根癌农杆菌介导的遗传转化

根癌农杆菌介导柑橘愈伤组织遗传转化1 柑桔材料的准备不同品种的柑桔胚性愈伤组织保存于MT固体培养基上，每20-25d继代一次。

侵染前转入悬浮MT（附加100μM乙酰丁香酮）培养基中培养4天后用于侵染。

2 农杆菌侵染液的制备1.农杆菌（保存在-70℃）在含有50 mg·L-卡那霉素的YEB选择培养基上划线培养，28℃暗培养。

2.长出菌落后，挑取单菌落在新的选择培养基上涂皿。

3.取出培养24小时后的菌落群，再用不加卡那霉素的MT（附加100μM乙酰丁香酮）液体培养基震荡培养2个小时。

4.用分光光度计测量菌液的OD600值，并用MT液体培养基调整到 OD600=0.5～1.0进行侵染。

3侵染实验1.将悬浮培养4d的愈伤组织转入稀释菌液中浸泡20-30 min。

2.用无菌滤纸吸干表面菌液，转到MT基本培养基上，19℃共培养2～3 d。

3.共培养后的愈伤组织在无菌水中轻轻漂洗数次，直至洗液变清为止，再加入含有400 mg/L头孢霉素的无菌水浸泡20 min，倾去洗液。

4.将外植体置于无菌滤纸上吸干，转入筛选培养基（根据不同的质粒载体添加不同浓度的筛选剂），28℃暗培养。

4抗性愈伤组织的选择培养和再生（以质粒载体pCAMBIA1303为例）1.愈伤组织刚转移到筛选培养基上时，应该表现为对照逐渐褐化、死亡，转化处理的愈伤组织中转化部分逐渐长出新的抗性愈伤组织。

2.将新形成的抗性愈伤组织转至新的筛选培养基上进行继代培养，当得到的抗性胚性愈伤组织达到一定量时，将一部分转入MT+甘油2%+ Cef 50 mg·L-1的胚状体分化固体培养基上。

3.有球形胚状体开始出现后，将得到的胚状体转入MT+ME 1500 mg·L-1+ Cef50 mg·L-1培养基上，使胚状体进一步长大，形成子叶型胚状体。

7-9周后，将子叶型胚状体转入MT+Cef 50 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1 +BA 0.5mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1培养基上再生芽，1个月后就可见再生芽长出。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展根癌农杆菌介导的真菌遗传转化是一种广泛应用于真菌基因功能研究与基因工程改造的技术。

通过利用根癌农杆菌T-DNA插入系统，将外源DNA转移至真菌细胞中，并将其整合到其基因组特定位点中，以此实现真菌基因突变、功能分析和引入外源基因等目的。

本文将介绍根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术的原理、方法和应用，并对其研究进展进行概述。

一、技术原理根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）是一种经常被应用于植物基因工程的重要媒介，其T-DNA插入系统是实现外源基因整合的重要工具。

T-DNA是根癌农杆菌质粒中可转移DNA的一部分，其特点是，在植物感染过程中，T-DNA可被转移至寄主植物细胞内，并随后整合到其基因组中。

利用这一特点，将要转化的DNA导入到T-DNA载体中，然后插入到根癌农杆菌中，再将根癌农杆菌和真菌竹蜜菇接触，使得根癌农杆菌向真菌转移T-DNA，并通过T-DNA的插入将外源DNA整合到真菌基因组中。

二、方法简介根癌农杆菌介导的真菌遗传转化分为三个主要步骤，包括构建T-DNA载体、初始感染和筛选鉴定。

1. T-DNA载体构建T-DNA载体是根癌农杆菌之间传递转移DNA的载体，也是构建真菌遗传转化所需的载体。

在构建T-DNA载体时，需要创建flanking序列、筛选标记和转入基因。

其中，flanking序列是T-DNA插入到基因组中的标记，通常使用真核生物的基因表达元件，如启动序列或终止序列等，在T-DNA插入过程中随之整合到基因组中。

筛选标记则是指用于鉴定转化后的真菌是否包含T-DNA的标志，一般建议选择抗性基因或荧光蛋白基因。

转入基因则是要转入真菌中并施加特定的功能的外源基因。

2. 初始感染根癌农杆菌与真菌的接触是通过共培养实现的。

首先，将竹蜜菇生长在含有不同浓度的根癌农杆菌悬浮液的培养基上。

当根癌农杆菌悬浮液达到适当的浓度时，将其与真菌孢子混合，并将混合物培养在适当的时间和温度下，使根癌农杆菌向真菌细胞释放T-DNA，再经过植物激素、光照等处理，使真菌细胞产生表型变化，如生长速度快慢、菌丝分化、子实体大小等，这些都是外源DNA整合到基因组中的结果。

