HPV基因分型检测试剂盒常见问题

hpv样本不合格的原因
1. 样本采集不规范呀，就好比做菜盐放多了，那味道能对吗？比如说采集的时候没有选对合适的部位，那能采集到合格的样本吗？这可不行啊！
2. 样本保存出问题啦，这不就像把珍贵的东西随手一扔，能不坏吗？像有的人随便把样本一放，温度湿度都不合适，那还能合格吗？
3. 运输过程太糟糕咯，就像护送宝贝却不小心磕了碰了。

比如运输途中剧烈摇晃，样本不就被破坏了，还怎么合格呀？
4. 采集者操作不当呀，这就跟开车不熟练一样。

要是采集者手法生疏，能取到好样本才怪呢！
5. 被污染了可咋整，就像干净的水里被滴进了脏东西。

比如采集过程中不小心碰到了其他污染物，样本不就废了吗？
6. 患者自身原因也不能忽视呀，难道不是吗？像患者近期使用了一些药物，可能就会影响样本，这多关键呀！
7. 样本量不足啊，就像做饭米都不够。

如果采集的样本量太少，那怎么能准确检测呢，肯定不合格呀！
8. 时间过长也不行呀，好比牛奶放久了会变质。

样本采集后放置时间太长，还能是合格的吗？
9. 标记错误可太要命了，这就跟寄快递写错地址一样。

要是把样本标记错了，那检测结果能对吗？
10. 有人为干扰因素呢，这多可恶啊！比如有人故意破坏样本，那还能有合格的希望吗？
我的观点结论：HPV 样本不合格的原因有很多，每一个环节都要严格把控，稍有疏忽就可能导致样本不合格，一定要重视起来啊！。

人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测标准操作规程1.目的：规范人乳头瘤病毒（HPV）反向点杂交（RDB）基因分型检测操作流程，保证检测结果的准确性。

2.应用范围: PCR实验室。

3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。

3.2 文件审核：实验室主管。

3.3 文件审批：实验室主任。

3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。

4. 参考文献:4.1《中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒说明书》4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书5. 内容：5.1 检测方法：PCR-反向斑点杂交法。

5.2 实验原理：选取人乳头瘤病毒（HPV）基因组保守序列为扩增靶序列，设计通用引物和特异型别探针（包括16种中高危型和3种低危型HPV）,将RNA逆转录为cDNA后，利用生物素标记的通用引物对cDNA进行PCR 扩增，得到的产物与固定在膜上的特异型别探针按照碱基互补配对的原理杂交。

若PCR产物和探针完全配对，则膜条上相应探针位置捕获到标有生物素的PCR产物，并和亲和素–辣根过氧化物酶偶联，再与四甲基联苯胺（TMB）反应呈现较强的深蓝色，若与探针不完全配对，则经严格杂交和洗涤后膜条上相应探针位置不能捕获到标有生物素的PCR产物，结果无显色反应或显很淡的背景色。

5.3 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集。

5.3.1 标本类型：尿道分泌物、宫颈脱落细胞、疣体细胞等。

5.3.2 标本采集：5.3.2.1 道分泌物：在无菌条件下，用棉拭子伸入尿道内,旋转数周并停留片刻后取出。

5.3.2.2 宫颈脱落细胞:在无菌条件下，用宫颈刷伸入宫颈管内2cm,旋转数周并停留片刻后取出。

5.3.2.3 疣体细胞: 用无菌棉拭子在疣体部位刮取上皮细胞。

5.3.3 标本保存：采集的标本置于盛有1ml生理盐水的小试管中，2～8℃保存。

5.3.4 运送条件：标本长途运送时采用冰壶。

5.3.5 标本拒收标准：污染标本。

三家国产试剂盒HPV分型检测结果一致性比较分析余红;陆其兵【摘要】目的比较分析三家国产试剂盒HPV分型检测结果的一致性.方法收集近2个月来由之江检测的阳性标本82份,阴性标本10份,分别用3家国产试剂进行HPV基因分型检测2次,并进行比较.结果三家试剂结果重复性分别是之江95.6％,凯普96.7％,安普利95.6％.三家试剂检测结果完全一致率为51.1％(47/92),部分一致率为24.9％(22/92),不一致率为25.0％(23/92).单一型感染的一致率86.4％(32/37),多重感染完全一致率为22.2％(10/45),部分一致率为48.9％(22/45).结论三家国产试剂检测结果一致性不理想.建议患者进行前后治疗的效果对比,最好选在同一家医院进行检测,这样才具有可比性.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2019(021)003【总页数】3页(P320-322)【关键词】人乳头瘤病毒;国产试剂盒;结果一致性【作者】余红;陆其兵【作者单位】224400 江苏省阜宁县人民医院检验科;224400 江苏省阜宁县人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R373.9;R446.11人乳头瘤病毒（HPV）是常见的一种性传播疾病的病原体，分为高危型和低危型，其中高危型HPV感染已被证实与宫颈癌的发生密切相关，HPV检测在宫颈癌筛查中越来越受到重视[1]。

