吖啶橙荧光染色试剂盒

特别的“染料”给特别的你：Invitrogen独家的SYBR GreenER【字体：大中小】 时间：2006年05月23日来源：生物通------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------摘要：要解决SYBR Green的非特异问题，当然不是只有一条途径。

所谓条条道路通罗马，不同于Qiagen或者ABI利用的是提高DNA聚合酶的特异性，“曲线救国”，Invitrogen公司采用直接改造SYBR Green的方法，发展出更特异更灵敏的荧光染料——SYBR® GreenER™ qPCR Reagent System。

SYBR Green系列荧光染料由于低毒、灵敏度度优于EB而日渐受到科研用户的欢迎，这个原属于Molecular Probes公司的专利随着Probes被并购进入Invitrogen 的大家庭，Invitrogen要优化它自然更方便啦。

SYBR® GreenER™被Invitrogen称为新一代定量PCR荧光检测方法的核心技术之一，相比原有的SYBR Green，最大的优势的发光强度更强更明亮，使得原来检测不到的低丰度DNA 的信号更容易被检测到——这也就意味着荧光染料的检测灵敏度提高了，从原来的0.1ng左右提高到6pg，应用在定量PCR检测中就使得基因表达数据分析更为可靠。

此外，对荧光染料构造的修饰使得减少了染料分子对PCR反应的抑制作用。

SYBR GreenER和原有的SYBR Green一样适用相同的滤光片，并不需要增加新的仪器或者新滤光片(filters)。

SYBR GreenER可以看作是SYBR Green的兼容升级版了，具体的升级优化如下：RealTime ready 智力大冲浪！答对5题，即获赠美国傲仕优质保温杯！升级step one：快速反应与高灵敏度增加结果可靠性SYBR GreenER这种新颖的DNA结合染料的一个显著特点就是在检测信号上有了大幅度提高，同时也由于SYBR GreenER消除了一些原有SYBR Green对PCR反应的影响（荧光染料结合入DNA小沟，阻碍扩增反应），因此反应时间得到了提升。

吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。

它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。

溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。

吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。

在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。

在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。

通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。

正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。

这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。

需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。

吖啶橙染色试剂盒产品组成：产品编号BB-4138规格100assaysAO染色液500ul试剂B 10ml说明书 1产品简介：吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。

其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。

它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。

因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

使用方法：1、染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。

取100μL试剂B加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。

2、收集样本细胞，细胞数量在10X105个以内。

3、用PBS洗涤细胞两次。

4、用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬，使细胞浓度约106个/ml。

5、取95ul细胞悬液，加入5ul AO染色液。

6、轻轻混匀后4℃避光孵育10-15分钟。

7、滴加至载玻片上，用盖玻片封片。

8、荧光显微镜检测结果。

最大激发波长为488nm。

结果分析 ：在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检：AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色。

当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒或黄绿色碎片。

相关产品：产品 产品号 产品 产品号 Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒 BB-4101 细胞周期检测试剂盒 BB-4104 Annexin V-EGFP/PI凋亡试剂盒 BB-4102 JC-1线粒体膜电位试剂盒 BB-4105 MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒 BB-4201 Caspase 3 活性检测试剂盒 BB-4106 CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒 BB-4202 Caspase 8 活性检测试剂盒 BB-4107 WST-1细胞增殖毒性检测试剂盒 BB-4203 Caspase 9 活性检测试剂盒 BB-4108 MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒 BB-4204 Caspase 10 活性检测试剂盒 BB-4112 Hoechst33342/PI双染试剂盒 BB-4131 细胞凋亡形态学检测试剂盒 BB-4123 DAPI染色试剂盒 BB-4133 Rhodamine 123染色试剂盒 BB-4137 细胞存活率检测试剂盒 BB-4122 AO/EB双染试剂盒 BB-4132。

吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，可发出不同颜色的荧光。

其染色原理主要基于它能够与细胞中的DNA和RNA结合，并且具有膜通透性，能够透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。

在应用方面，吖啶橙可以用于检测凋亡细胞。

在凋亡过程中，染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，使得吖啶橙能够染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。

此外，吖啶橙还可以用于检测坏死细胞，因为坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

此外，吖啶橙还可以用作移码突变的诱变剂。

在DNA复制过程中，吖啶橙能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，导致DNA链增加或缺失一个碱基，从而造成移码突变。