农杆菌的活化培养及介导的遗传转化一、目的要求通过实验掌握农杆菌的活化与培养技术与农杆菌介导获得目的基因的转化植株。

二、基本原理农杆菌共培养法最早是由Marton 等（1979 年）以原生质体为受体建立起来的，经过一系列改进后，目前已经成为最常用的转化方法。

共培养法是利用Ti 质粒系统，将农杆菌与植物原生质体、悬浮培养细胞、叶盘、睫段等共同培养的一种转化方法。

三、材料及方法1.含目的基因共整合载体或双元载体的根癌农杆菌。

2.植物幼苗。

（一）细菌培养液直接浸染法操作︰（1）无菌受体材料的准备︰叶片、睫段、胚轴、子叶等均可做受体材料，有两种来源。

取自无菌试管苗。

取自田间或温室栽培植株︰叶片、睫尖、睫段用蒸馏水冲冼1 遍后，70％乙醇洗45 秒，0.1％升汞消毒6～8 分钟，无菌水冲洗三遍，无菌滤纸吸干水分。

（2）受体材料预培养︰将无菌叶片剪成0.5cm×0.5cm 的小块或用6mm 打孔器凿成圆盘，无菌胚轴、睫切成约0.8～1cm 长的切段，接种在愈伤组织诱导或分化培养基上进行预培养，注意叶片近轴面向下︰预培养2～3 天，材料切口处刚刚开始膨大时即可进行侵染。

（3）农杆菌培养︰从平板上挑取单菌落，接种到20mL 附加相应抗生素的细菌培养液体培养基（pH7.0）中，在恒温摇床上，于27℃, 180r/ min 培养至OD600 为0.6～0.8。

取OD600 为0.6～0.8 的菌液，按1％～2％的比例，转入新配制的无抗生素的细菌培养液体培养基中，可在与上相同的条件下培养6 小时左右，OD600 为0.2～0.5 时即可用于转化；或同时加入100～500μmol/的AS；（4）侵染︰于超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿中（可根据材料对菌液的敏感情况进行不同倍数的稀释）。

从培养瓶中取出预培养过的外植体，放入菌液中，浸泡适当时间（一般1～5 分钟，不同材料处理时间不同）。

取出外植体置于无菌滤纸上吸去附着的菌液。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展根癌农杆菌介导的真菌遗传转化是一种重要的生物技术手段，被广泛应用于真菌基因工程研究和相关产业生产中。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术利用农杆菌Ti质粒中的T-DNA片段将外源基因导入真菌细胞内，使真菌细胞具有新的遗传特性。

近年来，随着生物技术的发展和研究的深入，根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究取得了令人瞩目的进展。

一、根癌农杆菌介导的真菌遗传转化原理及方法1.构建适合真菌的质粒载体，将外源基因插入T-DNA载体中，构建成适合真菌遗传转化的质粒载体。

2.将构建好的质粒载体通过农杆菌进行转化，使其含有T-DNA片段。

3.利用农杆菌与真菌细胞的接触，将质粒中的T-DNA片段导入真菌细胞内。

4.筛选和鉴定转化后的真菌株系，确认外源基因是否成功导入真菌细胞中，并对转化菌株进行鉴定和分离纯化。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术在农业生产中有着广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 抗病力提高：根癌农杆菌介导的真菌遗传转化可以实现真菌对病原菌的抗性提高，使植物在生长过程中更加健康，减少病害发生的可能性。

