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华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176A GL1农杆菌感受态细胞使⽤用说明书编号 名称 产品规格北京华越洋生物GX9131-‐100s AGL1农杆菌感受态细胞 10*100UL北京华越洋生物GX9131-‐100 AGL1农杆菌感受态细胞 20*100UL基本信息：AGL1农杆菌感受态细胞基因型:C58 R ecA (rif R/carb R) T i p TiBo542DT-‐DNA (strep R) S uccinamopine产品说明：AGL1菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-‐DNA，此质粒含有vir 基因（vir基因是T-‐DNA插入植物基因组必需的元件， pTiBo542DT-‐DNA 质粒自身的T-‐DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-‐DNA 顺利转移）。
pTiBo542DT-‐DNA型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予AGL1菌株链霉素抗性，适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达5×103cfu/μg。
操作⽅方法:1. 取-‐80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
每100μl感受态加1ug（体积不大于10ul）质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
2. 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
3. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-‐3天。
la sota株﹢lg1株说明书La Sota株﹢LG1株是一种用于家禽疫苗免疫的病毒株。
下面将详细介绍该株的功能、使用方法、储存条件以及对家禽免疫效果等方面的信息。
一、功能说明La Sota株﹢LG1株是一种鸡传染性支气管炎疫苗株，广泛应用于农场家禽养殖中。
该株能有效预防和控制鸡传染性支气管炎，可以在家禽养殖环境中迅速建立免疫保护屏障。
二、使用方法1.养殖环境准备：密闭、消毒良好的养殖舍是疫苗施用的基础。
确保养殖环境干燥、清洁，无疫源携带者等。
2.疫苗制备：根据饲养规模选择合适的疫苗规格，按照说明书指导将冻干疫苗加入稀释液中，搅拌均匀。
3.疫苗接种：以雾化器或滴剂器等方式进行疫苗接种，确保每只鸡都能均匀接种到疫苗。
4.免疫程序：首次接种时间一般在2-3周龄，然后每4-6周重复接种一次，直到禽群满足免疫需求。
三、储存条件1.前期制备：在-196℃的液氮罐中存储冷冻疫苗，确保疫苗的有效性。
2.使用前准备：将冷冻疫苗放在2-8℃的冰箱中解冻，但不要接触阳光直射。
3.稀释后储存：将稀释后的疫苗存放在2-8℃的冰箱中，避免冻结。
四、家禽免疫效果La Sota株﹢LG1株的使用可以提供针对鸡传染性支气管炎的有效免疫保护，下面是一些相关效果：1.显著减轻或消除家禽鸡传染性支气管炎的症状，减少禽群死亡率。
2.长期免疫：接种La Sota株﹢LG1株可以为家禽提供长期免疫效果，提高禽群的抗病力。
3.高安全性：La Sota株﹢LG1株经过科学鉴定和长期应用验证，安全有效，在养禽场广泛使用。
五、注意事项1.严格遵守疫苗使用说明书中的使用剂量、接种程序和接种时间，以免影响疫苗的免疫效果。
2.在接种过程中，注意养殖环境的卫生，尽量减少应激对禽群的干扰。
3.储存疫苗时要避免阳光直射，保持适宜的温度，避免冻结，以免疫苗失效。
4.使用过期的疫苗会降低免疫效果，所以在使用前要查看疫苗的有效期。
总结：La Sota株﹢LG1株是一种常用于家禽疫苗免疫的病毒株，主要用于预防和控制家禽鸡传染性支气管炎。
s17-1lamppir大肠杆菌使用说明s17-1 lamp pir大肠杆菌编号名称规格单位北京华越洋生物NRR00790 s17-1 lamp pir大肠杆菌300ul 支s17-1 lamp pir大肠杆菌基本信息：s17-1 lamp pir大肠杆菌菌种来源于ATCC28188，引进后视为第0代。
用接种环接种至3ml沙氏葡萄糖蛋白胨液体培养基中28℃培养至OD600=0.50，视为第1代，按照1:1的体积加入50%甘油，按照每管300μl的量分装至1.5ml的EP管中。
