(三)网织红细胞计数

「参考值」成年人0.005～0.015 绝对值（25～75）×109/L平均60×109/L 儿童0.02～0.06 「临床意义」网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，经煌焦油蓝染液进行活体染色后胞浆中可见有蓝绿色的网状结构，故名网织红细胞，Heilmyer氏根据其发育阶段把它分为五型：O型：是有核的网织红细胞，胞浆内含有网织物者此型仅见于正常骨髓中。

I型：红细胞几乎被网织物充满，此型亦仅见于正常骨髓中。

II型：位于红细胞中央线团样结构，开始松散、此型大量存在于骨髓中。

Ⅲ型：网织结构稀小，呈不规律枝点状排列，末梢血中可见少量。

IV型：胞浆中嗜碱物质很少呈单独的细颗粒粒可短丝状，正常血液中的网织细胞大多见于此型。

为了充分利用从网织红细胞发育过程中获得的有关红细胞生成活性的全部信息，除计数网织红细胞外，确定网织红细胞的成熟分型是十分必要的，从外周血中正常情况下能检测到Ⅲ型网织红细胞约0.2～0.3，IV型约0.7～0.8，但在激活的红细胞生成中还能检测到I型和II型网织红细胞并且Ⅲ型网织红细胞明显增多，这将对红细胞生成研究提供良好信息，对临床诊断提供有力帮助。

网织红细胞增多：表示骨髓红细胞生成旺盛，常见于溶血性贫血，特别是急性溶血（高达0.6～0.8）。

急性失血后5～10天网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。

网织红细胞减少：见于再生障碍性贫血，溶血性贫血再生危象时，典型再生障碍性贫血，网织红细胞计数常低于0.005。

网织红细胞绝对值低于15×109/L为再生障碍性贫血的诊断标准之一。

网织红细胞计数网织红细胞是未完全成熟的红细胞。

红细胞由骨髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟的红细胞。

将其分为五型：花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。

●仪器型号：Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置●检测原理：一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。

然后将该样品送入流动的池中。

一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。

前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。

光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。

⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。

通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。

与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。

散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。

对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。

⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。

随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。

通过测●试剂：⑴CELLPACK（EPK）⑵RET SEARCHⅡ（RED）●标本吸入量：⑴手工模式130lμ⑵自动进样器模式200lμ●静脉血采血方法：抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24小时室温保存。

●操作步骤：⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。

⑵要在允许空白值内：WBC RBC HGB PLT0.3⨯109/L 0.02⨯1012/L 1g/L 10⨯109/L⑶检测质控数值合格。

⑷标本的测量：手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行数字键输入标本的编号，按吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。

网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。

【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。

Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。

Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。

Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。

【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。

（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。

（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。

（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。

（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。

2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。

煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。

染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。

（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。

Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。

网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。

原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。

网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。

材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。

操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。

室温下可保存6个月。

血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。

2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。

3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。

4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。

计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。

2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。

3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。

4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。

5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。

网织红计数
操作：
1、取小试管1支加10g/L新亚甲蓝盐水溶液20ul
2、加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2ul于上述试管中，混匀。

3、室温下放臵10-15min后，取1滴制成薄片。

4、油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数。

计算：
网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000
网织红细胞绝对数（个/L）=网织红细胞百分比数*红细胞数/L
【参考区间】
网织红细胞百分数
成人： 0.005-0.025
新生儿： 0.03-0.06
儿童： 0.005-0.025
网织红细胞绝对数：成人：（24-84）*10*9/L
【分型】
Ⅰ型：致密丝：团状红细胞充满网状物，见于骨髓。

Ⅱ型：松散：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。

Ⅲ型：枝点状：红细胞网状结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。

Ⅳ型：细颗粒状：红细胞内为分散的，细颗粒，短丝状网状物，见于外周血。

网织红细胞计数的标准操作程序
【目的】指导网织红细胞计数。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。

【方法原理】网织红细胞计数是尚未完成成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后浅蓝或深蓝色的网状结构。

【试剂】10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1 g，枸橼酸纳0.4 g，氯化钠
0.85 g溶于双蒸水1ml中，过滤后备用。