2. 产量增加：通过真菌遗传转化技术可以使真菌获得更好的生长特性和代谢特性，从而提高作物产量。

3. 抗逆性提高：真菌经过遗传改造后，可能对环境中的逆境条件具有更强的抵抗能力，使植物更加适应不良环境的生长条件。

4. 品质改进：真菌遗传转化技术还可以用于改进植物的品质，比如提高农作物的风味、口感等。

1. 药物生产：利用真菌遗传转化技术可以大规模生产生物药物，比如抗生素、激素等，在生物医药领域有着重要的应用。

2. 新药研发：真菌遗传转化技术可以用于研发新的药物，通过改造真菌代谢途径等方式，获得新型的生物活性化合物。

3. 医学研究：真菌遗传转化技术也可以用于医学研究领域，比如用于疾病的基因治疗、蛋白质表达等。

1. 技术改进：研究者不断优化根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术，提高转化效率和稳定性，为真菌的遗传改造提供更好的手段。

实验九植物遗传转化——农杆菌介导法一、目的了解农杆菌转化的机理；掌握农杆菌介导转化水稻的技术二、原理根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)具有跨界转移DNA的能力。

下列因子与转化过程有关：1. Ti 质粒(tumor-inducing plasmid)上的T-DNA (transferred DNA)T-DNA是农杆菌Ti质粒上能够转移到植物基因组的一段DNA序列。

T-DNA含有RB和LB两个边界，它们是25bp的正向重复序列，是T-DNA 转移的顺式作用元件。

不同类型的农杆菌其边界序列有所不同，但划线部分为完全保守序列。

置于该边界内的任何外源基因均可被转化。

LB缺失突变后农杆菌仍能致瘤，但RB缺失会导致致瘤能力丧失，这时几乎完全没有T-DNA的转移。

LB（－链）5’GT TTACACCACAA TA TATCCTG CCA 3’RB（＋链）5’TGA CAGGA TA TA TTGGCGGGTAA AC 3’2. Ti质粒上的Vir区（virulence region）操纵子转化所必需的基因有vir A、B、C、D、E、G。

其中蛋白VirD1/D2识别T-DNA边界RB和LB；VirC识别T-DNA右边界的超驱增强子；VirD2在T-DNA底链起内切酶作用造成切刻，并与T－链5’ 共价结合，带有1个核定位信号NLS；VirB形成转移复合通道；VirE2为单链DNA 结合蛋白，有2个NLS。

该操纵子的表达顺序如下：vir A和vir G组成型表达形成VirA和VirG蛋白→VirA被植物创伤信号分子激活→激活的VirA使VirG激活→激活的VirG 诱导vir C、D、E、B、F、H表达。

3. 农杆菌染色体基因组相关基因：chv A、chv B（农杆菌运动、附着）、chv D、chv E（编码单糖结合蛋白、趋化性）、psc A、att、cel（合成纤维素丝，附着）。

它们与农杆菌的趋化性和识别附着植物细胞有关。

将农杆菌作为载体成功获得转基因烟草的试验发生在1983年，其后的30多年，农杆菌介导的遗传转化技术在双子叶植物的研究中得到了长足发展。

之后，关于单子叶植物在这方面的研究却比较少，因为农杆菌寄主范围局限于双子叶植物和一些裸子植物。

单子叶植物被认为不能作为农杆菌的宿主，所以难以被转化。

因此最初人们关于单子叶植物通过根癌农杆菌介导遗传转化的研究很少，而多是采用PEG法、基因枪法及电激法等。

1根癌农杆菌转化单子叶植物的研究进展1.1水稻水稻作为单子叶植物研究的模式植物，关于根癌农杆菌介导水稻遗传转化的研究开始得比较早。

水稻的遗传转化研究从完全否定其可行性，到可以进行转化，从低频率转化到高频率，经过几十年的研究发展，已经具备了相当的理论基础和研究成果，实现了许多优质的外源基因对水稻的遗传转化[1]。

李宝健证明了水稻是可以通过农杆菌进行遗传转化的，并获得了转基因的水稻，虽然其转化频率很低，却是农杆菌介导转化单子叶植物的一大突破。

这之后，Hiei证明了水稻是可以被有效侵染的，他不仅利用胚性愈伤组织作外植体，还将粳稻的转化频率提高到28.3%，并建立了水稻的遗传转化体系。

王春萍等[2]将ThIPK2基因通过农杆菌介导法插入到籼稻科恢675中，经验证后，通过该试验结果完善了优良的遗传转化体系。

张燕红等[3]利用农杆菌介导法，将SiPEBP基因转入到秋田小町、新稻21号以及08GY30-5-4这3个新疆品种水稻中，试验结果表明，3个品种的抗性愈伤率皆达到了40%以上。