长期保存于-80℃。
s17-1 lamp pir大肠杆菌使用方法：s17-1 lamp pir大肠杆菌为甘油菌，内含培养基。
使用时只需要用接种环在菌种处挑去一定量的菌，接种至培养基中即可。
可以划线，也可以直接接种至液体培养基中。
1、PDA液体配方：土豆200g/L，葡萄糖20g/L2、用接种环接种至3ml PDA液体培养基中28℃培养至OD600=0.50，按照1:1的体积加入50%甘油，按照每管300μl的量分装至1.5ml的EP管中。
3、按照10%的接种量接种至100ml PDA培养基中28℃培养至OD600=0.50，按照1:1的体积加入50%甘油，按照每管1ml的量分装至1.5ml的EP管中。
4、推荐保存2代，视为安全保菌的方式s17-1 lamp pir大肠杆菌操作说明：1.使用s17-1 lamp pir大肠杆菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。
也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2.为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
s17-1 lamp pir相关菌株:TB1(DE3)大肠杆菌菌株，TB1(DE3)大肠杆菌乙型溶血性链球菌TB1(DE3)大肠杆菌菌株，TB1(DE4)大肠杆菌阴沟肠杆菌TB1(DE3)大肠杆菌菌株，TB1(DE5)大肠杆菌粘质沙雷氏菌断发毛癣菌株，断发毛癣菌金黄色葡萄球菌ATCC6538肺炎克雷伯氏菌株，肺炎克雷伯氏菌AD494(DE3)大肠杆菌菌株粪产碱杆菌株，粪产碱杆菌AGL-1根癌农杆菌粪肠球菌粪链球菌株，粪肠球菌粪链球菌ATCC15834发根农杆菌弗氏柠檬酸杆菌株，弗氏柠檬酸杆菌BJ5183菌株福氏志贺氏菌株，福氏志贺氏菌BL21 Gold PlysS(DE3)大肠杆菌菌株光滑念珠菌株，光滑念珠菌BL21 PlysS（DE3）大肠杆菌菌株红色毛癣菌株，红色毛癣菌BL21 Trxb大肠杆菌菌株桔青霉菌株，桔青霉菌BL21-AI（DE3）大肠杆菌菌株克柔假丝酵母菌株，克柔假丝酵母菌BL21-Trxb(DE3)大肠杆菌菌株痢疾志贺氏菌株，痢疾志贺氏菌BL21(DE3)-Condon Plus-RIPL 大肠杆菌菌株马红球菌株，马红球菌BL21(DE3)大肠杆菌菌株马拉色菌株，马拉色菌BL21（DE3）PlysS 大肠杆菌菌株裴氏着色真菌株，裴氏着色真菌BL21大肠杆菌菌株普通变形杆菌株，普通变形杆菌BY4742酵母菌奇异变形杆菌株，奇异变形杆菌C41(DE3) PlysS大肠杆菌菌株缺陷假单胞菌株，缺陷假单胞菌C41(DE3)大肠杆菌菌株热带念珠菌株，热带念珠菌C43(DE3)大肠杆菌菌株生孢梭菌株，生孢梭菌C43(DE3)PlysS大肠杆菌表达菌株石膏样小孢子菌，石膏样小孢子菌株DB3.1大肠杆菌宋内志贺氏菌，宋内志贺氏菌株DH5a大肠杆菌克隆菌株汤卜逊沙门氏菌，汤卜逊沙门氏菌株DH5α大肠杆菌菌株鲜绿青霉，鲜绿青霉DH10B大肠杆菌克隆菌株小肠结肠炎耶尔森氏菌，小肠结肠炎耶尔森氏菌株DH10Bac杆状病毒表达菌株须癣毛癣菌，须癣毛癣菌株EGY48双杂交酵母菌蕈状芽孢杆菌EHA105根癌农杆菌猪霍乱沙门氏菌，猪霍乱沙门氏菌株GS115毕赤酵母表达菌A4发根农杆菌,a4农杆菌株GV3101根癌农杆菌AD494（DE3）PlysS大肠杆菌菌株INVSC1酿酒酵母菌株AH109酵母双杂交菌株,AH109 JM109 大肠杆菌菌株ArcticExpress? (DE3)RP大肠杆菌菌株JM109(DE3)大肠杆菌白念珠菌JM110大肠杆菌菌株阪崎肠杆菌K-12 MG1655大肠杆菌鲍曼不动杆菌LBA4404根癌农杆菌变形链球菌ATCC25175 LBA9402发根农杆菌表皮葡萄球菌M15 大肠杆菌菌株产气肠杆菌金黄色葡萄球菌ATCC25923肠炎沙门菌MC1061大肠杆菌菌株大肠埃希菌ATCC25922 NMY51双杂交酵母菌单增李斯特菌Origami B (DE3) 大肠杆菌菌株短小芽孢杆菌Origami2(DE3)大肠杆菌菌株腐生葡萄球菌Rosetta-gami 2（DE3）PlysS大肠杆菌表达菌株副溶血性弧菌Rosetta-gami-B pLysS大肠杆菌黑曲霉Rosetta-gami(DE3)PlysS大肠杆菌菌株金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003 Rosetta-gami2(DE3)大肠杆菌菌株蜡样芽孢杆菌Rosetta-gamiB(DE3)大肠杆菌菌株酿酒酵母菌Rosetta(DE3) PlysS大肠杆菌菌株犬小孢子菌ATCC32903 Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株嗜热脂肪芽孢杆菌Rosetta2(DE3) PlysS大肠杆菌菌株苏云金芽孢杆菌Rosetta2(DE3)大肠杆菌菌株铜绿假单胞杆菌s17-1 lamp pir大肠杆菌菌株Top10大肠杆菌菌株SMD1163酵母菌Top10F'大肠杆菌菌株Stbl2大肠杆菌菌株Trans110 大肠杆菌克隆菌株Stbl3大肠杆菌TransB 大肠杆菌菌株SURE大肠杆菌克隆菌株Tuner（DE3）大肠杆菌菌株T1大肠杆菌克隆菌株WB800枯草芽孢杆菌TG1大肠杆菌克隆菌株XL1-Blue 大肠杆菌菌株Y1HGold单杂交酵母菌株XL2 blue MRF' 大肠杆菌菌株Y2Hgold酵母双杂交菌株XL2-Blue大肠杆菌克隆菌株Y187酵母双杂交菌株XL10-Gold 大肠杆菌菌株拟南芥种子KM71酵母表达菌藤黄微球菌无乳链球菌。
根癌农杆菌转基因边界11型1. 背景介绍根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）是一种土壤中常见的细菌，它可以将外源基因导入植物细胞中，是目前转基因植物的主要载体之一。
在转基因植物研究中，农杆菌转基因边界11型（Border11）起到了至关重要的作用。
Border11的特点和作用对于转基因植物的安全性和稳定性具有重要意义。
2. Border11的特点Border11通常由35S启动子、转录起始位点（TSS）和转录终止位点（TTS）组成。
它的主要特点包括：（1）T-DNA的传输。
Border11在Agrobacterium tumefaciens感染植物细胞时，起到了转移T-DNA（Ti质粒DNA）的作用。
T-DNA 中包含了外源基因和辅助基因，Border11的正确设计对于T-DNA的稳定传输至关重要。
（2）正确的转录和表达。
Border11的TSS和TTS的选择、定位和独特组合，有助于外源基因在植物细胞中的正确转录和表达。
这对于转基因植物的功能性表达和目标性研究至关重要。
3. Border11的应用Border11在转基因植物研究和应用中有着广泛的应用。
它可用于构建转基因植物的载体，植物转化载体一般包括T-DNA左右边界、外源基因、筛选标记基因等部分。
Border11的精准设计和构建对于植物转化的稳定性和高效性具有重要影响。
在转基因植物的安全性评估中也需要对Border11进行深入的研究和分析，以保证植物基因组的稳定性和安全性。
4. Border11的研究进展目前，关于Border11的研究已经取得了许多进展。
通过分子生物学、基因组学和生物信息学等多方面的研究手段，人们对Border11的结构与功能有了更深刻的理解和认识。
随着CRISPR/Cas9技术等基因编辑技术的不断发展和应用，对Border11进行的基因组编辑和定点修饰也为转基因植物研究提供了新的途径和方法。
对Border11的生物学特性和机制的研究也日益深入，这些研究成果对于转基因植物的研究和应用具有重要的推动作用。
根癌农杆菌介导的真菌转化(一) 农杆菌电击感受态制备及电击转化A 感受态的制备1) 将农杆菌菌液划线于YEB平板（50 µg/ml kana），28℃，36-48h。
2) 挑单菌落至3ml YEB试管（50 µg/ml kana）中，28℃，200rpm 培养过夜。
3) 转1ml至50ml YEB中，28℃，200rpm培养至OD600=0.8。
4) 于4℃，5000rpm，10min收集菌体。
5) 用50mL 10%的甘油（去离子水配置，湿热灭菌）洗沉淀3次（4℃，5000rpm，10min），洗涤时一定要把菌体悬浮均匀。
6) 重悬于1ml 10%甘油中（约1011个细胞/ml），可立即使用，或分装为每管50µl，液氮速冻后，-80℃保存备用。
B 电击转化1) 将1µl质粒加入到农杆菌感受态细胞中，混匀，转至无菌预冷的电击杯中。
2) 将电击杯放入电转化仪的电极之间，16kv/cm，5ms。
3) 取出电击杯，迅速加入200-300µl YEB（不加抗生素），并将混合液转入EP管中。
4) 于28℃，220rpm，2-3h。
5) 将50-100µl菌液涂布于YEB平板（50µg/ml car和50 µg/ml kana）上，于28℃培养2-3天后，挑斑鉴定。