目前HPV检测主要采用分子生物学方法，我国注册的HPV检测试剂盒大部分检测L1基因序列，也有检测全基因组或HPV E6/7序列，但分子生物学方法检测技术也并不完美，这些设计无法顾全到HPV型别全覆盖和型别特异等问题。

本文选用了三家国产试剂进行HPV分型检测并进行比较，发现三家国产试剂检测结果的一致性很不理想。

材料与方法1 仪器与试剂仪器为上海复星SLAN-96S实时荧光扩增仪，三家国产试剂分别是上海之江生产的HPV分型试剂：6+11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82，其中两个低危不分型。

硕世hpv21分型说明书
摘要：
硕世HPV21分型检测试剂盒说明书
正文：
硕世HPV21分型检测试剂盒是一种用于检测女性宫颈脱落细胞样本中的HPV病毒（人乳头瘤病毒）的检测产品。

该产品适用于临床实验室、卫生防疫部门等场所进行HPV病毒的检测。

产品由试剂盒和仪器设备两部分组成，操作步骤包括样本采集、试剂准备、样本处理和酶标检测。

首先，使用样本收集器获取女性宫颈脱落细胞样本，然后将样本放入病毒保存液中，震荡混匀后静置5分钟。

接着，吸取上层液体并放入离心机离心5分钟，吸取上清液后弃去样本。

然后将酶标抗体、阴性对照和阳性对照分别加入相应的孔中，再将样本处理液加入样本孔中，轻轻摇匀后放入37℃恒温箱中静置1小时。

最后，用洗板机将孔内液体洗去，放入酶标仪中进行检测，并记录检测结果。

结果判读分为阴性和阳性。

阴性表示未感染HPV病毒，阳性表示感染了HPV病毒，需进一步进行分型检测。

在操作过程中，应严格遵循操作规程，避免样本污染或试剂失效。

试剂盒应存放在2-8℃冰箱中，酶标抗体有效期为12个月。

人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂技术审查指导原则（征求意见稿）一、前言本指导原则旨在指导注册申请人对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。

本指导原则是针对人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要详细阐明理由，并对其科学合理性进行验证，提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

二、适用范围人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）属于乳多空病毒科的乳头瘤病毒属，是一种小分子的、无被膜包被的、环状双链DNA病毒，基因组长约8000碱基对（bp），分为3个功能区，即早期转录区（E区）、晚期转录区（L区）和非转录区（长控制区，LCR）。

HPV通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。

该病毒只能感染人的皮肤和粘膜上皮细胞，能引起人类皮肤的多种乳头状瘤或疣及粘膜生殖道上皮增生性损伤。

HPV广泛存在于自然界，据统计70%～80%的女性在其一生中会有至少一次的HPV感染。

但大多数感染为自限性，超过90％的感染的女性会出现一种有效的免疫应答，在没有任何长期的健康干预时在6到24个月之间可以清除感染。

而持续性的高危型HPV感染则是导致宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要原因。

根据HPV各型别致病力大小或致癌危险性大小不同可将感染生殖道和肛门的HPV分为低危型和高危型两大类。

HPV分型试剂准备标准操作规程
1.目的
规范人乳头瘤病毒(HPV)基因型别试剂准备操作。

2.范围
HPV 分型的PCR 反应液配制。

3.操作人员
基因扩增室在岗工作人员。

4.操作步骤
4.1 HPV 扩增试剂准备：
4.1.1 试剂解冻：从一20 ℃冰箱中取出HPV 扩增试剂盒Ι，然后从试剂盒中取出PCR反应管、HPV-DNA提取液及阴、阳性质控品，室温复融，复融后的试剂震荡混匀并瞬时离心5 秒。

4.1.2 准备PCR 管：HPV反应液管试剂盒已经配制并分装好，每次根据实际反应数量取出相应反应液后传至到样本处理区的传递窗内。

4.1.3 从4℃冰箱取出HPV 扩增试剂盒Ⅱ，和HPV-DNA提取液及阴、阳性对照一起转移到样品处理区的传递窗内。