1.2玉米玉米作为三大粮食作物之一，是作为单子叶植物研究的重要对象。

1996年，Ishida等[4]选用玉米自交系A188幼胚作为受体的转基因试验，获得了世界上第一株用该方法转化的转基因玉米，从而证实玉米是能够被转化的，为玉米的遗传转化研究提供了一定的理论基础。

邢小龙等[5]将GUS作为目的基因，以玉米杂交种“郑单958”为材料，以Bar作筛选标记，试验结果表明，在侵染浓度0.6、侵染时间2h、真空处理时间10min的条件下，“郑单958”作为受体能有效提高转化效率。

实验三根癌农杆菌介导的植物遗传转化一实验目的了解植物遗传转化的方法和理论掌握根癌农杆菌介导的遗传转化技术二原理植物遗传转化技术是指通过物理的，化学的或生物学的方法，将外源的基因导入受体植物细胞中获得再生植株的转基因技术。

自1983转基因植物问世以来，至今不到20年时间里，植物转基因技术发展迅速，除了占指导地位，运用最为广泛的农杆菌介导法，还发展了10多种转基因方法，如物理方面的基因枪法，电激法，显微注射法，超声波法，激光微束法，炭化硅纤维介导法，电泳法等；化学方面PEG介导转化，脂质体介导转化；生物学方面的种质系统法如花粉介导法，花粉管通道法等。

农杆菌介导法土壤农杆菌（Agrobacterium）是一种革兰氏阳性菌，有两个种与植物转基因有关，即根癌农杆菌（Agrobacterium Tumefaciens）和发根农杆菌（Agrobacterium Rhizogenes）.它们在自然状态下具有趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠缨瘤或发状根，在离体条件下，可以在不加任何生长素的培养基中持续生长，研究表明根癌农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti 和Ri质粒,上面有一段T-DNA区，可以通过一系列过程进入植物细胞并将这一段T-DN插入到植物基因组中，这是农杆菌侵染植物后产生冠缨瘤或发状根的根本原因，因此农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系，人们可将所构建的目的基因插入到去除了致瘤基因的Ti(Ri)质粒的T-DNA区，借助农杆菌侵染受体植物细胞后T-DNA向植物基因组的高频转移和整合特性，实现目的基因对受体植物细胞的转化，然后通过植物细胞合和组织培养技术，利用植物细胞的全能性获得转基因再生植株。

农杆菌介导法转基因技术的关键是T-DNA整合受体植物基因组的过程，这一过程依赖与Ti质粒上的T-DNA区，和Vir区各种基因的表达以及一系列蛋白质和核酸的相互作用。

简略地说。

其过程是：植物细胞在受伤后细胞壁破裂，分泌高浓度的创伤诱导分子，它们是一些酚类化合物，如乙酰丁香酮（acetosyringone,AS）和羟基乙酰丁香酮（hydroxy- acetosyringone,OH-As）农杆菌对这类物质具有趋化性，首先在植物细胞表面发生贴壁，继而植物创伤分子诱导农杆菌Vir区各种基因的激活和表达。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展根癌农杆菌介导的真菌遗传转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, ATMT）是一种常用的真菌遗传转化技术，它利用根癌农杆菌作为介导者，将目标DNA转移到真菌细胞中，从而改变真菌的遗传特性。