(二) 农杆菌化学感受态制备及化学法转化A . Competent Cells1)Inoculate a single colony to 5 ml LB2)Grow at 28℃ to log phage,shaking at 250rpm3)Inoculate 2ml of the culture to 50 ml LB medium and grow to OD600=0.5 ca. 8 hours4)Chill on ice for 10 minutes5)Spin down the cells by centrifugation at 3000g(8000rpm) for 10 minutes at 4℃6)Resuspend cells in 1 ml of 20 mM CaCl27)Aliquots into 0.1 ml ,then freeze in liquid nitrogen , and store at -80 ℃B Plasmid Transformation1)Thaw competent cells on ice.2)Add 1 µg plasmid (5µl) to the competent cells and mix well.3)Freeze in liquid nitrogen for 5 min.4)Heatshock at 37℃ for 5 min.5)Add 1 ml LB and grow at 28℃ for 3 hr with shaking at 150 rpm.6)Spread cells onto LB plates containing an appropriate antibiotic and incubate at roomtemperature for 2-3 days.(三）农杆菌介导的真菌转化1 将已转入目的质粒的农杆菌接种于4mlYEB液体培养基（50µg/ml car和50 µg/ml kana）中，于28℃摇床中220rpm过夜培养（16-20h）。
AGL1 电击/电转感受态细胞AGL1 Electroporation Competent CellAGL1电击/电转感受态细胞基因型：C58 RecA (rif r/carb r) Ti pTiBo542DT-DNA SuccinamopineAGL1电击/电转感受态细胞说明：AGL1菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移）。
AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。
唯地生物开发的AGL1电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
AGL1电击/电转感受态细胞操作方法：1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
根癌农杆菌介导柑橘愈伤组织遗传转化1 柑桔材料的准备不同品种的柑桔胚性愈伤组织保存于MT固体培养基上，每20-25d继代一次。
侵染前转入悬浮MT（附加100μM乙酰丁香酮）培养基中培养4天后用于侵染。
2 农杆菌侵染液的制备1.农杆菌（保存在-70℃）在含有50 mg·L-卡那霉素的YEB选择培养基上划线培养，28℃暗培养。
2.长出菌落后，挑取单菌落在新的选择培养基上涂皿。
3.取出培养24小时后的菌落群，再用不加卡那霉素的MT（附加100μM乙酰丁香酮）液体培养基震荡培养2个小时。
4.用分光光度计测量菌液的OD600值，并用MT液体培养基调整到 OD600=0.5～1.0进行侵染。
3侵染实验1.将悬浮培养4d的愈伤组织转入稀释菌液中浸泡20-30 min。
2.用无菌滤纸吸干表面菌液，转到MT基本培养基上，19℃共培养2～3 d。
3.共培养后的愈伤组织在无菌水中轻轻漂洗数次，直至洗液变清为止，再加入含有400 mg/L头孢霉素的无菌水浸泡20 min，倾去洗液。
4.将外植体置于无菌滤纸上吸干，转入筛选培养基（根据不同的质粒载体添加不同浓度的筛选剂），28℃暗培养。
4抗性愈伤组织的选择培养和再生（以质粒载体pCAMBIA1303为例）1.愈伤组织刚转移到筛选培养基上时，应该表现为对照逐渐褐化、死亡，转化处理的愈伤组织中转化部分逐渐长出新的抗性愈伤组织。
2.将新形成的抗性愈伤组织转至新的筛选培养基上进行继代培养，当得到的抗性胚性愈伤组织达到一定量时，将一部分转入MT+甘油2%+ Cef 50 mg·L-1的胚状体分化固体培养基上。
3.有球形胚状体开始出现后，将得到的胚状体转入MT+ME 1500 mg·L-1+ Cef50 mg·L-1培养基上，使胚状体进一步长大，形成子叶型胚状体。
7-9周后，将子叶型胚状体转入MT+Cef 50 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1 +BA 0.5mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1培养基上再生芽，1个月后就可见再生芽长出。
