止液。

12 。

结果判定：可于白色背景上，直接用裸眼观察结果，反应孔内颜色越深，阳性程度越强, 阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅，以“+”、“- ”号表示.也可在酶标仪上于450nm (若以ABTS 显色，则410nm) 处测OD 值。

检测时以空白对照孔调零后测各孔OD 值，若样品孔中的OD 值大于阴性对照孔的2 。

1 倍, 即为阳性。

1 。

包被：用包被缓冲液将已知抗原稀释至0。

5~20μg／ml,按100ul/孔加入酶标板，4℃包被过夜，次日洗涤2—3 次;2 。

洗板：次日弃去孔内液体，在纸巾上轻轻扣打以吸去残留液体，加入洗涤液(约280-300ul/孔)，漂洗2—3 次，每次3—5min;3 。

封闭：按200-250ul/孔加入封闭液，室温2-3 小时或37℃1-2 小时,也可4℃封闭过夜，然后弃去孔内封闭液；4. 样品处理：用洗涤液或样品稀释液将待检样品稀释致所需浓度；5. 标准液：用洗涤液或样品稀释液将标准液稀释至所需浓度(定性分析可省略本步骤)；6 。

ELISA操作方案ELISA（酶联免疫吸附试验），是一种用来检测抗原或抗体在生物样本中的定量或半定量分析方法。

它是一种快速、准确、经济的实验技术，广泛应用于医学诊断、病毒学和免疫学研究中。

以下是进行ELISA实验的操作方案。

材料准备：1.酶标板：96孔的微孔板。

2.抗原和抗体：包括待检测抗原和抗体，以及阳性和阴性对照抗体。

3.缓冲液：ELISA实验需要的缓冲液，如PBS、TBS等。

4.酶标记抗体：如辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体。

5.补体或底物溶液：根据实验需要准备。

操作步骤：1.酶标板涂覆：将待检测抗原溶液加入酶标板的孔中，一般每孔加入100-200μl，密封板子，放置在4℃的冰箱中过夜或较长时间，以便抗原充分吸附在酶标板表面。

2.孔洗涤：将涂覆了抗原的酶标板倒置，用洗涤缓冲液轻轻洗涤每个孔，洗涤3-4次，以去除未结合的抗原。

3.孔封闭：将酶标板孔加入蛋白封闭剂，封闭非特异性位点，减少非特异性结合。

4.给孔的抗原加入特异性抗体：将稀释好的抗体加入孔中，孔中的抗原和抗体进行特异性结合。

孔中每次加入100-200μl，孔盖密封，室温孵育1-2小时。

5.孔洗涤：与步骤2一致，洗涤3-4次。

6.添加酶标记抗体：将标记有辣根过氧化物酶（HRP）的抗体加入每个孔中，与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-HRP复合物。

孔中每次加入100-200μl，孔盖密封，室温孵育1-2小时。

7.孔洗涤：与步骤2一致，洗涤3-4次。

8.酶底物添加：将POS底物溶液加入每个孔中，与酶标记抗体结合的HRP催化产生显色反应，形成可见的颜色。

9.停止反应：将酶底物反应停止剂加入每个孔中，停止HRP的催化反应，防止进一步的颜色生成。

10.检测与数据分析：使用酶标仪测量每个孔中的吸光度或荧光强度，并根据标准曲线将数据进行定量或半定量分析。

注意事项：1.实验前准备材料、试剂和设备，确保其干净、无污染。

2.保持操作环境的清洁，避免异物和污染的干扰。

"ELISA"（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测抗原或抗体的存在和浓度。

以下是ELISA的一般步骤：
1. 血清或样品制备：从实验对象中收集血清或样品，并进行适当的处理和稀释，以便在ELISA 中使用。

2. 涂覆抗原或抗体：将待检测的抗原或抗体溶液添加到微孔板（也称为ELISA板）的孔中，并将其静置一段时间，使其与孔壁结合。

3. 孔洗涤：将洗涤缓冲液加入孔中，倒掉孔内余液，重复此步骤数次，以去除非特异性结合物。

4. 加入抗体或样品：将需要检测的样品（如血清）或已知浓度的标准抗体添加到孔中，使其与已固定在孔壁上的抗原或抗体相互结合。

5. 孔洗涤：重复步骤3，以去除未结合的抗体或样品。

6. 添加检测抗体：将与酶标记物结合的二抗或探针抗体添加到孔中，使其与已结合的抗原或抗体相互结合。

7. 孔洗涤：重复步骤3，以去除未结合的检测抗体。

8. 加入底物：将酶底物加入孔中，使其与结合的检测抗体反应。

酶底物的反应产物会显示出可观察的颜色变化。

9. 反应停止：将反应停止液加入孔中，以停止底物的反应。

10. 测量：使用酶标仪或光度计测量每个孔中产生的颜色变化，检测并量化被测物的浓度。

ELISA方法可根据特定需要进行多种形式的变体和优化。

具体的步骤和试剂使用可能会因实验目的、检测对象和实验设计而有所不同，因此在进行ELISA实验时，应根据具体实验方案和相关说明书进行操作。

人抗巨细胞病毒抗体IgM(anti-CMV IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09546h特异性：本试剂盒可检测人Anti-CMV IgM，且与其他相关抗体无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-CMV IgM含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×6 ml/瓶。

4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。

5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。

6.底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。

7.底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。

8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。

9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。

需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

猪巨细胞病毒抗体(CMV-Ab)ELISA试剂盒操作说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。

本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中猪巨细胞病毒抗体(CMV-Ab)的含量。

实验原理：本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪巨细胞病毒抗体(CMV-Ab)。

用纯化的猪腺病毒(ADV)抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中猪巨细胞病毒抗体(CMV-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪巨细胞病毒抗体(CMV-Ab)的存在与否。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

一．实验名称：ELISA间接法筛选CMV 酶标抗体
二．实验目的：利用间接法测CMV，筛选最合适酶标抗体
三．实验原理：间接法是检测抗体常用的方法。

其原理为利用酶标记
的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体
四．实验步骤;
①用1:2000的CMV包板，置于4℃冰箱，第二天备用
②用ED-1 1:100稀释待检血清，1-5阳性血清，6-10阴性血清，
11NBS 12 PBS 密封，置于37℃温箱1h
③用4毫升EP管取ED-13 2毫升，加入2微升pack酶，备用
④1h后，依次洗板（5次，250ml），脱水（20s），取出加入100
微升pack酶，放入温箱反应30min
⑤30min后，依次洗板，脱水后，加入100微升显色剂（AB混合
液）,放入温箱反应15min
⑥15min后，取出板，悬空加入50微升硫酸作为终止液
⑦在PHOMO仪测出反应值
五．实验结果与分析：
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
A 1.852 1.34 1.519 1.714 0.429 0.698 1.526 0.797 0.385 1.637 0.031六注意事项：
1一般背板加液都需要悬空滴加，注意不要碰壁2微量加样枪用完后
调到最大量程3要有准确的时间观念4 实验后及时处理实验记录。