近年来，ATMT技术在真菌遗传转化研究中得到了广泛应用，并取得了许多进展。

ATMT技术的基本原理是将目标DNA插入到根癌农杆菌的转化质粒中，然后通过存在于转化质粒中的跨界转座系统（T-DNA）将目标DNA转移到真菌细胞中。

跨界转座系统是根癌农杆菌特有的一个DNA片段，可以携带外源基因插入到真菌基因组中的随机位置。

真菌细胞会利用此外源基因来表达目标基因，并产生相应的遗传变化。

ATMT技术的优点之一是转化效率较高，可以成功转化多种真菌。

研究人员已经成功地将ATMT技术应用于多种真菌，包括担子菌门（如酵母菌、拟南芥黄链菌等）、接合菌门（如粘帚菌、丝状菌等）和半知菌门（如滑子菌、刺球菌等）。

ATMT技术也可以用于转化真菌中的不同类型的细胞，包括营养体、分生孢子和菌丝等。

近年来，ATMT技术在真菌遗传转化研究中的进展主要包括以下几个方面：ATMT技术的转化效率得到了极大的提高。

研究人员通过优化转化条件和转化质粒的构建，使ATMT技术的转化效率大幅提高，从而提高了转化真菌的成功率。

ATMT技术在真菌功能基因组学研究中的应用取得了重要进展。

ATMT技术可以通过插入性突变的方式，破坏真菌中的特定基因并观察其对真菌生长、代谢和病原性等特性的影响，从而帮助研究人员深入了解真菌的功能基因组。

ATMT技术的潜力在农业和医学领域也得到了广泛关注。

ATMT技术可以用于改良农作物和药用真菌，使其具有抗性和高产性等优良特性，从而提高农作物和药物的产量和质量。

ATMT技术在真菌遗传转化研究中已取得了显著的进展。

随着该技术的不断改进和优化，相信ATMT技术将在真菌研究和应用中发挥越来越重要的作用。

第４期范国强等：根癌农杆菌介导的悬铃木叶片遗传转化体系研究胀和叶片基部及叶脉处愈伤组织的形成，ＧＵＳ基因表达率逐渐增大；第９ｄ时，外植体边缘创伤处出现愈伤组织，叶片基部及叶脉处的愈伤组织进一步膨大（图２一Ｂ），此时ＧＵＳ基因的瞬时表达率最大（５８％）．之后，外植体的愈伤组织体积增大，叶片基部及叶脉处的愈伤组织上分化出芽的数量逐渐增多，转化外植体的ＧＵＳ基因瞬时表达率逐渐变小．从试验数据和叶片生长状态来看，预培养９ｄ为悬铃木叶片转化的最佳预培养时间．表１预培养时间对ＧＵＳ基因瞬时表达率的影响Ｔａｂｌｅ１ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅＧＵＳｇｅｎｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅＡ．ＧＵＳ基因瞬时表达Ｂ．预培养９ｄ的悬铃木叶片Ｃ．共培养３ｄ的悬铃木叶片Ａ．ＴｈｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＵＳＢ．Ｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｐｒｅｃｕｈｕｒｅｆｏｒ９ｄＣ．Ｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ３ｄ图２悬铃木叶片的遗传转化Ｆｉｇ．２ＧｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＰ．ｏｒｉｅｎｔａｌｉｌｅａｖｅｓ２．２农杆菌菌液ＯＤ６００值和浸染时间对ＧＵＳ基因瞬时表达率的影响农杆菌菌液ＯＤ６００值和浸染时间对ＧＵＳ基因瞬时表达率影响的结果（表２）表明，菌液ＯＤ６００值表２菌液ＯＤ啪值和浸染时间对ＧＵＳ基因瞬时表达率的影响Ｔａｂｌｅ２ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｏＤ枷ｖａｌｕｅａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎＧＵＳｇｅｎｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅ为０．３时，既使浸染时间为１５ｍｉｎ，ＧＵＳ基因瞬时表达率也仅为２６％；ＯＤ６００值为０．７，浸染时间为１０ｍｉｎ时，ＧＵＳ基因瞬时表达率达到６８％．ＯＤ６００值为０．９时，即使浸染时间很短，也常会因残留在外植体表面的根癌农杆菌生长过旺而掩埋整个外植体，引起外植体死亡，从而导致ＧＵＳ基因瞬时表达率下降，此外，在后续试验中也很难除净农杆菌．因此，ＯＤ６００值为０．７，浸染时间为１０ｍｉｎ可以认为是悬铃木外植体转化的最适ＯＤ６００值和浸染时间．２．３共培养时间及温度对ＧＵＳ基因瞬时表达率的影响共培养时问的长短及共培养时的温度对悬铃木外植体的转化率也有重要的影响（表３）．共培养时间太短（０或１ｄ），不利于外源基因整合到受体细胞基因组中并诱导受体细胞分化，因此，这时的ＧＵＳ基因瞬时表达率很低．当共培养２ｄ，浸染的外植体边缘有少量菌丝出现，转化效率也只有４０％；当共培养时间为３ｄ时，外植体边缘及培养基上出现乳白色菌株（图２一Ｃ），此时，ＧＵＳ基因瞬时表达率可达到最高值．之后农杆菌大量繁殖生长，很快铺满培养基并覆盖外植体表面，以致于掩埋整个外植体，使外植体因褐化而死亡，因而降低转化率．此外，随着共培养温度的升高，ＧＵＳ基因瞬时表达率随之升高，当共培养温度为２２℃时，转化率最高可达６４％．此后，随着温度的升高，ＧＵＳ基因瞬时表达率反而下降，这主要是因为在较高温度（２６。