【标本要求】静脉抗凝血（EDTA-K2）或毛细血管血。

【操作程序】
1、于小试管中加2滴网织红细胞染色液。

2、加入血液2滴于上述试管中，混匀。

3、室温静置15-20分钟后，取用1滴制成簿片。

4、油镜下检查10个红细胞中网织红细胞数。

【参考区间】成人、儿童0.5 0.015新生儿0.03 0.06
【质量控制】
1、染色时间不能过短，室温低时，放37C温箱。

2、最好制片2张，每张计数10红细胞，避免分布不均匀引起的误差。

涂片要簿而均
匀，不使红细胞重叠。

3、为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。

4、用瑞士-吉姆萨染液复染后可使网织红细胞计数结果减少。

5、染液与血液比约为1： 1,严重贫血时可适量增加血液的比例。

【临床意义】
1、增加：表示骨髓造血功能旺盛，各种增生性贫血均可增多，溶血性贫血增加有为
显著，巨幼细胞性贫血、缺铁性贫血在用维生素B12或铁剂治质后显著增多，表示有治疗效果。

2、减少：常见于再生障碍性贫血。

网织红细胞计数网织红细胞是未完全成熟的红细胞。

红细胞由骨髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟的红细胞。

将其分为五型：花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。

●仪器型号：Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置●检测原理：一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。

然后将该样品送入流动的池中。

一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。

前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。

光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。

⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。

通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。

与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。

散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。

对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。

⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。

随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。

通过测●试剂：⑴CELLPACK（EPK）⑵RET SEARCHⅡ（RED）●标本吸入量：⑴手工模式130lμ⑵自动进样器模式200lμ●静脉血采血方法：抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24小时室温保存。

●操作步骤：⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。

⑵要在允许空白值内：WBC RBC HGB PLT0.3⨯109/L 0.02⨯1012/L 1g/L 10⨯109/L⑶检测质控数值合格。

⑷标本的测量：手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行数字键输入标本的编号，按吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。

网织红细胞计数及临床意义一、概述1、网织红细胞（reticulocyte，Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞略大于成熟红细胞(直径8.0～9.5μm)，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料（如煌焦油蓝、新亚甲蓝等）活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。

2、网织红细胞自骨髓释放到外周血液后仍具有合成血红蛋白的能力，约1～2天后，过渡为成熟红细胞ICSH将网织红细胞分为4型（网织红细胞分型及特征）。

二、检测方法与原理1、普通显微镜法：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色网状结构。

2、血液分析仪法：特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占红细胞的百分数(Ret%)，并可根据RNA含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。

（一）普通显微镜法1、染色液①新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液：新亚甲蓝0.1g溶于100ml枸橼酸氯化钠溶液内(1体积30g/L枸橼酸钠溶液与4 体积9.0g/L氯化钠溶液混合)，充分混匀，待染料溶解后过滤。

②煌焦油蓝生理盐水染色液：煌焦油蓝1.0g、枸橼酸钠0.4g、氯化钠0.85g，溶于双蒸馏水100ml中，过滤后备用。

2、操作①在小试管中加入染色液2滴；再加人静脉血（或末梢血)2滴，混后放置37℃恒温水箱中。

②10分钟后取1滴混悬液制成涂片③在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。

或以Miller 窥盘计数法计数：Miler窥盘为一个厚为1mm、直径为19mm 的圆形玻片，玻片上用微细刻线画出两个正方形格子，大方格B面积为小方格A的9倍。

置于目镜内，计数小方格内红细胞数(将小方格内数得红细胞数乘以9，折算成一个大方格内的红细胞数)和大方格内的Ret数。

（窥盘结构）3、结果计算①直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000②窥盘计数法：网织红细胞比例=大方格内网织红细胞数/（小方格内红细胞数×9）③网织红细胞绝对数(个/L)=网织红细胞百分数x红细胞数/L④网织红细胞生成指数(RPI)：RPI=（网织红细胞百分数/2）×(患者血细胞比容/0.45)三、参考区间1、网织红细胞比例：成年人：0.005～0.015新生儿：0.03～0.06；儿童：0.005～0.0152、网织红细胞绝对数成年人：（24～84）×10%/L四、注意事项1、标本应在4小时内进行处理。

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在进行网织红细胞计数之前，需要进行一系列准备工作。