需要注意的是，虽然吖啶橙是一种非常有用的荧光指示剂和细胞染色剂，但在使用过程中也需要遵守相应的安全操作规范，避免直接接触皮肤和眼睛，并确保在通风良好的环境中使用。

doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.23.0611CRISPR/Cas9介导的KIFC 1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响范晓静1,2，魏雅岚2,3，叶洲杰2,3，朱丽萍2,3，王心睿1,2,3CRISPR/Cas9-mediated Knockout of KIFC 1 Inhibits Proliferation and In-duces Apoptosis of Cervical Cancer CellsFAN Xiaojing 1,2, WEI Yalan 2,3, YE Zhoujie 2,3, ZHU Liping 2,3, WANG Xinrui 1,2,31. Medical Research Center, Fu jian Children ’s Hospital (Fu jian Branch of Shanghai Children ’s Medical Center), Fuzhou 350011, China;2. NHC Key Laboratory of Technical Evaluation of Fertility Regulation for Non-human Primate (Fujian Maternity and Child Health Hospital), Fuzhou 350013, China;3. Medical Research Center, Fujian Maternity and Child Health Hos-pital, Fuzhou 350001, ChinaCorrespondingAuthor:WANGXinrui,E-mail:*****************.cnAbstract: Objective To investigate the functions of the KIFC 1 gene in tumor cells and its effect on the proliferation of cervical cancer cells. Methods We designed sgRNAs targeting the KIFC 1 gene and constructed a recombinant plasmid based on the pSpCas9 (BB)-2A-GFP vector, which was co-transfected into HeLa cells. We screened monoclonal knockout cell lines through flow cytometry sorting, limited dilution inoculation of cells, and sequencing. RT-qPCR, Western blot, and immunofluorescence were used to detect the transcription and protein expression levels of KIFC 1 in knockout cells. Cell phenotypes such as nucleus and microtubule cytoskeleton were observed using phase-contrast microscopy and fluorescence confocal microscopy. Cell proliferation, cell cycle, and apoptosis were analyzed by growth curve plotting, EdU labeling, and acridine orange staining. Results The deletion of the KIFC 1 gene resulted in the abnormal phenotypes of HeLa cells, with increased numbers of multinuclei, micronucleus, and disordered microtubules. The cell cycle was disrupted, accompanied with a significant increase in the ratio of late apoptotic cells and a decrease in cell proliferation (all P <0.05). Conclusion KIFC 1 gene deletion affects the assembly of microtubules and cell division in HeLa cells, leading to abnormal nuclear morphology, chromatin elimination, cell cycle arrest, and increased cell apoptosis.Key words: CRISPR/Cas9; KIFC 1; Cervical neoplasms; HeLa cells; Cell apoptosis; Cell division Funding: National Natural Science Foundation of China (No. 82101678); Joint Funds for the Innovation of Science and Technology, Fujian Province, China (No. 2021Y9160); Science and Technology Program of Fujian Health Commission (No. 2020QNA018); Natural Science Foundation of Fujian Province (No. 2020J05278) Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.摘 要：目的 探讨KIFC 1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响。

吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。

在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。

吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。

当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。

如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。

在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。

作为结果，亮一些的橙色荧光发生。

通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。

吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。

它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。

自固化磷酸钙骨水泥的制备及其性能评估王剑龙;何由;程哲;郑治;朱凯迪【摘要】背景:前期研究发现,乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)可改善磷酸钙骨水泥的抗压强度与降解性能.目的:在前期研究的基础上制备具有更好力学性能、生物相容性及降解性的自固化磷酸钙骨水泥.方法:采用液相沉淀法制备乳酸-羟基乙酸共聚物/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥,使复合骨水泥中β-磷酸三钙的含量分别为5%,10%,15%,20%,25%,30%,检测复合骨水泥及磷酸钙骨水泥的凝固时间、抗压强度、弹性模量及降解性能,筛选最佳β-磷酸三钙含量,进行细胞培养实验.分别以磷酸钙骨水泥浸提液(对照组)、PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥浸提液(实验组)、含有体积分数 10%胎牛血清及 1%青霉素-链霉素双抗的α-MEM培养基(阴性对照组)、含体积分数6.4%苯酚的液体(阳性对照组)培养MC3T3-E1细胞,培养1,3,5 d, MTT 法检测细胞增殖,同时观察细胞形态变化;培养1,3 d,检测培养液中乳酸脱氢酶活性.在PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥与磷酸钙骨水泥表面接种MC3T3-E1细胞,3 d后进行扫描电镜观察.结果与结论:①随着β-磷酸三钙含量的增加,复合骨水泥的初凝时间、终凝时间均有所增加,与磷酸钙骨水泥初凝时间、终凝时间比较无差异(P ＞ 0.05);②复合骨水泥的抗压强度及弹性模量均高于磷酸钙骨水泥,其中以β-磷酸三钙含量为 20%的复合骨水泥抗压强度最高,弹性模量也较好,因此实验选择β-磷酸三钙含量为 20%的PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥进行细胞实验;复合骨水泥的降解性能优于磷酸钙骨水泥;③随着培养时间的延长,实验组细胞吸光度、乳酸脱氢酶活性逐渐升高,不同时间点的吸光度值、乳酸脱氢酶活性与阴性对照组比较均无差异;实验组细胞生长良好;④在PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥表面的MC3T3-E1细胞生长正常,能充分伸展,在材料表面伸出伪足,能够与材料紧密贴附;⑤结果表明,含20%β-磷酸三钙的PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥复合材料具有较普通磷酸钙骨水泥更佳的抗压强度、弹性模量及降解性能,且细胞相容性好,无明显细胞毒性.%BACKGROUND: Preliminary studies have found that poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) can improve the compressive strength and degradability of calcium phosphate cement. OBJECTIVE: To prepare a self-setting calcium phosphate cement which has better mechanical properties, biocompatibility and degradability on the basis of the previous findings. METHODS: Beta-tricalcium phosphate (β-TCP), pure calcium phosphate cement (CPC) and PLGA powder were mixed at different mixing ratios for preparation of PLGA/β-TCP/CPC. Setting time, compressive strength, elastic modulus and degradation properties of the composite bone cement were evaluated to screen the optimal level o f β-TCP. MC3T3-E1 cells were cultured in CPC extract (control), PLGA/β-TCP/CPC extract (experimental), α-MEM containing 10% fetal bovine serum and 1% penicillin-streptomycin double antibody (negative control), and 6.4% phenol liquid (positive control). MTT method was used to detect cell proliferation at 1, 3, 5 days after culture, and lactate dehydrogenase activity in culture media was detected at 1 and 3 days after culture.MC3T3-E1 cells were seeded on the surface of PLGA/β-TCP/CPC and pure CPC respectively, and were then observed by scanning electron microscopy after 3 days. RESULTS AND CONCLUSION: Initial setting time and final setting time among of the composite bone cement were increased with the increasing of β-TCP content, but had no significant difference from those of the CPC (P ＞ 0.05). The compressive strength and elastic modulus of the composite bone cement were higher than those ofthe CPC, and moreover, the composite bone cement with 20% β-TCP exhibited the highest compressive strength and higher elastic modulus as compared with the other groups. Therefore, PLGA/20% β-TCP/CPC was selected in the cell test. Moreover, the degradation properties of the composite bone cement were also better than those of the CPC. (3) With the growth of culture time, cell absorbance value and lactate dehydrogenase activity were gradually increased in the experimental group, and no difference existed between the experimental group and the negative control group. The cells in the experimental group also grew well.(4) MC3T3-E1 cells grew well and fully extended on the surface of PLGA/β-TCP/CPC, and cell pseudopodia on the material surface were tightly adhered to the material. To conclude, PLGA/20% β-TCP/CPC has better compressive strength, elastic modulus, degradation properties and cytocompatibility relative to the CPC, and moreover, the composite bone cement has no obvious cytotoxicity.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)018【总页数】7页(P2800-2806)【关键词】磷酸钙骨水泥;β-磷酸三钙;PLGA;生物材料;骨科材料;性能研究;国家自然科学基金【作者】王剑龙;何由;程哲;郑治;朱凯迪【作者单位】中南大学湘雅三医院骨科,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅医学院,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅医学院,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅三医院骨科,湖南省长沙市 410000;湖南航天医院,湖南省长沙市 410000【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction在临床工作中上，因为感染、创伤及病理性骨折等各种原因导致的骨缺损及骨不连日渐增多，临床处理上，特别是大面积的骨缺损修复尤为困难，临床上通常需要骨移植来治疗[1-4]。