・综述与专论・生物技术通报Ｂ１０ＴＥｃＨＮｏＬｏＧＹＢＵＬＬＥＴｌＮ２０１０年第３期根癌农杆菌介导的木霉遗传转化及应用进展范亮波李梅冀颖刘卫德蒋细良（中国农业科学院植物保护研究所农业部生物防治重点开放实验室，北京１０００８１）摘要：木霉作为土传植物病原茵的生防真菌，研究其功能基因具有重要的意义。

根癌农杆茵介导的遗传转化（ＡＴＭＴ）为木霉功能基因的研究提供了一个强有力的工具。

对根癌农杆茵介导木霉遗传转化的机理、特点、方法及其在木霉中的应用进行了综述。

关键词：根癌农杆茵木霉茵遗传转化Ｔ・ＤＮＡＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＭｅｄｉａｔｅｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．ＦａｎＬｉａｎｇｂｏＬｉＭｅｉｊｉＹｉｎｇＬｉｕＷｅｉｄｅＪｉａｎｇＸｉｌｉａｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙ如ｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｕｎｇａｉｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌａｇｅｎｔｔｏａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓｏｉｌ－ｂｏｒｎｅｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｓａｎｄｉｔｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｓｔｕｄｙｉｔ＇ｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｆｏｒｗｈｉｃｈＡＴＭＴｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔ００１．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｓａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｔｒａｎｓ—ｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．ｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｃｆａｃｉｅｎｓａｎｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．ＧｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎＴ・ＤＮＡ木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ．）属半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，是一种广泛存在于土壤中的丝状真菌。

根癌农杆菌转化单子叶植物的研究进展与对策张洁;周岩【摘要】在植物基因工程中,根癌农杆菌介导法是目前研究得较为深入、技术较为完善有效的转基因方法.但由于单子叶植物不是根癌农杆菌的天然宿主,因此阻碍了根癌农杆菌介导法在单子叶植物遗传转化研究方面的应用.随着分子生物学的迅猛发展,人们对农杆菌介导法的转化机理、影响因素不断探索与研究,使根癌农杆菌介导法被逐步应用于单子叶植物中,尤其是禾本科作物,并取得突破性进展.对农杆菌转化机理与特点、影响单子叶植物转化的因素进行介绍,综述农杆菌介导法在小麦、玉米和水稻三大作物遗传改良方面的研究进展,并从超声波处理、表面活性剂、抗氧化剂和乙酰丁香酮的添加四个方面阐述提高农杆菌转化单子叶植物转化效率的对策,以期为农杆菌转化单子叶植物的进一步改进与优化提供参考.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2013(000)005【总页数】8页(P7-14)【关键词】农杆菌;单子叶植物;研究进展;对策【作者】张洁;周岩【作者单位】河南科技学院生命科技学院,新乡453003;河南科技学院生命科技学院,新乡453003【正文语种】中文自1983年成功获得第一例农杆菌介导的转基因烟草以来，有关农杆菌介导的基因转移的应用研究逐步发展成为植物基因工程领域的研究热点，通过农杆菌介导法转化植物的研究也日益广泛和深入。

农杆菌介导法具有转化植物受体，操作易行，经济简便，可插入大片段DNA，整合于基因组上的外源基因拷贝数少且重排程度低，技术仪器要求低，转化效率高等颇多优点。

由于单子叶植物不是农杆菌的天然宿主，利用农杆菌介导法对单子叶植物进行遗传转化的研究因此受到限制。

Portrykus［1］曾认为农杆菌转化单子叶植物是不可能的。

禾谷科作物如水稻、小麦、玉米都是单子叶植物，是人类重要的粮食作物，利用基因工程技术对该类植物的研究具有十分重要的价值。

近年来，随着农杆菌介导法转化机制和影响因素的进一步研究以及转化方法的不断完善，农杆菌介导法已逐步发展成为大部分双子叶植物和一部分单子叶植物遗传转化的主流方法，以及植物基因工程中不可或缺的研究工具，具有极大的应用价值。