网织红细胞染色液操作步骤及注意事项

网织红细胞报告引言网织红细胞（reticulocyte）是指还保留有核的红细胞前体细胞，其通过骨髓释放入循环中，并最终成熟为无核的红细胞。

网织红细胞反映了人体红细胞的再生能力和骨髓功能的活跃程度。

本文将介绍网织红细胞的意义、影响因素以及相关的检测方法。

网织红细胞的意义网织红细胞作为红细胞再生的指标，可以用来评估人体骨髓功能和红细胞的更新速度。

正常情况下，网织红细胞的百分比是很低的，但在某些疾病状态下，这个比例会显著增加。

因此，通过检测网织红细胞的比例，可以评估红细胞再生的活跃程度，进而判断疾病的类型和程度。

影响网织红细胞比例的因素1. 缺铁性贫血缺铁性贫血是指机体缺乏足够的铁元素，导致红细胞无法正常合成血红蛋白的一种贫血类型。

在这种情况下，骨髓会释放更多的网织红细胞来进行红细胞的再生，以弥补缺铁造成的红细胞数量减少的情况。

因此，在缺铁性贫血患者中，网织红细胞比例往往会显著增加。

2. 贫血贫血是指血液中红细胞数量减少或者红细胞功能异常，无法满足组织需氧的状态。

在贫血患者中，由于红细胞的量减少，骨髓会增加网织红细胞的合成和释放，以弥补红细胞的减少。

因此，贫血患者的网织红细胞比例也会显著增加。

3. 血液失血大量的血液失血会导致红细胞数量急剧减少，进而刺激骨髓释放更多的网织红细胞来进行红细胞再生。

因此，在血液失血的情况下，网织红细胞比例也会升高。

4. 骨髓异常骨髓异常可以导致红细胞生成障碍，进而影响网织红细胞的生成和释放。

例如，骨髓增生异常综合症（MDS）等疾病可以导致网织红细胞比例明显增加。

网织红细胞的检测方法网织红细胞的检测可以通过流式细胞仪或者显微镜等方法进行。

以下是常用的流式细胞仪的检测步骤：1.准备血液样本：采集适量的静脉血，将血液样本放入抗凝剂处理。

2.处理血液样本：将血液样本进行稀释处理，使白细胞和红细胞分散均匀。

3.流式细胞仪检测：将样本放入流式细胞仪中进行检测。

流式细胞仪通过使用荧光染料或抗体标记网织红细胞，以便于识别和计数。

一、实训背景网织红细胞是红细胞前体，其计数对于评估骨髓造血功能和红细胞生成情况具有重要意义。

本实训旨在通过学习网织红细胞计数的操作方法，掌握其计数原理和注意事项，提高对血液学检验的认识和技能。

二、实训目的1. 了解网织红细胞计数的基本原理和操作方法。

2. 掌握显微镜下观察和计数网织红细胞的技术。

3. 学会分析网织红细胞计数结果，并应用于临床实践。

三、实训内容1. 网织红细胞计数原理网织红细胞计数是通过染色技术将网织红细胞与成熟红细胞区分开来，然后进行计数。

常用的染色剂有煌焦油蓝、新亚甲蓝等。

染色后，网织红细胞呈现蓝绿色网状或点粒状物质，而成熟红细胞则呈红色。

2. 网织红细胞计数操作方法（1）制备血涂片：取新鲜血液2滴，加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，立即混匀，置37℃下15～20分钟。

（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

（3）染色：将染好的血涂片放入染色缸中，用染液染色5～10分钟。

（4）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。

（5）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞数。

（6）计算：网织红细胞分数 = 计数的网织红细胞数 / 1000网织红细胞绝对值 = 红细胞数× 10^12 / L × 网织红细胞分数3. 注意事项（1）染色时间要适中，过长或过短都会影响计数结果。

（2）观察时要选择红细胞分布均匀的部位，避免计数误差。

（3）计数时要仔细区分网织红细胞与HbH包涵体。

（4）计算时要确保数值准确。

四、实训结果与分析本次实训，我们按照操作步骤进行了网织红细胞计数，并计算出网织红细胞分数和绝对值。

通过对计数结果的分析，我们了解到患者的骨髓造血功能和红细胞生成情况。

五、实训总结通过本次实训，我们掌握了网织红细胞计数的操作方法，了解了其计数原理和注意事项。

同时，我们也认识到，在实际操作中，要严格按照操作步骤进行，确保计数结果的准确性。

此外，我们还学习了如何分析计数结果，并将其应用于临床实践。

网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。

【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。

Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。

Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。

Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。

【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。

（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。

（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。

（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。

2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。

煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。

染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。

（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。

Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。

网织红细胞染色方法
网织红细胞染色方法是通过使用特定的染色剂对红细胞进行染色以便观察或分析其形态和数量。

以下是一种常用的网织红细胞染色方法——布氏染色法（Brilliant Cresyl Blue staining method）：
1. 准备药剂：将布氏染色液配制成工作液：将100 mg的布氏染色剂溶解在100 mL生理盐水或缓冲液中。

2. 标本制备：取少量全血，用血红蛋白溶解液将红细胞溶解，离心沉淀，弃上清液。

将沉淀洗涤2-3次，离心每次10分钟，将上清液弃去。

最后悬浊于约5 mL的生理盐水或缓冲液中。

3. 染色：取适量悬浊液，加入等量的布氏染色液，混匀并孵育15-20分钟。

4. 洗涤：用PBS等缓冲液将悬液洗涤3次，每次离心、弃上清液。

5. 准备涂片：取适量洗涤后的悬液，滴于玻璃片上，用另一片玻璃片将其涂布均匀。

6. 干燥：将涂片自然风干或用吹风机吹干。

7. 镜检：将干燥的涂片放置于显微镜下，使用油浸物镜进行观察。

网织红细胞
会显蓝色，而成熟的红细胞会显淡红色。

需要注意的是，每次操作时应保持无菌操作，同时注意药物的安全使用和废弃物的处理，确保实验室安全。

网织红细胞染色液(Reticulocyte Stain)简介：网织红细胞是晚幼红细胞到完全成熟的红细胞之间的过度型细胞，由于其细胞浆中尚存在嗜碱性的RNA 物质，用网织红细胞染色液进行活体染色后，胞浆中镜检可见有浅蓝或深蓝色的网状结构。

Leagene 网织红细胞染色液由新亚甲蓝或煌焦油蓝等组成，呈中性，用于网织红细胞活体染色，利用本染色液所染出的结果，背景颜色明亮清晰，而且不受长时间过度染色的影响。

该染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 新鲜全血或EDTA 抗凝全血2、 细胞计数板3、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、 将Reticulocyte Stain 与病人全血以一定比例混合，室温静置或更久。

2、 按常规做成血液涂片。

3、 显微镜下观察或油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。

染色结果：染色后网织红细胞胞浆中含有浅蓝或深蓝色的网状结构。

计算：网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000网织红细胞绝对数(个/L)=网织红细胞百分数×红细胞数/L注意事项：1、 该染色法仅限试管法操作。

编号 名称 DM0130 DM0130 Storage Reticulocyte Stain 50ml 100ml RT 避光使用说明书 1份2、染色时间要充足，混合后不易立即涂片，当室温较低时，染色时间应相应延长或置于37℃恒温箱。

3、血液涂片应厚薄均匀，不使红细胞重叠，以免影响染色效果。

4、血细胞涂片染色要求新鲜全血或EDTA抗凝血。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

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